SN-T 5655.6-2023 商品化試劑盒檢測方法 預包裝食品致敏原免疫分析法 第6部分：乳

學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載0ICS67.50學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載0CCSX04中華人民共和國出入境檢驗檢疫行業(yè)標準6SN/T

5655.—20236商品化試劑盒檢測方法預包裝食品致敏原免疫分析法

6

:it tCommercalkitesit tImmunoassayoffoodalergensinfoodst lPar6:t l-

- -

--

- -

-中華人民共和國海關(guān)總署 發(fā)

布學ｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準兔兔ｗ下載學ｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準兔兔ｗ下載學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載6SN/T5655.—2023學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載6前 言本文件按照GB/T1.標準化工作導則 第1部分:標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件為SN/T5655

《商品化試劑盒檢測方法 預包裝食品致敏原免疫分析法》的第6部分。SN/T5655已經(jīng)發(fā)布了以下部分:———第1部分:麩質(zhì);———第2部分:甲殼綱類動物;———第3部分:蛋類;———第4部分:花生;———第5部分:大豆;———第6部分:乳;———第7部分:扁桃仁;———第8部分:腰果;———第9部分:榛子;———第10部分:巴西堅果;———第11部分:夏威夷果;———第12部分:開心果;———第13部分:胡桃。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔識別專利的責任。本文件由中華人民共和國海關(guān)總署提出并歸口。本文件起草單位:中華人民共和國廣州海關(guān)、中華人民共和國沈陽海關(guān)、沈陽國際旅行衛(wèi)生保健中心、大連民族大學。本文件主要起草人:王金玲、陳文銳、張瑩、李莎、吳渺渺、李思德、劉津、梁穎婕、鄭秋月。學ｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準兔兔ｗ下載學ｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準兔兔ｗ下載學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載6SN/T5655.—2023學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載6引 言食品致敏原是普通食品中正常存在的天然或人工添加物質(zhì),被過敏體質(zhì)人群消耗后能夠誘發(fā)過敏反應。SN/T5655《商品化試劑盒檢測方法 預包裝食品致敏原免疫分析法》規(guī)定了預包裝食品中致敏原成分的酶聯(lián)免疫吸附定量檢測和膠體金免疫層析定性檢測方法,旨在滿足預包裝食品致敏原標識、生產(chǎn)質(zhì)控和食品安全檢驗監(jiān)管的檢測需求。SN/T5655《商品化試劑盒檢測方法 預包裝食品致敏原免疫分析法》擬由下列13個部分構(gòu)成。———第1部分:麩質(zhì)?！?部分:甲殼綱類動物?！?部分:蛋類。———第4部分:花生?！?部分:大豆?！?部分:乳?！?部分:扁桃仁?！?部分:腰果。———第9部分:榛子。———第10部分:巴西堅果?！?1部分:夏威夷果?！?2部分:開心果?！?3部分:胡桃。學ｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準兔兔ｗ下載學ｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準兔兔ｗ下載學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載6SN/T5655.—2023學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載6商品化試劑盒檢測方法預包裝食品致敏原免疫分析法第6部分:乳1

范圍β本文件規(guī)定了預包裝食品中乳、酪蛋白、-乳球蛋白致敏原的酶聯(lián)免疫吸附和乳致敏原的膠體金免β疫層析測定方法。第一法乳酶聯(lián)免疫吸附法適用于預包裝食品中乳致敏原成分的定量檢測。第二法酪蛋白酶聯(lián)免疫吸附法適用于預包裝食品中酪蛋白致敏原成分的定量檢測。-第三法β乳球蛋白夾心酶聯(lián)免疫吸附法適用于未經(jīng)發(fā)酵或水解的預包裝食品中β-乳球蛋白致敏原-成分的定量檢測。-第四法β乳球蛋白競爭酶聯(lián)免疫吸附法適用于經(jīng)過發(fā)酵或水解的預包裝食品中β-乳球蛋白致敏原-成分的定量檢測。第五法乳膠體金免疫層析法適用于預包裝食品中乳致敏原的定性檢測,也適用于預包裝食品生產(chǎn)過程中為監(jiān)控乳致敏原目的對生產(chǎn)原料和環(huán)境采樣的定性檢測。2

規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中,注日期的引用文件,僅該日期對應的版本適用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T6682

分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法l i i iii i

i i

it iAOACGuidel i i iii i

i i

it iAnalyss.AppendixM

:ValdatonproceduresforquanttatvefoodalergenELISA

methods:com-muniyguidanceandbestpractces3

術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。13.1l乳

mikl哺乳動物分娩后從乳腺分泌的一種白色或帶微黃色不透明液體。以生乳為原料可加工制成乳粉。乳中含有的酪蛋白和β-乳球蛋白在具有營養(yǎng)價值的同時也具有致敏性。23.2-i E酶聯(lián)免疫吸附測定

enzymelnkedimmunosorbent-i E可溶性抗原或抗體結(jié)合到微孔板等固相載體上,基于免疫反應和酶催化顯色的一種定性或定量檢測方法。1學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載6SN/T5655.—2023學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載633.3

G膠體金免疫層析

coloidalgoldassay;ICAG以膠體金作為示蹤標志物的一種免疫層析檢測技術(shù)。注:通常為試紙條形式。第一法

乳

酶聯(lián)免疫吸附法4

原理檢測的原理是抗原抗體反應。微孔板中包被有針對乳致敏原的特異性抗體。樣品中含有的乳致敏原和特異性抗體結(jié)合形成抗體-抗原復合物。加入過氧化物酶標記的抗體后,形成抗體-抗原-抗體復合物,其他物質(zhì)在洗滌步驟中被除去。加入底物/發(fā)色劑呈顯色反應。通過測定450nm

波長下吸光度值得出樣品中乳致敏原含量。樣品中乳致敏原含量與吸光度值成正比。5

試劑和材料除特別說明外,實驗用水應符合

GB/T6682規(guī)定的三級水,所有試劑均為分析純。1 ii ii i i

ii

i t i5. 乳致敏原酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒:試1 ii ii i i

ii

i t icedurestoValdateCharacterstcsofaMethodofAnalyssAppendixM:ValdatonproceduresforquanttatvefoodalergenELISA

methods:communiyguidanceandbestpractces進行評價,評價結(jié)果見附錄

A。注:試劑盒詳細信息見附錄B。 /2 4 335.

1molL氫氧化鈉(NaOH):稱取40.0 /2 4 335.

1mol/L鹽酸(HCl):取8.

mL濃鹽酸(7%),用水定容至100mL。 145.

1×致敏原提取緩沖液:按照1∶10比例稀釋10×致敏原提取緩沖液濃縮液[見B.e)], 141×

致敏原提取緩沖液可貯于2℃~8℃條件下保存12周。稀釋前,若10×致敏原提取緩沖液濃縮液中有結(jié)晶,則先將其置于37℃水浴中溫育,直至結(jié)晶完全消失,充分混勻后使用。5 3 1((25. 含添加劑1的致敏原提取緩沖液:稱取1.5g添加劑1[見B.g)],溶解于15mL15 3 1((2化鈉(NaOH)(5.2)中,攪拌直至完全溶解,加入700mL1×致敏原提取緩沖液

5.4),用1mol/L鹽酸(HCl)(5.3)將pH

值調(diào)至9,再用1×致敏原提取緩沖液

5.4)定容到750mL,該提取緩沖液,可用于提取約45個樣品?？稍谑覝?0

℃~25

℃)條件下保存3周,不應冷藏,若出現(xiàn)晶體析出情況則即刻棄用。 1625.

