酶標(biāo)分析儀檢定規(guī)程

1酶標(biāo)分析儀檢定規(guī)程本規(guī)程適用于酶標(biāo)分析儀的首次檢定、后續(xù)檢定和使用中檢驗(yàn)。酶標(biāo)分析儀型式評(píng)價(jià)和樣機(jī)試驗(yàn)中有關(guān)計(jì)量性能試驗(yàn)可參照?qǐng)?zhí)行。酶標(biāo)分析儀(以下簡(jiǎn)稱儀器)是依據(jù)酶標(biāo)記的免疫復(fù)合物與酶的相應(yīng)底物能夠產(chǎn)生顯色反應(yīng)，顯色程度與被檢測(cè)樣品中待測(cè)抗體(或抗原)的含量相關(guān)，根據(jù)顯色物吸光度值確定待測(cè)物質(zhì)含是?不同待測(cè)顯色物質(zhì)有其各自的特征吸收譜線，并遵守郎伯-比爾(Lambert-Bee人定律，對(duì)待測(cè)物質(zhì)進(jìn)行定量分析的儀器。bert-Beer定律的表達(dá)式如下：式中：A——物質(zhì)的吸光度；T—物質(zhì)的透射比；a—物責(zé)的吸光系數(shù)；c——物質(zhì)的濃度。儀器主要甫光源系統(tǒng)、單色器系統(tǒng)、樣品室、檢測(cè)器等組成。儀器類別I——單波長(zhǎng)/雙波長(zhǎng)、多通道；Ⅱ——單波長(zhǎng)、單通道；Ⅲ——波長(zhǎng)庫(kù)續(xù)可調(diào)式、單通道/多通道。3計(jì)量性能要求儀器的計(jì)量性能要求如表1所示。儀器類別定性性/nm誤差吸光度重復(fù)性/%靈敏度通道差異I士0.005士3士1.5Ⅱ士1.5士0.03Ⅲ士0.034通用技術(shù)要求4.1外觀與初步檢查24.1.2儀器應(yīng)平穩(wěn)置于水平無(wú)震動(dòng)的工作臺(tái)上。各調(diào)節(jié)旋鈕、按鍵和開(kāi)關(guān)均能正常工儀器在不接地的狀態(tài)下，試驗(yàn)電壓500V時(shí)，電源進(jìn)線與殼體之間的絕緣電阻不小儀器檢定時(shí)環(huán)境條件要求如表2所示。表2環(huán)境條件要求溫度濕度電壓(220士22)V光線振動(dòng)噪聲磁場(chǎng)電場(chǎng)儀器檢定用設(shè)備如表3所示。表3儀器檢定用設(shè)備交流電壓表萬(wàn)用表(4位半數(shù)字)2(45～65)Hz,0.5級(jí)3試驗(yàn)電壓500V,1.0級(jí)453有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書(shū)中峰值波長(zhǎng)標(biāo)稱值為(405,450,492(或490),620(或630)±2)nm的標(biāo)準(zhǔn)干涉濾光片①,或在儀器使用波長(zhǎng)范圍內(nèi)均勻選取的4塊標(biāo)準(zhǔn)濾光片。5.1.3.2光譜中性濾光片吸光度標(biāo)稱值分別為0.2,0.5,1.0,1.5(不確定度≤0.01)2。5.1.3.3酶標(biāo)分析儀用靈敏度溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(不確定度≤5%)。表4檢定項(xiàng)目檢定項(xiàng)目首次檢定后續(xù)檢定外觀檢查十十十十十十十 吸光度示值誤差十十十吸光度重復(fù)性+十十靈敏度十+通道差異十十十手2經(jīng)過(guò)維修后可能對(duì)儀器有較大影響時(shí)，其后續(xù)檢定按首次檢定進(jìn)5.3檢定方法5.3.1外觀與初步檢查按4.1的要求進(jìn)行。檢定前儀器應(yīng)預(yù)熱20min。5.3.2示值穩(wěn)定性的檢定選用492nm波長(zhǎng)或儀器特有的專一波長(zhǎng)，將吸光度標(biāo)稱值1.0的光譜中性濾光片，平放在微孔酶標(biāo)板的空板架上，以空氣為參比，測(cè)量并記錄儀器的初始示值，5min后記錄儀器示值一次，10min后再次記錄儀器示值。求出后兩次吸光度示值的最大值，各類儀器按公式(1)計(jì)算示值穩(wěn)定性r:5.3.3波長(zhǎng)示值誤差和波長(zhǎng)重復(fù)性的檢定5.3.3.1對(duì)Ⅲ類儀器，用峰值波長(zhǎng)為405,450,492,620nm的4片標(biāo)準(zhǔn)干涉濾光片或在儀器使用波長(zhǎng)范圍內(nèi)均勻選取的4塊標(biāo)準(zhǔn)濾光片，分別置于儀器出光孔前或平放在微孔酶標(biāo)板的某一位置(標(biāo)準(zhǔn)干涉濾光片平面需與入射光束垂直),自短波向長(zhǎng)波逐點(diǎn)測(cè)出濾光片的波長(zhǎng)-------吸光度示值(例如：測(cè)量峰值波長(zhǎng)405nm標(biāo)準(zhǔn)干涉濾光片時(shí)，將波長(zhǎng)調(diào)到低于標(biāo)準(zhǔn)波長(zhǎng)20nm即385nm,然后，以1nm的改變幅度測(cè)量至高于標(biāo)準(zhǔn)4波長(zhǎng)20nm即425nm),求出相應(yīng)的峰值波長(zhǎng)λ;。重復(fù)測(cè)量3次，取其平均值。測(cè)得波長(zhǎng)平均值與標(biāo)準(zhǔn)波長(zhǎng)之差為波長(zhǎng)示值誤差，按公式(2)計(jì)算波長(zhǎng)示值誤差△λ,其最大值與最小值之差為波長(zhǎng)重復(fù)性δ。用同樣的方法檢定其他3點(diǎn)。