YY-T 1897-2023 正式版 納米醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià) 遺傳毒性試驗(yàn) 體外哺乳動(dòng)物細(xì)胞微核試驗(yàn)

中華人民共和國(guó)醫(yī)藥行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)納米醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià)遺傳毒性試驗(yàn)體外哺乳動(dòng)物細(xì)胞微核試驗(yàn)國(guó)家藥品監(jiān)督管理局發(fā)布前言 I引言 Ⅱ1范圍 12規(guī)范性引用文件 3術(shù)語(yǔ)和定義 25受試物及對(duì)照的準(zhǔn)備 36胞質(zhì)分裂阻斷法微核試驗(yàn) 37結(jié)果判定、試驗(yàn)數(shù)據(jù)分析和報(bào)告 4參考文獻(xiàn) 61本文件由全國(guó)醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)納米醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià)分技術(shù)委員會(huì)Ⅱ納米醫(yī)療器械對(duì)人體的潛在風(fēng)險(xiǎn)已受到廣泛關(guān)注。遺傳毒性試驗(yàn)主要用于預(yù)測(cè)受試物的潛在致癌風(fēng)險(xiǎn)時(shí)有其局限性。與非納米尺度的醫(yī)療器械產(chǎn)品相比，醫(yī)療器械產(chǎn)品中的處理體系中存在多種阻礙細(xì)胞攝取納米材料的成分。因此，現(xiàn)行的遺地評(píng)價(jià)醫(yī)療器械中納米材料的遺傳毒性。經(jīng)濟(jì)合作與發(fā)展組織(OrganizationforEconomicCo-rials,WPMN)于2014年在納米材料產(chǎn)品安全性系列文件第43號(hào)《納米材料產(chǎn)品遺傳毒性：OECD專南性文件的基礎(chǔ)上進(jìn)行一定調(diào)整。中國(guó)食品藥品檢定研究院(中檢院)基于研發(fā)機(jī)構(gòu)代表討論，提出納米材料遺傳毒性評(píng)價(jià)組合方法，國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化指導(dǎo)性技術(shù)文件GB/Z42246—2022《納米技術(shù)納米材料遺傳毒性試驗(yàn)方法指南》為遺傳毒性評(píng)價(jià)方法選擇的總1納米醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià)遺傳毒性試驗(yàn)體外哺乳動(dòng)物細(xì)胞微核試驗(yàn)本文件給出了評(píng)價(jià)納米醫(yī)療器械或用于醫(yī)療器械的納米材料的體外哺乳動(dòng)物細(xì)胞微核試驗(yàn)方法，通過(guò)測(cè)定細(xì)胞暴露于納米醫(yī)療器械或用于醫(yī)療器械的納米材料供試液后的含微核細(xì)胞數(shù)，評(píng)價(jià)其是否具有潛在遺傳毒性風(fēng)險(xiǎn)。本文件適用于采用永生化細(xì)胞胞質(zhì)分裂阻斷法微核試驗(yàn)評(píng)價(jià)納米醫(yī)療器械或用于醫(yī)療器械的納米材料的遺傳毒性。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于GB/T16886.3醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià)第3部分：遺傳毒性、致癌性和生殖毒性試驗(yàn)YY/T0870.6—2019醫(yī)療器械遺傳毒性試驗(yàn)第6部分：體外哺乳動(dòng)物細(xì)胞微核試驗(yàn)3術(shù)語(yǔ)和定義GB/T16886.3和YY/T0870.6界定的以及下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。組合有或含有納米材料的醫(yī)療器械。經(jīng)充分表征的材料和/或物質(zhì)(包括陽(yáng)性對(duì)照試劑和陽(yáng)性對(duì)照材料)并已證實(shí)用于體外微核試驗(yàn)時(shí)，可在試驗(yàn)系統(tǒng)中得到具有重復(fù)性的陽(yáng)性結(jié)果。