1×提取液2:按照1∶2比例用蒸餾水稀釋2×提取液2濃縮液[見B.f)]。稀釋后的1× 1622可用于提取約45個樣品,可在室溫(0℃~25℃)條件下保存約3個月。 175.

1×洗滌緩沖液:按照1∶10比例稀釋10×洗滌緩沖液濃縮液[見B.d)],稀釋后的1× 17液可貯于2℃~8℃條件下保存4周。1條微孔板需約15mL1×洗滌緩沖液洗滌。 181 15.

1×酶標記物:用酶標記物緩沖液[見

B.c)]按照1∶11比例稀釋11×酶標記物濃縮液 181 1B.b)],現(xiàn)配現(xiàn)用。如移取100μL11×酶標記物濃縮液到1mL的酶標記物緩沖液[見B.c)]中稀釋混勻,足夠1條微孔板使用。6

儀器和設(shè)備16. 酶標儀:具450nm

波長。12學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載6SN/T5655.—2023學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載6236. 分析天平:感量0.1g。236. 渦旋混勻儀。45 3 6 16. 冷凍離心機:轉(zhuǎn)速≥400045 3 6 16. 水浴鍋:7℃,0℃,00℃。6 2 17 36. 單道移液器:6 2 17 36.

八道移液器:0μL~300μL。7

分析步驟17. 樣品前處理和提取111 02 (7.. 固體樣品:對不少于50g樣品進行均質(zhì)。稱取1.0g樣品到50mL離心管中,加入11 02 (好的1×提取液2(5.6),蓋好管蓋后用力上下顛倒混勻。在100℃的水浴中加熱10min。用冰浴快速冷卻至室溫(0℃~25℃),加入16mL預熱至60℃的含添加劑1的致敏原提取緩沖液

5.5),按照37.1.

進行下一步處理。3122 (7..液體樣品:對不少于50mL樣品進行均質(zhì)。吸取1mL樣品到50mL離心管中,加入4mL122 (備好的1×提取液2(5.6),蓋好管蓋后用力上下顛倒混勻。在100℃的水浴中加熱10min。用冰浴快速冷卻至室溫(0℃~25℃),加入15mL預熱至60℃的含添加劑1的致敏原提取緩沖液

5.5),按照37.1.

進行下一步處理。31324 ((7.. 將經(jīng)過7.1.

或7.1.

處理的樣品,渦旋混勻,置于60℃水浴中孵育101324 ((卻,000r/min4℃離心10min或過濾,將上清液或濾清液用1×致敏原提取緩沖液

5.4)按比例1∶5[如移取100μL提取物上清液/濾清液到400μL1×致敏原提取緩沖液

5.4)中稀釋混勻]稀釋進行檢測。至此稀釋倍數(shù)為100倍。27. 測定221 127.. 將預先包被有乳致敏原特異性抗體的微孔板[見B.a)]插入微孔板架并做好標記21 12品均設(shè)置雙平行。宜一次檢測不要超過3條微孔板條(4個板孔),以避免過大的孔間時間差造成對定量結(jié)果的影響。22 1 2(( 2(127.. 平行加入100μL標準品1~5[見

B.h)~l)]和樣品至微孔中,室溫(0

℃~2522 1 2(( 2(1210min。孵育結(jié)束后,倒去微孔中的液體,每個微孔加入250μL1×洗滌緩沖液

5.7),進行洗滌后,在吸水紙上拍干,洗滌3次。洗板結(jié)束后,每個微孔加入100μL1×酶標記物

5.8),室溫(0℃~25℃)孵育10min。孵育結(jié)束后,倒去微孔中的液體,每個微孔每次加入250μL1×洗滌緩沖液

5.7)洗滌并在吸水紙上拍干,洗滌3次。洗板結(jié)束后,每個微孔加入100μL底物/發(fā)色劑[見B.m)],輕輕地水平振搖使其均勻混合,室溫(0

℃~25

℃)避光孵育10

min。孵育結(jié)束后,加入100μL

終止液[見113B.n)],水平振搖使反應完全,0min內(nèi)讀取450nm

1137.標準曲線制作和測定結(jié)果計算 ic以標準品2~5質(zhì)量濃度為橫坐標,以標準品平均吸光度值為縱坐標,繪制半對數(shù)曲線 ic中乳致敏原濃度()。也可使用試劑盒配套分析軟件RIDASOFT

Win中cubisplne或4p模式進行標準曲線繪制和測定結(jié)果計算。3學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載

m ×100×f

×V 學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載

m ×100×f

×V …………(1)68

分析結(jié)果描述18. 結(jié)果分析11固體樣品中乳致敏原含量按公式()計算:1sXs=

cs式中:sXs

———樣品中乳致敏原含量,單位為毫克每千克(mg/kg);sc

———樣品液中乳致敏原濃度,單位為毫克每升(mg/L);f ———樣品稀釋倍數(shù);,V ———定容體積

0.02L;,k2m

———樣品的質(zhì)量,單位為千克(g);k2100———標準品濃度中包含的100倍稀釋。液體樣品中的乳致敏原含量按式()計算:lXl=c

×f …………(2)l式中:lXl

———樣品中乳致敏原含量,單位為毫克每升(mg/L);lc ———樣品液中乳致敏原濃度,單位為毫克每升(mg/L);f

———樣品稀釋倍數(shù)。1根據(jù)7.

制備樣品液時的100倍稀釋倍數(shù)已經(jīng)包括在標準曲線中,樣品稀釋倍數(shù)f

只考慮除此12100倍以外的稀釋倍數(shù)。計算結(jié)果保留小數(shù)點后兩位有效數(shù)字。28. 結(jié)果表述乳致敏原測定結(jié)果用于標簽標識管理。乳致敏原測定結(jié)果小于定量限時,結(jié)果表述為“未檢出乳致敏原”;乳致敏原測定結(jié)果大于定量限時,結(jié)果表述為“檢出乳致敏原”并報告具體測定值。9

質(zhì)量控制19. 試劑失效1出現(xiàn)以下情況之一表明試劑失效,不應進行測定或測定結(jié)果作廢:a)

貯存在試劑瓶中的發(fā)色劑顏色出現(xiàn)藍色;6

5 8b)

加入終止液后標準品5(7.

