2019分子診斷檢驗程序性能驗證指南

分子診斷檢驗程序性能驗證指南第PAGE第10頁共11頁20190220190215日發(fā)布20190215日實施分子診斷檢驗程序性能驗證指南范圍本指南適用于申請認可或已獲認可的醫(yī)學實驗室對分子診斷相關(guān)檢測程序PCRSanger(NGS)、原位雜交等，其他分子診斷使用的檢驗程序/方法可參考使用。本文件適用于醫(yī)學實驗室采用的經(jīng)確認的檢驗程序。（規(guī)范性引用文件（部分）適用于本指南。WS/T420-2013《臨床實驗室對商品定量試劑盒分析性能的驗證》WS/T492-2016《臨床檢驗定量測定項目精密度與正確度性能驗證》WS/T505-2017《定性測定性能評價指南》YY/T1261-2015《HER2（熒光原位雜交法YY/T1459-2016《人類基因原位雜交檢測試劑盒》術(shù)語和定義對于本指南，GB/T29791.1-2013/ISO18113-1：2009）中的定義適用。下列術(shù)語和定義適用于本指南。可報告范圍reportablerange體外診斷醫(yī)療器械性能特征已被驗證的測量區(qū)間。[GB/T29791.1-2013/ISO18113-1：20093.46注1]總則性能驗證的時機檢驗程序常規(guī)應(yīng)用前。于儀器主要部件故障，儀器搬遷，設(shè)施、環(huán)境的嚴重失控等。（）性能驗證的參數(shù)PCRSanger二代基因測序(NGS)和原位雜交等。PCR量正確度、測量精密度（含測量重復(fù)性和測量中間精密度、測量不確定度、分析特異性（含抗干擾能力、分析靈敏度、檢出限和定量限、線性區(qū)間（可報告區(qū)間PCR擾能力、交叉反應(yīng)等。SangerNGS宜選用方法符合率。果檢驗程序適用樣本類型包括除腫瘤組織/（如血漿同操作人員間的驗證，驗證程序可參照本指南相關(guān)內(nèi)容制定。實驗室應(yīng)根據(jù)檢測項目的預(yù)期用途以及生產(chǎn)制造商聲明，選擇對檢測結(jié)果質(zhì)量有重要影響的參數(shù)進行驗證。不同技術(shù)平臺、樣本類型以及預(yù)期用途不同時，所需驗證的性能指標宜有所側(cè)重。性能驗證的判斷標準驗證結(jié)果的判斷標準是廠商或研發(fā)者在試劑盒或檢測系統(tǒng)說明書中聲明的性能指標。實驗前準備一份樣本需進行多次試驗時，對樣本進行分裝保存，避免反復(fù)凍融。量控制，確保檢測系統(tǒng)工作狀態(tài)正常。實驗室設(shè)施及環(huán)境符合分析系統(tǒng)工作要求。儀器經(jīng)過校準，各項性能指標合格。試劑和校準品滿足要求。負責實施性能驗證的人員應(yīng)了解驗證方案，制定驗證計劃，并組織實施。涉及病理形態(tài)學的樣本（如組織、細胞學樣本等集。效率滿足要求。核酸提取效率的評價宜包括：核酸濃度、純度及完整性。性能驗證要求規(guī)定的程序。定性項目的性能驗證方法符合率驗證要求方法、經(jīng)驗證性能符合要求滿足臨床預(yù)期用途的方法（ISO15189實驗室使用的相同檢測方法。驗證方案5（/低擴增的樣本，一般不少于10例樣本。注1：罕見或少見病種的項目，可酌情減少樣本例數(shù)。注2：若弱陽性/低擴增樣本不好獲取，可用適當稀釋陽性樣本獲得類似的效果。注3：/表：方法符合率驗證參比方法總數(shù)陽性陰性陽性aba+b候選方法陰性cdc+d總數(shù)a+cb+da+b+c+d陽性符合率=a/(a+c)×100%陰性符合率=d/(b+d)×100%總符合率=(a+d)/(a+b+c+d)×100%4.3。檢出限驗證要求物質(zhì)時，或以定量形式表達定性結(jié)果時，應(yīng)進行檢出限的驗證。驗證方案（系總核酸濃度和突變序列所占比例兩個方面進行評價。520（54圍之內(nèi)。判斷標準如果是5次重復(fù)檢測，必須100%檢出靶核酸；如果是20次檢測，必須檢出至少18次靶核酸。示例和Sanger序 于因異如的測，均應(yīng)別行測的證確不變類各自檢限建使已知變度的包含有檢變類的經(jīng)福馬固石包埋細系合或床樣將稀釋至家明檢限度及于低該度一梯濃照家聲的序深度對系濃樣進測（本數(shù)得于5個每樣檢濃不少于3個如果95%出濃以的樣檢到靠異則檢限證過。/（5490（6.1.5。交叉反應(yīng)驗證要求因型的方法，應(yīng)在待測核酸濃度水平驗證其它基因型對待測核酸測定的影響。驗證方案對于病原體核酸檢測，取一定濃度與待測核酸可能存在交叉反應(yīng)的病原體加入樣本保存液或經(jīng)確認為陰性的樣本中，與常規(guī)樣本一樣處理，至少重復(fù)檢測3（如測序等樣本，與常規(guī)樣本一樣處理，至少重復(fù)檢測3次。判斷標準抗干擾能力驗證要求G（實際可能存在的干擾物質(zhì)及達到的濃度也應(yīng)評估抗凝劑和樣本保存液等對結(jié)果的影響。驗證方案實驗室可根據(jù)實際情況選擇驗證方案。（劑3對照組。分別在實驗組和對照組中加入弱陽性樣本（量小于10%，與常規(guī)樣本3判斷標準方案1：弱陽性樣本檢測仍為弱陽性結(jié)果，則驗證通過。證濃度下，干擾物質(zhì)對測定有顯著影響。原位雜交技術(shù)分析敏感性和特異性驗證要求至少200個與探針特定對應(yīng)的基因組目標序列應(yīng)被用來進行分析敏感性和特異性驗證。驗證方案樣本至少來自5個不同個體，至少50個（用于驗證遠離著絲粒的探針）或100（用于驗證近著絲粒探針胞進行原位雜交檢測。判斷標準敏感性和特異性均不低于90%。定量項目性能驗證分子診斷定量檢測項目的性能驗證請參見CNAS-GL037《臨床化學定量檢驗程序性能驗證指南》。特定性能驗證PCR分析系統(tǒng)的性能驗證。核酸提取效率驗證要求核酸提取效率包括核酸純度，核酸提取產(chǎn)率和完整性。驗證方案聲明的可提取的核酸濃度。A260/2802入一定體積（小于總體積10%）已知濃度的待測核酸，另一份（B）加入同體積AB公式計算核酸提取得率，重復(fù)三次測定，計算平均值。核酸提取產(chǎn)率=

AB

×100%凝膠電泳，與待測核酸標準物比較。判斷標準DNA，A260/2801.7-1.9；RNA，A260/2801.8-2.0。核酸提取產(chǎn)率：核酸提取得率應(yīng)不低于廠家聲明或?qū)嶒炇抑贫ǖ臉藴?。c無明顯降解。擴增效率驗證驗證要求致時，定量結(jié)果才準確。如果懷疑PCR驗證方案104-6Ct（K（EE=10-1/K-1判斷標準樣本和標準品的擴增效率均≥90%且≤110%。上機測序的性能驗證驗證要求保證測序結(jié)果的可靠性。驗證方案DNA