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第3章基因工程第1節(jié)重組DNA技術(shù)的基本工具知識梳理·填準(zhǔn)記牢——自主·預(yù)習(xí)·先知知識點一基因工程及其誕生與發(fā)展1.基因工程的概念(1)操作場所:________。(2)操作技術(shù):________等技術(shù)。(3)操作結(jié)果:賦予生物新的________,創(chuàng)造出更符合人們需要的新的________和生物產(chǎn)品。(4)操作水平:________水平。2.基因工程的誕生與發(fā)展(選擇對應(yīng)的序號)A.基礎(chǔ)理論________________。B.技術(shù)支持________________。①DNA是遺傳物質(zhì)的證明②基因轉(zhuǎn)移載體的發(fā)現(xiàn)③工具酶的發(fā)現(xiàn)④DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)和中心法則的確立⑤DNA體外重組的實現(xiàn)⑥重組DNA表達(dá)實驗的成功⑦PCR技術(shù)的發(fā)明⑧遺傳密碼的破譯知識點二DNA重組技術(shù)的基本工具1.限制性內(nèi)切核酸酶(又稱限制酶)——“分子手術(shù)刀”(1)來源:主要來自________。(2)功能:能夠識別雙鏈DNA分子的特定____________,并使每一條鏈中特定部位的____________斷開。(3)結(jié)果:產(chǎn)生________和________。(4)應(yīng)用:已知限制酶EcoRⅠ和SmaⅠ識別的堿基序列和酶切位點分別為和,在圖中寫出兩種限制酶切割DNA后產(chǎn)生的末端并寫出末端的種類。EcoRⅠ限制酶和SmaⅠ限制酶識別的________不同,切割位點________(填“相同”或“不同”),說明限制酶具有________。2.DNA連接酶——“分子縫合針”(1)作用:將雙鏈DNA片段“縫合”起來,恢復(fù)被限制酶切開的兩個核苷酸之間的______________。(2)種類種類比較E.coliDNA連接酶T4DNA連接酶來源________________特點只能連接________既可以連接黏性末端,又可以連接________3.基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體——“分子運輸車”(1)種類:①質(zhì)粒:是一種裸露的結(jié)構(gòu)簡單、獨立于真核細(xì)胞細(xì)胞核或原核細(xì)胞的擬核DNA之外,并具有自我復(fù)制能力的環(huán)狀________。②噬菌體和____________等。(2)目的:①將目的基因________到受體細(xì)胞中去。②在受體細(xì)胞內(nèi)對目的基因進(jìn)行大量________,或整合到受體DNA上,隨受體DNA同步________。(3)必備條件:①在宿主細(xì)胞中保存下來并大量________。②有一個至多個__________________。③有一定的____________,便于篩選。④對______________________無害。知識點三重組DNA分子的模擬操作1.材料用具:剪刀代表________________,透明膠條代表______________。2.切割位點(1)分別從兩塊硬紙板上的一條DNA鏈上找出________________序列,并選________之間作切口進(jìn)行“切割”。(2)再從另一條鏈上________之間尋找EcoRⅠ相應(yīng)的切口剪開。3.操作結(jié)果:若操作正確,不同顏色的黏性末端應(yīng)能________;否則,說明操作有誤。知識點四DNA的粗提取與鑒定1.實驗原理(1)________不溶于酒精,________溶于酒精。(2)DNA在不同濃度的NaCl溶液中的溶解度不同,它能溶于________________溶液。(3)在一定溫度下,DNA遇________試劑會呈現(xiàn)藍(lán)色。2.實驗步驟(1)稱取30g洋蔥,切碎,放入研缽中并倒入10mL研磨液,充分研磨?!?2)漏斗中墊________,將研磨液過濾到燒杯中,____℃處理,取上清液放入燒杯中?!?3)在上清液中加入體積相等的、預(yù)冷的________溶液,靜置2~3min,用玻璃棒沿同一方向攪拌,卷起絲狀物,并用濾紙吸去水分?!?4)取兩支20mL的試管編號A、B,各加入2mol/L的________溶液5mL,將絲狀物溶于B試管的NaCl溶液中。然后向兩支試管中各加入4mL的__________?;靹蚝?,將試管置于________中加熱5min?!?5)結(jié)果觀察:A試管________,B試管________。知識應(yīng)用·強化落實——效果·檢測·定向判斷對錯(正確的打“√”,錯誤的打“×”)1.基因工程的原理是基因重組,不過在這里這種變異是定向的。()2.DNA聚合酶也可以用作DNA重組技術(shù)的工具。()3.限制酶在原來的原核細(xì)胞內(nèi)對細(xì)胞自身有害。()4.不同DNA分子用同一種限制酶切割形成的黏性末端相同。()5.DNA連接酶既能連接黏性末端,又能連接平末端。()6.載體的種類有質(zhì)粒、噬菌體、動植物病毒等,其中動植物病毒必須是DNA病毒。()7.重組DNA技術(shù)所需要的工具酶有限制酶、DNA連接酶和載體。()8.不同限制酶切割后一定形成不同的黏性末端。()9.限制酶和DNA連接酶的作用部位一致,但作用相反。()10.DNA連接酶能連接互補的黏性末端或平末端,故該酶沒有專一性。()11.用兔的成熟紅細(xì)胞可提取DNA。()12.進(jìn)行DNA粗提取和鑒定實驗時,加入酒精溶液后用力進(jìn)行快速、充分的攪拌。()13.在溶有DNA的NaCl溶液中,加入二苯胺試劑即呈藍(lán)色。()第3章基因工程第1節(jié)重組DNA技術(shù)的基本工具知識梳理·填準(zhǔn)記牢知識點一1.(1)生物體外(2)轉(zhuǎn)基因(3)遺傳特性生物類型(4)DNA分子2.A.①④⑧B.②③⑤⑥⑦知識點二1.(1)原核生物(2)核苷酸序列磷酸二酯鍵(3)黏性末端平末端(4)黏性末端平末端堿基序列不同專一性2.(1)磷酸二酯鍵(2)大腸桿菌T4噬菌體黏性末端平末端3.(1)雙鏈DNA分子動植物病毒(2)轉(zhuǎn)運復(fù)制復(fù)制(3)復(fù)制限制酶切割位點標(biāo)記基因受體細(xì)胞知識點三1.EcoRⅠDNA連接酶2.(1)G—A—A—T—T—CG—A(2)互補的堿基3.互補配對知識點四1.(1)DNA蛋白質(zhì)(2)2mol/L的NaCl(3)二苯胺2.(2)紗布4(3)酒精(4)NaCl二苯胺試劑沸水(5)不變藍(lán)變藍(lán)色知識應(yīng)用·強化落實1.√2.×提示:DNA重組技術(shù)的工具有限制酶、DNA連接酶和載體,沒有DNA聚合酶。3.×提示:限制酶在原來的原核細(xì)胞內(nèi)用于切割外源DNA,使之失效,從而保護(hù)自身。4.√5.×提示:E.coliDNA連接酶不能連接平末端。6.√7.×8.×9.√10
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