6

5 829. 變異系數(shù)2在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的變異系數(shù)不應超過10%。10

檢出限和定量限7 L 5 L本方法對乳致敏原的檢出限為0.0mg/kg(

),定量限為7 L 5 L4學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載6SN/T5655.—2023學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載611

防污染措施12311. 食品樣品的均質(zhì)可能產(chǎn)生粉塵,為避免污染應在通風櫥內(nèi)進行樣品均質(zhì)的前處理操作。12311. 設(shè)備和器具用水沖洗后,用60%乙醇或異丙醇徹底清潔,以消除致敏原(蛋白質(zhì))污染。11. 在試驗過程中應戴手套操作。在稱量、均質(zhì)樣品、樣品提取及試劑盒檢測四個檢測階段更換手套。第二法酪蛋白

酶聯(lián)免疫吸附法12

原理利用抗原-抗體特異性結(jié)合反應,對樣品中的酪蛋白致敏原含量進行酶聯(lián)免疫吸附測定。樣品中的酪蛋白致敏原被微孔中預先包被的酪蛋白特異性抗體捕獲,形成抗原-抗體復合物,加入過氧化物酶標記的抗體后,形成抗體-抗原-抗體夾心復合物,其他物質(zhì)在洗滌步驟中被除去。加入底物/發(fā)色劑呈顯色反應,通過測定450nm

波長下吸光度值得到樣品中酪蛋白致敏原含量。樣品中酪蛋白致敏原含量與吸光度值成正比。13

試劑和材料除特別說明外,實驗用水應符合

GB/T6682規(guī)定的三級水,所有試劑均為分析純。1 l ii ii i i

ii

i1 l ii ii i i

ii

i t iProcedurestoValdateCharacterstcsofaMethodofAnalyssAppendixM

:ValdatonproceduresforquanttatvefoodalergenELISA

methods:communiyguidanceandbestpractces進行評價,評價結(jié)果見附錄C。注:試劑盒詳細信息見附錄

D。2 4 334 S F i13.

1mol/L氫氧化鈉2 4 334 S F i13.

1mol/L鹽酸(HCl):取8.

mL濃鹽酸(7%),用水定容至100mL。13.牛血清白蛋白(erva,ractonV),不含蛋白酶。 1513.

1×致敏原提取緩沖液

:按照1∶10比例稀釋10×致敏原提取緩沖液濃縮液[見

D.e)], 15的1×致敏原提取緩沖液可貯于2℃~8℃條件下保存12周。稀釋前,若10×致敏原提取緩沖液濃縮液中有結(jié)晶,則先將其置于37℃水浴中溫育,直至結(jié)晶完全消失,充分混勻后使用。6 3 11

2 1

51 1

5213. 含添加劑1的致敏原提取緩沖液:稱取1.56 3 11

2 1

51 1

52化鈉(NaOH)(3.)中,攪拌直至完全溶解,加入700mL1×致敏原提取緩沖液(3.),用1mol/L鹽酸(HCl)(3.)將pH

值調(diào)至9,再用1×致敏原提取緩沖液(3.)定容到750mL,該提取緩沖液,可用于提取約45個樣品?？稍谑覝?0℃~25℃)條件下保存3周,不應冷藏,若出現(xiàn)晶體析出情況則即刻棄用。 1713.

1×提取液2:按照1∶2比例用蒸餾水稀釋2×提取液2濃縮液[見

D.f)]。稀釋后的1×提 172液2可用于提取約15個樣品,可在室溫(0℃~25℃)條件下保存約3個月。2 1813.

1×洗滌緩沖液:按照1∶10比例稀釋10×洗滌緩沖液濃縮液[見

D.d)],稀釋后的1×洗滌 18沖液可貯于2℃~8℃條件下保存4周。1條微孔需約15mL1×洗滌緩沖液洗滌。 191 113.

1×酶標記物:用酶標記物緩沖液[見

D.c)]按照1∶11比例稀釋11×酶標記物濃縮液 191 1D.b)],現(xiàn)配現(xiàn)用。如移取100μL11×酶標記物濃縮液到1mL的酶標記物緩沖液[見D.c)]中稀釋5學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載6SN/T5655.—2023學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載6混勻,足夠2條微孔板使用。14

儀器和設(shè)備同第6章。15

分析步驟115. 樣品前處理和提取11115.. 非水解的且為非乳基的嬰幼兒食品、冰淇淋、葡萄酒、巧克力和飲料等樣品1101

51

5 6固體樣品:對不少于50g樣品進行均質(zhì),稱取1.0g樣品到50mL離心管中,01

51

5 660℃的1×致敏原提取緩沖液(3.)。液體樣品:對不少于50mL樣品進行均質(zhì),吸取1mL樣品到50mL

離心管中,加入19mL預熱至60℃的1×致敏原提取緩沖液(3.)。充分混勻后,0℃水浴加熱提取10min。用冰水快速冷卻,置于冷凍離心機中4℃下4000r/min離心10min。必要時可使用濾紙再次過濾,收集濾液,取上清液或濾液進行檢測。到此稀釋倍數(shù)為20倍。12 1115.. 除15..12 110 51

4

4 1

71

65 1

4

4 1

71

60 51

4

4 1

71

65 1

4

4 1

71

61

5 5白蛋白(3.)、

mL1×提取液2(3.)和16mL預熱至60

℃含添加劑1的致敏原提取緩沖液(3.),充分混勻。液體樣品:對不少于50mL樣品進行均質(zhì),吸取1mL樣品到50mL離心管中,加入0.0g牛血清白蛋白(3.)、

mL1×提取液2(3.)和15mL預熱至60℃含添加劑1的致敏原提取緩沖液(3.),充分混勻。在100℃水浴加熱10min。用冰水快速冷卻,置于冷凍離心機中4℃下4000r/min離心10min。必要時可使用濾紙再次過濾,收集濾液,取上清液或濾液進行檢測。使用1×致敏原提取緩沖液(3.)對上清液進行1:

稀釋(如100μL樣品提取液加400μL1×致敏原提取1

5緩沖液(3.)),取稀釋液進行檢測。到此稀釋倍數(shù)為1001

5215. 測定221 1215.. 將預先包被有酪蛋白致敏原特異性抗體的微孔板[見

D.a)]插入微孔板架并做好標記,標21 12品和樣品均設(shè)置雙平行。宜一次檢測不要超過3條微孔板條(4個板孔),以避免過大的孔間時間差造成對定量結(jié)果的影響。22 1 21

81

9 212 1115..

平行加入100μL標準品1~5[見

D.h)~l)]和樣品至微孔中,室溫22 1 21

81

9 212 1110min。孵育結(jié)束后,倒去微孔中的液體,每個微孔加入250μL1×洗滌緩沖液(3.),進行洗滌后,在吸水紙上拍干,洗滌3次。洗板結(jié)束后,每個微孔加入100μL1×酶標記物(3.),室溫(0℃~25℃)孵育10min。孵育結(jié)束后,倒去微孔中的液體,每個微孔每次加入250μL1×洗滌緩沖液(4.1.5)洗滌并在吸水紙上拍干,洗滌3次。洗板結(jié)束后,每個微孔加入100μL底物/發(fā)色劑[見

D.m)],輕輕地水平振搖使其均勻混合,0℃~25℃避光孵育10min。孵育結(jié)束后,加入100μL終止液[見

D.n)],水平振搖使反應完全,0min內(nèi)讀取450nm

波長吸光度值。注:強酸性或強堿性樣品提取液應調(diào)節(jié)pH

值至7.5±0.

后再檢測。315. 標準曲線制作和測定結(jié)果計算3 ic以標準品2~5質(zhì)量濃度為橫坐標,以標準品平均吸光度值為縱坐標,繪制半對數(shù)曲線 ic中酪蛋白致敏原濃度()。也可使用試劑盒配套分析軟件RIDASOFT

Win中cubisplne或4P模式6學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載

m ×20×f

×V 學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載

m ×20×f

×V …………(3)6進行標準曲線繪制和測定結(jié)果計算。16

分析結(jié)果描述116. 結(jié)果分析13固體樣品中酪蛋白致敏原含量按公式()計算:3sXs=

cs式中:sXs

———樣品中酪蛋白致敏原含量,單位為毫克每千克(mg/kg);sc ———樣品液中酪蛋白致敏原濃度,單位為毫克每升(mg/L);f

———樣品稀釋倍數(shù);,V

———定容體積

0.02L;,km

———樣品的質(zhì)量,單位為千克(g);k20

———標準品濃度中包含的20倍稀釋。4液體樣品中的酪蛋白致敏原含量按式()計算:4lXl=c

×f …………(4)l式中:lXl

———樣品中酪蛋白致敏原含量,單位為毫克每升(mg/L);lc ———樣品液中酪蛋白致敏原濃度,單位為毫克每升(mg/L);f

———樣品稀釋倍數(shù)。2根據(jù)15.1.