儀器波長(zhǎng)示值誤差和波長(zhǎng)重復(fù)性結(jié)果的報(bào)告，應(yīng)以每個(gè)波長(zhǎng)(405,450,492,620nm)或儀器特有的專一波長(zhǎng)下，通過(guò)測(cè)量、計(jì)算得到的波長(zhǎng)示值誤差和波長(zhǎng)重復(fù)性給出。干涉濾光片在各標(biāo)稱波長(zhǎng)下的透射比(干涉濾光片平面需與入射光束垂直),繪制波長(zhǎng)-AA5.3.4.2對(duì)于吸收池固定的儀器，先用空吸收池調(diào)整儀器零點(diǎn)，再將光譜中性濾光片放入樣品室中，連續(xù)測(cè)量3次，記錄儀器示值，并計(jì)算平均值。5.3.4.3吸光度示值誤差△A按公式(5)計(jì)算：A,——吸光度標(biāo)準(zhǔn)值。5儀器吸光度示值誤差結(jié)果的報(bào)告，以每個(gè)波長(zhǎng)(405,450,492,620nm)或儀器特有的專一波長(zhǎng)下，通過(guò)測(cè)量、計(jì)算得到的吸光度示值誤差最大值給出。5.3.5吸光度重復(fù)性的檢定選用450nm波長(zhǎng)或儀器特有的專一波長(zhǎng)，將吸光度標(biāo)稱值為0.5或1.0的光譜中性濾光片平放在微孔酶標(biāo)板的空板架上，以空氣為參比，于固定的某一孔位重復(fù)測(cè)量6次，記錄儀器示值，并計(jì)算平均值，按公式(6)計(jì)算RSD值，以實(shí)驗(yàn)結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差值(RSD值)表示儀器的吸光度重復(fù)性：x——n次測(cè)量結(jié)果的吸光度平均值；5.3.6靈敏度的檢定選用4506波長(zhǎng)或儀器特有的專一波長(zhǎng)，使用量程適合并經(jīng)檢定合格的A級(jí)加樣器，在未包被搶原或抗體的微孔酶標(biāo)板的某一凡中加入350μL濃度值為5mg/L的酶標(biāo)分析儀用來(lái)觸度溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，測(cè)量吸光度值。5.3.7通道差異的檢定對(duì)I、山類儀器，選用450nn波長(zhǎng)或儀器特有的專一波長(zhǎng)，將服光度標(biāo)稱值為1.0的光譜中性濾光片平放在微孔酶標(biāo)板的空板架上，先后置于多全通道的相應(yīng)位置(例如：對(duì)于8通道儀器可從A1～H1或A2～N2作為起始位置),以空氣為參比，測(cè)量并記錄每一通道的至少6次吸光度值(例如A通道可測(cè)量A1~46或A2～A7),多個(gè)通道的差異結(jié)果報(bào)告用全部測(cè)量數(shù)據(jù)的極差值表示，按公式(1)、計(jì)算通道差異δa:式中：Am——多個(gè)通道中測(cè)量結(jié)果的吸光度最大值；5.3.8絕緣電阻的檢定用500V兆歐表，測(cè)量?jī)x器電源進(jìn)線端與機(jī)殼或接地端子)間的絕緣電阻。5.4檢定結(jié)果的處理METR5.4.1以上檢定的各項(xiàng)數(shù)據(jù)均需記錄在檢定記錄紙上，其中有關(guān)項(xiàng)目的結(jié)果應(yīng)填寫完整或注明在檢定證書(shū)或檢定結(jié)果通知書(shū)上。5.4.2按本規(guī)程檢定合格的儀器，發(fā)給檢定證書(shū)；不合格的儀器，發(fā)給檢定結(jié)果通知書(shū)，并注明不合格項(xiàng)目的數(shù)據(jù)。5.5檢定周期6附錄A酶標(biāo)儀靈敏度溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)制備方法酶標(biāo)儀靈敏度溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)采用重鉻酸鉀純物質(zhì)配制成質(zhì)量濃度為5mg/L的溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，以0.05mol/L硫酸為基體。A,10.05mol/L硫酸溶液的配制在500ml.燒杯中加入400ml.蒸餾水，用移液管吸取2.7ml.濃硫酸加入燒杯中攪拌均勻后放入1000ml.容量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度線，搖勻備用。A.2含鉻量5mg/L重鉻酸鉀溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的配制A.2.1在分析天平上準(zhǔn)確稱取0.2829g重鉻酸鉀，置于100mL燒杯中，用0.05mof/1,硫酸溶液溶解后，移入500mL,容量瓶中，用少量0.05mol/L硫酸溶液洗燒杯若干次.洗液放入容量瓶中，用0.05mof/L.硫酸溶液稀釋至刻度線，搖勻備用，此溶液濃度為A.2.2用移液管吸取質(zhì)量濃度為200mg/L的重鉻酸鉀溶液2.5mL放入100ml.容量瓶中、用0.05mol/I.硫酸溶液稀釋至刻度線，搖勻，此溶液質(zhì)量濃度為5mg/L,即檢定酶標(biāo)儀靈敏度的溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。7檢定記錄格式標(biāo)準(zhǔn)器證書(shū)號(hào)不確定度(或準(zhǔn)確度