第二篇薄層色譜法

第二篇薄層色譜法(第二法)

6原理

在酸性條件下，食品中的糖精鈉用乙醚提取、濃縮、薄層色譜分離、顯色后與標(biāo)準(zhǔn)比較，進(jìn)行定性和半定量測(cè)定。

7試劑

7.1乙醚：不含過(guò)氧化物。

7.2無(wú)水硫酸鈉。

7.3無(wú)水乙醇及乙醇(95%)。

7.4聚酰胺粉：200目。

7.5鹽酸(1＋1)：取100mL鹽酸，加水稀釋至200mL。

7.6展開(kāi)劑

7.6.1正丁醇＋氨水＋無(wú)水乙醇(7＋1＋2)。

7.6.2異丙醇＋氨水＋無(wú)水乙醇(7＋1＋2)。

7.7顯色劑

溴甲酚紫溶液(0.4g/L)：稱(chēng)取0.04g溴甲酚紫，用乙醇(50%)溶解，加氫氧化鈉溶液(4g/L)1.1mL調(diào)節(jié)pH為8，定容至100mL。

7.8硫酸銅溶液(100g/L)：稱(chēng)取10g硫酸銅(CuSO4·5H2O)，用水溶解并稀釋至100mL。

7.9氫氧化鈉溶液(40g/L)。

7.10糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱(chēng)取0.0851g經(jīng)120℃干燥4h后的糖精鈉，加乙醇溶解，移入100mL容量瓶中，加乙醇(95%)稀釋至刻度。此溶液每毫升相當(dāng)于1mg糖精鈉(C6H4CONNaSO2·2H2O)。

8儀器

8.1玻璃紙：生物制品透析袋紙或不含增白劑的市售玻璃紙。

8.2玻璃噴霧器。

8.3微量注射器。

8.4紫外光燈：波長(zhǎng)253.7nm。

8.5薄層板：10cm×20cm或20cm×20cm。

8.6展開(kāi)槽。

9分析步驟

9.1樣品提取

9.1.1飲料、冰棍、汽水：取10.0mL均勻試樣(如樣品中含有二氧化碳，先加熱除去。如樣品中含有酒精，加4%氫氧化鈉溶液使其呈堿性，在沸水浴中加熱除去)置于100mL分液漏斗中，加2mL鹽酸(1+1)，用30，20，20mL乙醚提取三次，合并乙醚提取液，用5mL鹽酸酸化的水洗滌一次，棄去水層。乙醚層通過(guò)無(wú)水硫酸鈉脫水后，揮發(fā)乙醚，加2.0mL乙醇溶解殘留物，密塞保存，備用。

9.1.2醬油、果汁、果醬等：稱(chēng)取20.0g或吸取20.0mL均勻試樣，置于100mL容量瓶中，加水至約60mL，加20mL硫酸銅溶液(100g/L)，混勻，再加4.4mL氫氧化鈉溶液(40g/L)，加水至刻度，混勻，靜置30min，過(guò)濾，取50mL濾液置于150mL分液漏斗中，以下按9.1.1自“加2mL鹽酸(1＋1)”起依法操作。

9.1.3固體果汁粉等：稱(chēng)取20.0g磨碎的均勻試樣，置于200mL容量瓶中，加100mL水，加溫使溶解、放冷。以下按9.1.2自“加20mL硫酸銅溶液(100g/L)”起依法操作。

9.1.4糕點(diǎn)、餅干等蛋白、脂肪、淀粉多的食品：稱(chēng)取25.0g均勻試樣，置于透析用玻璃紙中，放入大小適當(dāng)?shù)臒瓋?nèi)，加50mL氫氧化鈉溶液(0.8g/L)，調(diào)成糊狀，將玻璃紙口扎緊，放入盛有200mL氫氧化鈉溶液(0.8g/L)的燒杯中，蓋上表面皿，透析過(guò)夜。量取125mL透析液(相當(dāng)12.5g樣品)，加約0.4mL鹽酸(1＋1)使成中性，加20mL硫酸銅溶液(100g/L)，混勻，再加4.4mL氫氧化鈉溶液(40g/L)，混勻，靜置30min，過(guò)濾。取120mL(相當(dāng)10g樣品)，置于250mL分液漏斗中，以下按9.1.1自“加2mL鹽酸(1＋1)”起依法操作。