制備樣品液時的20倍稀釋倍數(shù)已經(jīng)包括在標準曲線中,樣品稀釋倍數(shù)

f

只考慮除此220倍以外的稀釋倍數(shù)。若按步驟15.1.

用1×提取液2處理的樣品,則稀釋倍數(shù)為100倍,從標準曲線讀出的酪蛋白濃度應再乘以5,才是樣品中酪蛋白的濃度。計算結(jié)果保留小數(shù)點后兩位有效數(shù)字。216. 結(jié)果表述2酪蛋白致敏原測定結(jié)果用于標簽標識管理。酪蛋白致敏原測定結(jié)果小于定量限時,結(jié)果表述為“未檢出酪蛋白致敏原”;酪蛋白致敏原測定結(jié)果大于定量限時,結(jié)果表述為“檢出酪蛋白致敏原”并報告具體測定值。17

質(zhì)量控制117. 試劑失效1出現(xiàn)以下情況之一表明試劑失效,不應進行測定或測定結(jié)果作廢:a)

貯存在試劑瓶中的發(fā)色劑顏色出現(xiàn)藍色;1

5 8b)

加入終止液后標準品5(3.

1

5 8217. 變異系數(shù)2在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的變異系數(shù)不應超過10%。18

檢出限和定量限1 5本方法使用致敏原提取緩沖液時,對酪蛋白的檢出限為0.2mg/kg(L),定量限為0.01 57學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載6SN/T5655.—2023學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載6L 7 5 L(

);使用提取液2時,對酪蛋白的檢出限為0.1mg/kg(L),定量限為L 7 5 L19

防污染措施同第11章。第三法

β-乳球蛋白

夾心酶聯(lián)免疫吸附法20

原理-- -- -利用抗原-抗體特異性結(jié)合反應,對樣品中的β-- -- -于各種未經(jīng)水解的食品原料和加工食品。樣品中游離的β乳球蛋白被微孔中預先包被的β乳球蛋白特異性抗體捕獲,形成抗原-抗體復合物,加入過氧化物酶標記抗體后,形成酶標記抗體-抗原-抗體夾心復合物,其他物質(zhì)在洗滌步驟中被除去。加入底物/發(fā)色劑呈顯色反應,通過測定450nm

波長下吸光度值得到樣品中β乳球蛋白致敏原含量。樣品中β乳球蛋白致敏原含量與吸光度值成正比。21

試劑和材料除特別說明外,實驗用水應符合

GB/T6682規(guī)定的三級水,所有試劑均為分析純。 -1i i ii i i

ii

i -1i i ii i i

ii

i t itveStudyProcedurestoValdateCharacterstcsofaMethodofAnalyssAppendix

M

:ValdatonproceduresforquanttatvefoodalergenELISA

methods:communiyguidanceandbestpractces進行評價,評價結(jié)果見附錄E。注:試劑盒詳細信息見附錄F。2 4334 S F i21.

1mol/L氫氧化鈉2 4334 S F i21.

1mol/L鹽酸(HCl):取8.

mL濃鹽酸(7%),用水定容至100mL。21. 牛血清白蛋白(erva,ractonV),不含蛋白酶。 15221.

1×致敏原提取緩沖液:按照1∶10比例稀釋10×致敏原提取緩沖液濃縮液[見F.d)], 152的1×致敏原提取緩沖液可貯于室溫(0℃~25℃)條件下保存4周。稀釋前,若10×致敏原提取緩沖液濃縮液中有結(jié)晶,則先將其置于37℃水浴中溫育,直至結(jié)晶完全消失,充分混勻后使用。6 3 1 /1

3 21

4 2221. 含添加劑1的致敏原提取緩沖液:稱取1.5g6 3 1 /1

3 21

4 22化鈉(NaOH)(9.)中,攪拌直至完全溶解,加入700mL1×致敏原提取緩沖液(1.1.2),用1molL鹽酸(HCl)(9.)將pH

值調(diào)至9,再用1×致敏原提取緩沖液(1.1.2)定容到750mL,該提取緩沖液,可用于提取約45個樣品?？稍谑覝?0℃~25℃)條件下保存3周,不應冷藏,若出現(xiàn)晶體析出情況則即刻棄用。 1721.

1×提取液2:按照1∶2比例用蒸餾水稀釋2×提取液2濃縮液[見F.e)]。稀釋后的1× 172液2可用于提取約15個樣品,可在室溫(0℃~25℃)條件下保存約3個月。2 1821.

1×洗滌緩沖液:按照1∶10比例稀釋10×洗滌緩沖液濃縮液[見F.c)]。稀釋后的1× 182沖液可在室溫(0℃~25℃)條件下保存4周。1條微孔需約15mL1×洗滌緩沖液洗滌。222

儀器和設(shè)備同第6章。8學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載

m ×100×f

×V 學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載

m ×100×f

×V …………(5)623

分析步驟123. 樣品前處理和提取111 05 2

4 722

6 323.. 固體樣品:對不少于50g樣品進行均質(zhì)。稱取1.0g樣品到50mL離心管11 05 2

4 722

6 3品,稱取加入0.0g牛血清白蛋白(1.)],加入4mL制備好的1×提取液2(1.),蓋好管蓋后用力上下顛倒混勻。在100℃的水浴中加熱10min。用冰浴快速冷卻至室溫(0℃~25℃),加入16mL預熱至60℃的含添加劑1的致敏原提取緩沖液(1.),按照23.1.

進行下一步處理。1272 2

6323.. 液體樣品:對不少于50mL樣品進行均質(zhì)。吸取1mL樣品到50mL離心管中,加入1272 2

63備好的1×提取液2(1.),蓋好管蓋后用力上下顛倒混勻。在100℃的水浴中加熱10min。用冰浴快速冷卻至室溫(0℃~25℃),加入15mL預熱至60℃的含添加劑1的致敏原提取緩沖液(1.),按照23.1.

進行下一步處理。13 14 2

52

523..將經(jīng)過21.2.

或21.2.