經(jīng)充分表征的物質(zhì)和/或材料(包括介質(zhì)陰性對(duì)照和陰性對(duì)照材料)并已證實(shí)用于體外微核試驗(yàn)時(shí)，可在試驗(yàn)系統(tǒng)中得到具有重復(fù)性的陰性結(jié)果。2中國(guó)倉(cāng)鼠肺細(xì)胞系(CHL)、中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞(CHO)和中國(guó)倉(cāng)鼠肺細(xì)胞系(V79)核型穩(wěn)定且已積損傷后修復(fù)功能降低，導(dǎo)致基于CHL、CHO和V79開(kāi)展的體外微核試驗(yàn)假陽(yáng)性率較高。為避免假陽(yáng)細(xì)胞對(duì)納米材料的攝取能力是考察納米材料是否充分暴露于細(xì)胞試驗(yàn)體系的關(guān)鍵。宜使用適宜的技術(shù)驗(yàn)證所使用的細(xì)胞系對(duì)受試物(所含納米材料)在本試驗(yàn)通常使用S9混合液作為活化系統(tǒng)。大鼠肝S9可b)CHL細(xì)胞通常使用含10%胎牛血清、1%青鏈霉素的RPMI1640培養(yǎng)液培養(yǎng)；c)TK6細(xì)胞通常使用含10%滅活馬血清、2%丙酮酸鈉和1%青鏈霉素的RPMI1640培養(yǎng)液3細(xì)胞毒性和被細(xì)胞攝取的情況有關(guān)，應(yīng)結(jié)合納米材料的特性及應(yīng)用c)介質(zhì)陰性對(duì)照使用配制受試物的介質(zhì)；常用陽(yáng)性試劑對(duì)照見(jiàn)YY/T0870.6—2019中表1;a)應(yīng)包含至少3個(gè)配制濃度，每個(gè)濃度至少包括2個(gè)重復(fù)。c)根據(jù)細(xì)胞毒性設(shè)置配制濃度范圍。細(xì)胞毒性使用胞質(zhì)分裂阻滯增殖指數(shù)(cytokinesis-blockproliferationindex,CBPI)或復(fù)制指數(shù)(replicationindex,RI)評(píng)估。d)如浸提液原液或可以給予的最高濃度條件下未見(jiàn)明顯細(xì)胞毒性(與空白細(xì)胞對(duì)照組比較相對(duì)細(xì)胞活力不低于70%),通常以2倍～3倍設(shè)置濃度間隔；當(dāng)供試品存在細(xì)胞毒性時(shí)，應(yīng)以試驗(yàn)生率應(yīng)控制在(55±5)%。各處理組以5倍～10倍間距設(shè)置。所選擇的濃度范圍應(yīng)包括無(wú)細(xì)胞毒性濃度至產(chǎn)生中度細(xì)胞毒性的濃度，以獲得較好的量效關(guān)系。如濃度效應(yīng)曲線較為陡細(xì)胞培養(yǎng)液中多種成分可影響細(xì)胞對(duì)納米材料的攝取能力，如含血清的4續(xù)作用約2個(gè)細(xì)胞倍增時(shí)間)或延遲的共同處理(細(xì)胞與受試物共培養(yǎng)后，更換同時(shí)含受試物與CytoB的培養(yǎng)液繼續(xù)作用約2個(gè)細(xì)胞倍增時(shí)間)的方法，從而保證納米材料與細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)在無(wú)Cy-反應(yīng)時(shí)間可能對(duì)納米材料微核檢出率有一定影響。為保證納米材料經(jīng)細(xì)胞充分?jǐn)z取，需設(shè)置3h～6h處理組(無(wú)和有代謝活化)、24h處理組(無(wú)代謝活化)和48h處理組(無(wú)代謝活化),開(kāi)展體外微核試驗(yàn)。如納米材料需更長(zhǎng)攝取時(shí)間(結(jié)合納米材料的作用機(jī)制及攝取能力檢測(cè)數(shù)據(jù)等判定),可設(shè)7.1.1按照YY/T0870.6—2019進(jìn)行結(jié)果判定。同時(shí)應(yīng)結(jié)合細(xì)胞對(duì)納米材料的攝取能力對(duì)結(jié)果進(jìn)行b)介質(zhì)：56)是否使用胞質(zhì)分裂阻斷劑，所用試6LDH試驗(yàn))No.43.GenotoxicityofManufacturedNanomaterials:ReportoftheOECDexpertmeeting[7]GonzalezL,SandersonBJS,Kirthegenotoxicityassessmentofnanomaterials[J].Mutagenesis,2011,26(1):185-191.[8]KirklandD,PfuhlerS,takinginvitrogenotoxicitytestECVAMWorkshop[J].MutatRes,2007,628(1):31-55.[9]MullerL.In-vitrogenotoxicitytests[10]Willmann