SN-T 3506-2013布氏桿菌病熒光偏振試驗操作規(guī)程

中華人民共和國出入境檢驗檢疫行業(yè)標準布氏桿菌病熒光偏振試驗操作規(guī)程Procedureoffluorescencepolarisationassayforbrucellosis2013-09-16實施國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局I本標準按照GB/T1.1—2009給出的規(guī)則起草。本標準由國家認證認可監(jiān)督管理委員會提出并歸口。布氏桿菌病熒光偏振試驗操作規(guī)程本標準規(guī)定了布氏桿菌病熒光偏振試驗技術要求。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法GB19489實驗室生物安全通用要求預防氣溶膠感染的安全措施。所有廢棄物應按照GB19489中的有關規(guī)定處置。4試驗原理溶液中的分子作隨機轉(zhuǎn)動。分子的大小是影響轉(zhuǎn)動速率的主要因素，與其成反比關系。因而小分子較大分子轉(zhuǎn)動得快。如果給分子標記上熒光色素，通過68.5°角度的轉(zhuǎn)動時間即可通過測量水平和垂直的偏振光強度來確定。因而，大分子比轉(zhuǎn)動快的小分子發(fā)射更多的診斷布氏桿菌病時，布氏桿菌光滑型LPS的小分子量片段OPS(平均22kD),標記上異硫氰熒光素(FITC),用作抗原。然后加到待檢血清5試劑和材料5.596孔黑色平底微量板。6儀器和設備26.2微量板振蕩器。6.3溫箱：溫度范圍應滿足16℃~26℃。被檢樣品為血清樣品。樣品應避免含有顆粒物，如出現(xiàn)顆粒物應作離心處理。溶血樣品可用于本8操作方法8.1將試劑和樣品恢復至室溫(16|C～26℃)。8.2將25×濃縮反應緩沖液用蒸餾水作1:25稀釋。制備稀釋的反應緩沖液應避免有顆粒物，配制后的溶液放置室溫保存，并在1個月兩使用。血清樣品加入其余相應孔中。在向微量板加樣或加液體時應避免氣泡產(chǎn)生。8.5將反應板置室溫(16℃~269)孵育3min～5~min-后罪英光偏振儀(激發(fā)波長485nm,發(fā)射波8.6取10μL結(jié)合物加入到每個反應孔中，置振蕩器上中速拆蕩2min8.6取10μL結(jié)合物加入到每個反應孔中，置振蕩器上中速拆蕩2min對照或樣品的偏振值計算見式(1):當陽性對照的偏振值在120mP>250mP之間；陰性對照的偏振值在70mP～95進行被檢樣品的結(jié)果判定。若陽性對照或陰性對照的偏振值超出規(guī)定的范圍，需要根據(jù)儀器手冊的說結(jié)果判定計算見式(2):A-FP-C…(2)被檢樣品為豬血清時，△<10mP,樣品判為陰性；10mP≤A≤20mP,樣品判為可疑；A>20mP,樣品判為陽性。可疑樣品應雙份重復試驗。如果兩次樣品的△均小