處理的樣品,渦旋混勻,置于60℃水浴中孵育10min后13 14 2

52

5速冷卻,000r/min4℃離心10min或過濾,將上清液或濾清液用1×致敏原提取緩沖液(1.)按比例1∶5[如移取100μL提取物上清液/濾清液到400μL1×致敏原提取緩沖液(1.)中稀釋混勻]稀釋進行檢測。至此樣品的稀釋倍數(shù)為100倍。223. 測定221 - 1223.. 將預先包被有β乳球蛋白致敏原特異性抗體的微孔板[見F.a)]插入微孔板架并做好21 - 12標準品和樣品均設(shè)置雙平行。宜一次檢測不要超過3條微孔板條(4個板孔),以避免過大的孔間時間差造成對定量結(jié)果的影響。22 1 22

81 22

81223.. 平行加入100μL標準品1~5[見

F.g)~k)]和樣品至微孔中,室溫(022 1 22

81 22

81210min。孵育結(jié)束后,倒去微孔中的液體,每個微孔加入250μL1×洗滌緩沖液(1.),進行洗滌后,在吸水紙上拍干,洗滌3次。洗板結(jié)束后,每個微孔加入100μL1×酶標記物[見F.b)],室溫(0℃~25℃)孵育10min。孵育結(jié)束后,倒去微孔中的液體,每個微孔每次加入250μL1×洗滌緩沖液(1.)洗滌并在吸水紙上拍干,洗滌3次。洗板結(jié)束后,每個微孔加入100μL底物/發(fā)色劑[見F.l)],輕輕地水平振搖使其均勻混合,室溫(0℃~25℃)避光孵育10min。孵育結(jié)束后,加入100μL終止液[見1 13F.m)],水平振搖使反應完全,0min內(nèi)讀取450nm

1 1323. 標準曲線制作和測定結(jié)果計算- ic以標準品2~5質(zhì)量濃度為橫坐標,以標準品平均吸光度值為縱坐標,- ic中β乳球蛋白致敏原濃度()。也可使用試劑盒配套分析軟件

RIDASOFT

Win中cubi

splne模式進行標準曲線繪制和測定結(jié)果計算。24

分析結(jié)果描述124. 結(jié)果分析1- 5固體樣品中β乳球蛋白致敏原含量按公式()- 5sXs=

cs式中:Xs

———樣品中β-乳球蛋白致敏原含量,單位為毫克每千克(mg/kg);9學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載6SN/T5655.—2023學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載6s -c

———樣品液中β乳球蛋白致敏原濃度,s -f ———樣品稀釋倍數(shù);V ———定容體積,為0.2L;km

———樣品的質(zhì)量,單位為千克(g);k100———標準品濃度中包含的100倍稀釋。6l液體樣品中的β-乳球蛋白致敏原含量按式()計算:6lXl=c

×f …………(6)式中:lXl

———樣品中β-乳球蛋白致敏原含量,單位為毫克每升(mg/L);lc ———樣品液中β-乳球蛋白致敏原濃度,單位為毫克每升(mg/L);f

———樣品稀釋倍數(shù)。1根據(jù)23.

制備樣品液時的100倍稀釋倍數(shù)已經(jīng)包括在標準曲線中,樣品稀釋倍數(shù)f

只考慮除此12100倍以外的稀釋倍數(shù)。計算結(jié)果保留小數(shù)點后兩位有效數(shù)字。224. 結(jié)果表述-- -ββ乳球蛋白致敏原測定結(jié)果用于標簽標識管理。β-乳球蛋白致敏原測定結(jié)果小于定量限時,-- -β表述為“未檢出β乳球蛋白致敏原”;-乳球蛋白致敏原測定結(jié)果大于定量限時,結(jié)果表述為“檢出β乳球蛋白致敏原”并報告具體測定值。25

質(zhì)量控制125. 試劑失效1出現(xiàn)以下情況之一表明試劑失效,不應進行測定或測定結(jié)果作廢:a)

貯存在試劑瓶中的發(fā)色劑顏色出現(xiàn)藍色;5 2b)

加入終止液后標準品5(4.

mg/kg)吸光度值5 2225. 變異系數(shù)2在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的變異系數(shù)不應超過10%。26

檢出限和定量限- L 1 L本方法對β乳球蛋白的檢出限為0.4mg/kg(

),定量限為- L 1 L27

防污染措施同第11章。第四法

β-乳球蛋白

競爭酶聯(lián)免疫吸附法28

原理--利用抗原-抗體特異性結(jié)合反應,對樣品中的β乳球蛋白致敏原含量進行酶聯(lián)免疫吸附測定。適用--于經(jīng)過水解加工的食品原料和加工食品。樣品中游離的和固定的β乳球蛋白競爭抗體結(jié)合位點,第一10學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載6SN/T5655.—2023學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載6-次洗滌后,加入過氧化物酶標記的二級抗體,與固定的β-乳球蛋白抗體結(jié)合,未結(jié)合的酶標記物在后續(xù)-的洗滌步驟被除去。加入底物/發(fā)色劑呈顯色反應。通過測定450nm

波長下吸光度值得出樣品中β乳球蛋白致敏原含量。樣品中的β-乳球蛋白致敏原含量與吸光度值成反比。29

試劑和材料除特別說明外,實驗用水應符合

GB/T6682規(guī)定的三級水,所有試劑均為分析純。 -1i i ii i i

ii

i -1i i ii i i

ii

i t itveStudyProcedurestoValdateCharacterstcsofaMethodofAnalyssAppendix

M:ValdatonproceduresforquanttatvefoodalergenELISA

methods:communiyguidanceandbestpractces進行評價,評價結(jié)果見附錄

G。注:試劑盒詳細信息見附錄

H。 122 )29.

1×緩沖液:按照1∶10比例稀釋10×緩沖液濃縮液[見

H.d)],稀釋后的1×緩沖液可在 122 )條件下保存4周。1條微孔需約15mL(0℃~25℃

1×緩沖液。該緩沖液既可用于洗板,也可用于樣品和抗體的稀釋。 2

2 131 2

229.

1×抗體:用1×緩沖液(9.)按照1∶11比例稀釋11×抗體濃縮液[見

H.c)], 2

2 131 2

2移取100μL11×抗體濃縮液[見

H.c)]至1mL1×緩沖液(9.)中稀釋混勻,足夠2條微孔反應使用。30

儀器和設(shè)備同第6章。31

分析步驟131. 樣品前處理和提取1022

2 5 2

2稱取不少于50g或量取不少于50mL樣品,充分混合均勻。稱取2.0g或吸取2022

2 5 2

250mL離心管中,加水至50mL,在室溫(0℃~25℃)條件下渦旋振蕩10min,樣品均液按1∶20的比例用1×緩沖液(9.

)稀釋(例如:0μL

樣品加950μL1×緩沖液(9.

))。至此稀釋倍數(shù)為500倍。231. 測定221 - 1231.. 將預先包被有β乳球蛋白致敏原特異性抗體的微孔板[見

H.a)]插入微孔板架并做好21 - 12標準品和樣品均設(shè)置雙平行。宜一次檢測不要超過3條微孔板條(4個板孔),以避免過大的孔間時間差造成對定量結(jié)果的影響。22 1 2

322

21 22

21 1 2131..平行加入50μL22 1 2

322

21 22

21 1 21輕輕地水平振搖使其均勻混合,室溫(0℃~25℃)孵育2h。孵育結(jié)束后,倒去微孔中的液體,每個微孔加入250μL1×緩沖液(9.),進行洗滌后,在吸水紙上拍干,洗滌3次。洗板結(jié)束后,每個微孔加入100μL1×酶標記物[見

H.b)],室溫(0℃~25℃)孵育30min。孵育結(jié)束后,倒去微孔中的液體,每個微孔每次加入250μL1×緩沖液(9.)洗滌并在吸水紙上拍干,洗滌3次。洗板結(jié)束后,每個微孔加入50μL底物[見