9.2薄層板的制備

稱(chēng)取1.6g聚酰胺粉，加0.4g可溶性淀粉，加約7.0mL水，研磨3～5min，立即涂成0.25～0.30mm厚的10cm×20cm的薄層板，室溫干燥后，在80℃下干燥1h。置于干燥器中保存。

9.3點(diǎn)樣

在薄層板下端2cm處，用微量注射器點(diǎn)10μL和20μL的樣液二個(gè)點(diǎn)，同時(shí)點(diǎn)3.0，5.0，7.0，10.0μL糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液，各點(diǎn)間距1.5cm。

9.4展開(kāi)與顯色

將點(diǎn)好的薄層板放入盛有展開(kāi)劑(7.6.1或7.6.2)的展開(kāi)槽中，展開(kāi)劑液層約0.5cm，并預(yù)先已達(dá)到飽和狀態(tài)。展開(kāi)至10cm，取出薄層板，揮干，噴顯色劑，斑點(diǎn)顯黃色，根椐樣品點(diǎn)和標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)的比移值進(jìn)行定性，根據(jù)斑點(diǎn)顏色深淺進(jìn)行半定量測(cè)定。

9.5計(jì)算

式中：X2——樣品中糖精鈉的含量，g/kg或g/L；

m3——測(cè)定用樣液中糖精鈉的質(zhì)量，mg；

m4——樣品質(zhì)量(體積)，g(mL)；

V3——樣品提取液殘留物加入乙醇的體積，mL；

V4——點(diǎn)板液體積，mL。

第三篇離子選擇電極測(cè)定方法(第三法)

10原理

糖精選擇電極是以季銨鹽所制PVC薄膜為感應(yīng)膜的電極，它和作為參比電極的飽和甘汞電極配合使用以測(cè)定食品中糖精鈉的含量。當(dāng)測(cè)定溫度、溶液總離子強(qiáng)度和溶液接界電位條件一致時(shí)，測(cè)得的電位遵守能斯特方程式，電位差隨溶液中糖精離子的活度(或濃度)改變而變化。

被測(cè)溶液中糖精鈉含量在0.02～1mg/mL范圍內(nèi)。電極值與糖精離子濃度的負(fù)對(duì)數(shù)成直線關(guān)系。

11試劑

11.1乙醚：使用前用鹽酸(6mol/L)飽和。

11.2無(wú)水硫酸鈉。

11.3鹽酸(6mol/L)：取100mL鹽酸，加水稀釋至200mL，使用前以乙醚飽和。

11.4氫氧化鈉溶液(0.06mol/L)：取2.4g氫氧化鈉加水溶解并稀釋至1000mL。

11.5硫酸銅溶液(100g/L)：稱(chēng)取硫酸銅(CuSO4·5H2O)10g溶于100mL水中。

11.6氫氧化鈉溶液(40g/L)。

11.7氫氧化鈉溶液(0.02mol/L)：將11.4稀釋而成。

11.8磷酸二氫鈉［c(NaH2PO4·2H2O)＝1mol/L］溶液：取78g磷酸二氫鈉(NaH2PO4·2H2O)溶解后于500mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。

11.9磷酸氫二鈉［c(Na2HPO4·12H2O)＝1mol/L］：取89.5g磷酸氫二鈉(Na2HPO4·12H2O)于250mL容量瓶中溶解后，加水稀釋至刻度，搖勻。

11.10總離子強(qiáng)度調(diào)節(jié)緩沖液：87.7mL磷酸二氫鈉溶液(1mol/L)與12.3mL磷酸氫二鈉溶液(1mol/L)混合即得。

11.11糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱(chēng)取0.0851g經(jīng)120℃干燥4h后的糖精鈉結(jié)晶移入100mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻備用。此溶液每毫升相當(dāng)于1.0mg糖精鈉(C6H4CONNaSO2·2H2O)。

12儀器

12.1精密級(jí)酸度計(jì)或離子活度計(jì)或其他精密級(jí)電位計(jì)，準(zhǔn)確到±1mV。

12.2糖精選擇電極。

12.3217型甘汞電極：具雙鹽橋式甘汞電極，下面的鹽橋內(nèi)裝入含1%瓊脂的氯化鉀溶液(3mol/L)。

12.4磁力攪拌器。

12.5透析用玻璃紙。

12.6半對(duì)數(shù)紙。

13分析步驟

13.1樣品提取

13.1.1液體樣品：濃縮果汁、飲料、汽水、汽酒、配制酒等。準(zhǔn)確吸取25mL均勻試樣(汽水、汽酒等需先除去二氧化碳后取樣)，置于250mL分液漏斗中，加2mL鹽酸(6mol/L)，用20，20，10mL乙醚提取三次，合并乙醚提取液，用5mL經(jīng)鹽酸酸化的水洗滌一次，棄去水層，乙醚層轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶，用少量乙醚洗滌原分液漏斗合并入容量瓶，并用乙醚定容至刻度，必要時(shí)加入少許無(wú)水硫酸鈉，搖勻，脫水備用。