H.k)]和50μL發(fā)色劑[見

H.l)],輕輕地水平振搖使其均勻混合,室溫(0℃~25℃)避光孵育15min。孵育結(jié)束后,加入100μL終止液[見

H.m)],水平振搖使反應完全,立即讀取450nm

波長吸光度值。11學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載

B 0×100%…………(7學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載

B 0×100%…………(7)

m×1000×f

×V …………(8)6331. 標準曲線制作和測定結(jié)果計算37- ic以標準品2~6質(zhì)量濃度為橫坐標,公式()計算的百分比為縱坐標,繪制半對數(shù)曲線,計算樣7- ic中β乳球蛋白致敏原濃度()。也可使用試劑盒配套分析軟件

RIDASOFT

Win中cubi

splne模式進行標準曲線繪制和測定結(jié)果計算。-7β乳球蛋白標準品和樣品液的百分比吸光度值按公式()-7A=

B式中:A

———百分比吸光度值;B

———β-乳球蛋白標準品或樣品液的平均吸光度值;B0———標準品1的平均吸光度值。32

分析結(jié)果描述132. 結(jié)果分析1- 8固體或半固體樣品中β乳球蛋白含量按公式()- 8sXs= cs式中:-s - nXs ———樣品中β-s - nc ———樣品液中β乳球蛋白致敏原濃度,單位為納克每毫升(g/mL);f ———樣品稀釋倍數(shù);5V ———定容體積,0mL;5km———樣品的質(zhì)量,單位為千克(g);k1000———單位換算系數(shù)。樣品稀釋倍數(shù)應為使用1×緩沖液稀釋上清液或濾液的稀釋倍數(shù)20倍,若除此稀釋步驟外還有進一步稀釋,也要考慮進去。計算結(jié)果保留小數(shù)點后兩位有效數(shù)字。- 9液體樣品中β乳球蛋白致敏原含量按式()- 9lXl=c

×f/1000 …………(9)l式中:-l - nXl ———樣品中β-l - nc ———樣品液中β乳球蛋白致敏原濃度,單位為納克每毫升(g/mL);f ———樣品稀釋倍數(shù);1000———單位換算系數(shù)。此處試樣稀釋倍數(shù)為500倍。計算結(jié)果保留小數(shù)點后兩位有效數(shù)字。232. 結(jié)果表述2-- -ββ乳球蛋白致敏原測定結(jié)果用于標簽標識管理。β-乳球蛋白致敏原測定結(jié)果小于定量限時,-- -β表述為“未檢出β乳球蛋白致敏原”;-乳球蛋白致敏原測定結(jié)果大于定量限時,結(jié)果表述為“檢出β乳球蛋白致敏原”并報告具體測定值。12學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載6SN/T5655.—2023學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載633

質(zhì)量控制133. 試劑失效1出現(xiàn)以下情況之一表明試劑失效,不應進行測定或測定結(jié)果作廢:a)

貯存在試劑瓶中的發(fā)色劑顏色出現(xiàn)藍色;0 8b)

加入終止液后標準品1(

mg/kg)吸光度值<0 8233. 變異系數(shù)2在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的變異系數(shù)不應超過10%。34

檢出限和定量限- 1 L 0 L本方法對β乳球蛋白致敏原的檢出限為2.0mg/kg(

- 1 L 0 L35

防污染措施同第11章。第五法 乳 膠體金免疫層析法36

原理利用抗原-抗體特異性結(jié)合反應,對樣品中的乳致敏原進行膠體金免疫層析試紙條檢測。樣品中的乳致敏原與預包被在反應管內(nèi)的標記抗體發(fā)生反應,形成抗原-抗體結(jié)合物。此抗原-抗體結(jié)合物被預包被在免疫層析試紙條上的特異性抗體捕獲,形成抗體-抗原-抗體的夾心復合物,并在檢測區(qū)顯色,通過目測判讀檢測結(jié)果。37

試劑和材料除特別說明外,實驗用水應符合

GB/T6682規(guī)定的三級水,所有試劑均為分析純。1 l ii ii i i

ii

i t i37. 乳致敏原膠體金免疫層析檢測試劑盒1 l ii ii i i

ii

i t iProcedurestoValdateCharacterstcsofaMethodofAnalyssAppendixM:ValdatonproceduresforquanttatvefoodalergenELISA

methods:communiyguidanceandbestpractces進行評價,評價結(jié)果見附錄I。注:試劑盒詳細信息見附錄J。237. 吸附緩沖液,按照附錄

K執(zhí)行。2 :

0 22 , 2344537. PBS-吐溫

緩沖液

8.gNaCl,0.gKCl,1.44gNaHPO4

0.24gKH :

0 22 , 23445pH

至7.2~7.,用蒸餾水定容至1L。37. 氯化鈉(NaCl)。37. 棉簽拭子13學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載6SN/T5655.—2023學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載638

儀器和設(shè)備1238. 分析天平:感量0.1g。1238.

勻漿機。338.渦旋混勻儀。3438. 離心機:轉(zhuǎn)速≥4000r/min。45 1 538. 單道移液器:00μL~1000μL,5 1 539

分析步驟139. 環(huán)境拭子的采樣111 3 3

512 313 3 3

339.. 吸取1mLPBS-吐溫緩沖液11 3 3

512 313 3 3

339.. 用浸潤的棉簽拭子(9.1.1)的棉頭,擦拭大約10cm×10cm

面積的待檢測環(huán)境表面。39.. 將擦拭取樣后的棉簽拭子(9.1.2)放回裝有PBS-吐溫緩沖液(7.)的離心管中,充分浸洗并擠壓使棉頭與緩沖液充分融合和釋放,擠干棉簽拭子,并丟棄。14 239.. 從離心管中取0.

mL14 23注:若棉簽采樣拭子(9.1.2)含有肉眼清晰可見的致敏原顆粒,則可能含有的致敏原超過1000mg/kg,建議將棉3簽拭子采樣處理后離心管中的樣品液,進一步稀釋后,再用于檢測。239. 清潔用水的采樣22直接取0.

mL清潔用水用于檢測。2339. 食品樣品前處理和提取33139.. 液體樣品:對不少于5mL具有代表性的樣品進行均質(zhì)。3132 0 3

42 439.. 固體樣品:稱取50.0g樣品,向其中加入450mL水和4.032 0 3

42 4機中于室溫(0℃~25℃)000r/min,離心5min,取上清液用于檢測。無離心條件時,可用粗濾紙過濾,得到濾清液用于檢測。若離心后產(chǎn)生脂肪層,取脂肪層下的清液用于檢測。脂肪含量高的樣品,宜進行冷凍離心以去除脂肪。33 3

2022 439.. 含多酚類的樣品:對于如啤酒、葡萄酒、可可、調(diào)味料、33 3

2022 4進行樣品前處理。吸取1mL液體樣品或稱取1.0g均質(zhì)后的固體樣品,加入已含有9mL吸附緩沖液的樣品管中,室溫(0℃~25℃)孵育10min~15min,邊孵育邊振蕩。孵育結(jié)束后置離心機中于室溫(0℃~25℃)000r/min,離心5min,取上清液用于檢測。注:若樣品中可能含有的致敏原濃度超過1000mg/kg,則建議將樣品提取液進一步稀釋后,再進行檢測。密封好的上清液或濾清液在2℃~8℃避光保存不超過2d。439. 樣品的測定41 2 1 213

23

3 21向預包被標記抗體的反應管[見J.a)]中加入0.1 2 1 213

23

3 21于39.、9.、9.

步驟得到的樣品提取液,充分混勻,于室溫(0℃~25℃)孵育5min。向反應管中放入乳致敏原試紙條[見J.b)],反應5min,目測讀取檢測結(jié)果。注:強酸性或強堿性樣品提取液調(diào)節(jié)pH

值至7.5±0.

后再檢測。539. 測定結(jié)果評估和表述55139.. 試紙條反應區(qū)包括2條結(jié)果條帶,從上至下分別為質(zhì)控帶(C)和檢測帶(T)。當質(zhì)控帶(C)出5114學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載41. 本方法對環(huán)境表面的拭子采樣的檢出限針對脫脂奶粉為0.

μg/100學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載41. 本方法對環(huán)境表面的拭子采樣的檢出限針對脫脂奶粉為0.

μg/100cm

(當采樣面積為10cm41.3

本方法對其他樣品表面的拭子采樣的檢出限為1μg/100cm

(當采樣面積為10cm×10cm6現(xiàn)藍紫色條帶,檢測結(jié)果有效,否則檢測結(jié)果無效。5239.. 當質(zhì)控帶(C)出現(xiàn)紫色條帶,檢測帶(T)未出現(xiàn)藍紫色條帶,檢測結(jié)果為陰性,結(jié)果表述為“未52檢出乳致敏原”。5339.. 當質(zhì)控帶(C)和檢測帶(T)均出現(xiàn)藍紫色條帶,檢測結(jié)果為陽性,結(jié)果表述為“檢出乳致敏原”。5340

質(zhì)量控制140. 試劑失效1C試紙條未出現(xiàn)藍紫色質(zhì)控帶(

),檢測結(jié)果無效。C240. 內(nèi)部質(zhì)控2定期或必要時使用乳致敏原質(zhì)控品或?qū)嶒炇易孕兄苽涞娜斯ぬ砑訕悠愤M行檢測質(zhì)量控制。41

檢出限1 L41. 本方法對食品樣品及清潔用水中乳致敏原的檢出限為1mg/kg(1 L22×10cm

時),或0.

μg/采樣拭子(當采樣面積是自行確定時,應明確所記錄的采樣范圍)。22時),或1μg/采樣拭子(當采樣面積是自行確定時,應明確所記錄的采樣范圍)。42

方法局限性本文件的膠體金免疫層析方法適用于檢測乳致敏原,檢測結(jié)果為定性檢測結(jié)果,無法獲得定量檢測結(jié)果。若樣品中含有特別高濃度的乳致敏原(>1000mg/kg),則檢測帶的顏色可能會變淺,甚至完全抑制其形成。若樣品可能含有特別高濃度的目標檢測致敏原,則建議對樣品進行大倍數(shù)稀釋。43

防污染措施同第11章。15學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載6SN/T5655.—2023學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載6附 錄

A(資料性)乳致敏原酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒評價結(jié)果1)1A. 線性和范圍15 5線性范圍為2.

mg/kg~67.05 52A. 檢出限和定量限27 5對乳致敏原的檢出限為0.0mg/kg(L),定量限為2.07 53A. 正確度3對人工加標的餅干基質(zhì)回收率范圍為98.0%~116.0%,對人工加標的嬰幼兒豆粉基質(zhì)回收率范圍為93.3%~104.0%,對人工加標的巧克力基質(zhì)回收率范圍為108.0%~128.0%,對人工加標的不含乳冰淇淋基質(zhì)回收率范圍為

98.0%

~112.0%,對人工加標的蛋糕基質(zhì)回收率范圍為

94.0%

~102.0%,對人工加標的嬰幼兒米粉基質(zhì)回收率范圍為102.0%~105.0%,對人工加標的薯片基質(zhì)回收率范圍為108.0%~112.0%,對人工加標的全麥面包基質(zhì)回收率范圍為98.0%~104.0%,對人工加標的面包基質(zhì)回收率范圍為98.0%~105.3%,對人工加標的雞蛋面基質(zhì)回收率范圍為94.3%~97.0%,對人工加標的麥片基質(zhì)回收率范圍為105.3%~108.0%,對人工加標的黃油餅干基質(zhì)回收率范圍為106.0%~107.0%,對人工加標的玉米粉基質(zhì)回收率范圍為94.3%~98.0%,對人工加標的沙拉醬基質(zhì)回收率范圍為104.0%~109.3%

,對人工加標的各類香腸樣品使用水稀釋的回收率范圍為70.

%~93.0%。4A. 特異性4對谷物類、豆類、種子類、肉類、堅果、香料、調(diào)料、食品添加劑、果汁、蛋等84種食品樣品交叉反應率為0。5A. 精密度5對巧克力、餅干、蛋糕、嬰幼兒豆粉、嬰幼兒米粉、薯片、全麥面包、面包、雞蛋面、麥片、黃油餅干、不含乳冰淇淋、玉米粉、沙拉醬進行不同濃度的人工加標,變異系數(shù)范圍為2.1%~7.6%,平均值為5.3%,回收率范圍為91.0%~112.0%,回收率平均值為101.4%。6A. 耐變性69 1 9分別對3個實驗條件進行耐變性實驗:樣品/標準品加樣量(0μL,10μL),孵育時間9 1 91311min),孵育溫度(8℃,0℃)。實驗結(jié)果表明,131)

1)

本評價結(jié)果僅適用于rbipharmRIDASCREEN

FAST

Mik試劑盒。給出這一信息是為了方便本文件的使用者。如果采用其他產(chǎn)品可以得到相同或更好的檢測效果,經(jīng)實驗評估后可以使用這些等效產(chǎn)品。16學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載6SN/T5655.—2023學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載6附 錄 B(規(guī)范性)乳致敏原酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒2)1B. 試劑盒組成1::

77a)

預包被乳致敏原特異性抗體的48孔可拆分微孔板

8×6::

77b)

11×酶標記物濃縮液

0.

mL/瓶×1瓶;c)

酶標記物緩沖液:

mL/瓶×1瓶;1132d)

10×洗滌緩沖液濃縮液:00mL/瓶×1瓶;1132e)

10×致敏原提取緩沖濃縮液:00mL/瓶×1瓶;f)

2×提取液2濃縮液:0mL/瓶×3瓶;g)

添加劑1:g×1瓶;33 53 53 53 5h)

標準品1:1.

mL/33 53 53 53 5i)

標準品2:1.

mL/瓶×1瓶,乳蛋白含量為2.

mg/kg;j)

標準品3:1.

mL/瓶×1瓶,乳蛋白含量為7.

mg/kg;k)

標準品4:1.

mL/瓶×1瓶,乳蛋白含量為22.

mg/kg;l)

標準品5:1.

mL/瓶×1瓶,乳蛋白含量為67.mg/kg;1m)

底物/發(fā)色劑:0mL/瓶×1瓶;11n)

終止液:4mL/瓶×1瓶。12B. 試劑盒驗收和保存22122 223243B.. 每個批號試劑盒應進行回收率測試的驗收試驗,2122 223243B.. 試劑盒于2℃~8℃避光保存,使用前回復至室溫(0℃~25℃)。B.. 不同批號試劑盒中組分不應混用。B.. 超過有效期的試劑盒不應使用。B. 試劑盒評估31B.. 定期進行回收率評估,回收率應在80%~120%之間。31324B.. 回收率評估可使用商品化乳致敏原質(zhì)控品或?qū)嶒炇易孕兄苽涞娜斯ぬ砑訕悠贰?24B. 標準曲線譜圖1標準曲線譜圖示例見圖B.。12)