13.1.2含蛋白質(zhì)、脂肪、淀粉量高的食品：糕點(diǎn)、餅干、醬菜、豆制品、油炸食品，稱(chēng)取20.00g切碎樣品，置透析用玻璃紙中，加50mL氫氧化鈉溶液(0.02mol/L)，調(diào)勻后將玻璃紙口扎緊，放入盛有200mL氫氧化鈉溶液(0.02mol/L)的燒杯中，蓋上表面皿，透析24h，并不時(shí)攪動(dòng)浸泡液。量取125mL透析液，加約0.4mL鹽酸(6mol/L)使成中性，加20mL硫酸銅溶液混勻，再加4.4mL氫氧化鈉溶液(40g/L)，混勻。靜置30min，過(guò)濾。取100mL濾液于250mL分液漏斗中，以下按13.1.1自“加2mL鹽酸(6mol/L)”起依法操作。

13.1.3蜜餞類(lèi)：稱(chēng)取10.00g切碎的均勻樣品，置透析用玻璃紙中，加50mL氫氧化鈉溶液(0.06mol/L)，調(diào)勻后將玻璃紙?jiān)o，放入盛有200mL氫氧化鈉溶液(0.06mol/L)的燒杯中，透析、沉淀、提取按13.1.2操作。

13.1.4糯米制食品：稱(chēng)取25.00g切成米粒狀的小塊均勻樣品，按13.1.2操作。

13.2測(cè)定

13.2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：準(zhǔn)確吸取0，0.5，1.0，2.5，5.0，10.0mL糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液(相當(dāng)于0，0.5，1.0，2.5，5.0，10.0mg糖精鈉)，分別置于50mL容量瓶中，各加5mL總離子強(qiáng)度調(diào)節(jié)緩沖液，加水至刻度，搖勻。

將糖精選擇電極和甘汞電極分別與測(cè)量?jī)x器的負(fù)端和正端相連接，將電極插入盛有水的燒杯中，按其儀器的使用說(shuō)明書(shū)調(diào)節(jié)至使用狀態(tài)，在攪拌下用水洗至電極起始電位(例如某些電極起始電位達(dá)—320mV)。取出電極用濾紙吸干。將上述標(biāo)準(zhǔn)系列溶液按低濃度到高濃度逐個(gè)測(cè)定，得其在攪拌時(shí)的平衡電位值(－mV)。

在半對(duì)數(shù)紙上以毫升(毫克)為縱坐標(biāo)；電位值(－mV)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。13.2.2樣品的測(cè)定：準(zhǔn)確吸取20mL13.1條下的乙醚提取液置于50mL燒杯中，揮發(fā)至干殘?jiān)?，?mL總離子強(qiáng)度調(diào)節(jié)緩沖液。小心轉(zhuǎn)動(dòng)，振搖燒杯使殘?jiān)芙?，將燒杯?nèi)容物全部定量轉(zhuǎn)移入50mL容量瓶中，原燒杯用少量水多次漂洗后，并入容量瓶中，最后加水至刻度搖勻。依法測(cè)定其電位值(－mV)，查標(biāo)準(zhǔn)曲線求得測(cè)定液中糖精鈉毫克數(shù)。

13.3計(jì)算

式中：X3——樣品中糖精鈉的含量，g/kg或g/L；

m5——測(cè)定液中糖精鈉的質(zhì)量，mg；

V5——乙醚提取液的體積，mL；

V6——分取乙醚提取液的體積，mL；

m6——樣品的質(zhì)量或體積，g或mL。

結(jié)果的表述：同5.4。

13.4干擾

本法對(duì)苯甲酸鈉的濃度在200～1000mg/kg時(shí)無(wú)干擾；山梨酸的濃度在50～500mg/kg，糖精鈉的含量在100～150mg/kg范圍內(nèi)，約有3%～10%的正誤差，水楊酸及對(duì)羥基苯甲酸酯等對(duì)本