2)

rbipharmRIDASCREEN

FAST

Mik試劑盒是適合的市售產(chǎn)品實例。給出這一信息是為了方便本文件的使用者。如果采用其他產(chǎn)品可以得到相同或更好的檢測效果,經(jīng)實驗評估后可以使用這些等效產(chǎn)品。17學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載6SN/T5655.—2023學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載61圖B. 標準曲線譜圖示例118學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載3)

本評價結(jié)果僅適用于rbipharmRIDASCREEN

FAST學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載3)

本評價結(jié)果僅適用于rbipharmRIDASCREEN

FASTCasen試劑盒。給出這一信息是為了方便本文件的6附 錄 C(資料性)酪蛋白致敏原酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒評價結(jié)果3)1C. 線性和范圍15 5線性范圍為0.

mg/kg~13.05 52C. 檢出限和定量限21 L 5使用致敏原提取緩沖液時,對酪蛋白的檢出限為0.2mg/kg(

),定量限為0.1 L 57 L 5 L提取液2時,對酪蛋白的檢出限為0.1mg/kg(

),定量限為7 L 5 L3C. 正確度3866 22 2對人工加標的脆爆米基質(zhì)回收率范圍為80.6%~101.2%,對人工加標的巧克力基質(zhì)回收率866 22 2為94.1%~114.0%,對人工加標的冰淇淋基質(zhì)回收率范圍為106.0%~111.0%,對人工加標的葡萄酒基質(zhì)回收率范圍為100.0%~113.3%,對人工加標的冰茶粉基質(zhì)回收率范圍為102.7%~108.0%,對人工加標的嬰幼兒米粉基質(zhì)回收率范圍為104.0%~106.0%,對人工加標的嬰幼兒豆粉基質(zhì)回收率范圍為102.0%~108.6%,對人工加標的肉泥輔食基質(zhì)回收率范圍為108.0%~110.0%,對人工加標的果蔬輔食基質(zhì)回收率范圍為102.0%~107.9%,對人工加標的橙汁基質(zhì)回收率范圍為97.0%~104.2%,對人工加標的蘋果汁基質(zhì)回收率范圍為99.3%~108.0%,對人工加標的果汁飲料基質(zhì)回收率范圍為102.0%~109.4%,對人工加標的烘焙預混粉基質(zhì)回收率范圍為102.0%~107.3%,對人工加標的餅干基質(zhì)回收率范圍為105.7%~108.2%,對人工加標的玉米粉樣品回收率范圍為104.

%~107.8%,對人工加標的早餐谷物樣品回收率范圍為103.

%~105.7%,對人工加標的蛋糕樣品回收率范圍為105.

%~108.2%,對人工加標的含堅果玉米片樣品回收率范圍為105.

%~109.4%,對人工加標的大豆粉樣品回收率范圍為105.

%~108.8%,對人工加標的豆奶樣品回收率范圍為105.

%~4109.0%,對人工加標的米餅樣品回收率范圍為104.

%~109.2%。4C. 特異性對谷物類、豆類、種子類、肉類、堅果、香料、調(diào)料、食品添加劑、果汁、蛋等85種食品樣品使用不同的樣品提取方法后檢測交叉反應率均為0。5C. 精密度5對巧克力、白葡萄酒、紅葡萄酒、冰茶粉、嬰幼兒米粉、嬰幼兒豆粉、肉泥輔食、果蔬輔食、冰淇淋、橙汁、蘋果汁、果汁飲料、烘焙預混粉、餅干、脆爆米、玉米粉、早餐谷物、蛋糕、含堅果玉米片、大豆粉、豆奶、使用者。如果采用其他產(chǎn)品可以得到相同或更好的檢測效果,經(jīng)實驗評估后可以使用這些等效產(chǎn)品。19學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載6SN/T5655.—2023學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載6米餅進行不同濃度的人工加標,變異系數(shù)范圍為3.9%~8.3%,平均值為6.3%,回收率范圍為89.0%~111.4%,回收率平均值為101.7%。6C. 耐變性699 1 9 1 1 3分別對4個實驗條件進行耐變性實驗:樣品提取水浴溫度(5℃,90℃),樣品/標99 1 9 1 1 3(0μL,10μL),孵育時間(

min,1min),孵育溫度(8℃,0℃)。實驗結(jié)果表明,參數(shù)的變化對檢測結(jié)果無顯著影響。20學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載6SN/T5655.—2023學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載6附 錄

D(規(guī)范性)酪蛋白致敏原酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒4)1D. 試劑盒組成1::

77a)

預包被抗體的48孔可拆分微孔板

8×6::

77b)

11×酶標記物濃縮液

0.

mL/瓶×1瓶;c)

酶標記物緩沖液:

mL/瓶×1瓶;1132d)

10×洗滌緩沖液濃縮液:00mL/瓶×1瓶;1132e)

10×致敏原提取緩沖濃縮液:00mL/瓶×1瓶;f)

2×提取液2:0mL/瓶×1瓶;g)

添加劑1:g×1瓶;33 53 53 53 5h)

標準品1:1.

mL/33 53 53 53 5i)

標準品2:1.

mL/瓶×1瓶,酪蛋白含量為0.

mg/kg;j)

標準品3:1.

mL/瓶×1瓶,酪蛋白含量為1.

mg/kg;k)

標準品4:1.

mL/瓶×1瓶,酪蛋白含量為4.

mg/kg;l)

標準品5:1.

mL/瓶×1瓶,酪蛋白含量為13.

mg/kg;1m)

底物/發(fā)色劑:0mL/瓶×1瓶;11n)

終止液:4mL/瓶×1瓶。12D. 試劑盒驗收和保存22122 223243D.. 每個批號試劑盒應進行回收率測試的驗收試驗,2122 223243D.. 試劑盒于2℃~8℃避光保存,使用前回復至室溫(0℃~25℃)。D.. 不同批號試劑盒中組分不應混用。D.. 超過有效期的試劑盒不應使用。D. 試劑盒評估31D.. 定期進行回收率評估,回收率應在80%~120%之間31324D.. 回收率評估可使用商品化乳致敏原質(zhì)控品或?qū)嶒炇易孕兄苽涞娜斯ぬ砑訕悠贰?24D. 標準曲線譜圖1標準曲線譜圖示例見圖D.。14)

4)

rbipharmRIDASCREEN

FASTCasen試劑盒是適合的市售產(chǎn)品實例。給出這一信息是為了方便本文件的使用者。如果采用其他產(chǎn)品可以得到相同或更好的檢測效果,經(jīng)實驗評估后可以使用這些等效產(chǎn)品。21學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載6SN/T5655.—2023學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載61圖D. 標準曲線譜圖示例122學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載5)

本評價結(jié)果僅適用于rbipharmRIDASCREEN

FAST學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載5)

本評價結(jié)果僅適用于rbipharmRIDASCREEN

FASTβLactoglobuln試劑盒。給出這一信息是為了方便本6附 錄 E(資料性)β-乳球蛋白致敏原夾心酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒評價結(jié)果5)1E. 線性和范圍11 5線性范圍為0.67mg/kg~4.01 52E. 檢出限和定量限21對β-乳球蛋白的檢出限為0.4mg/kg(L),定量限為0.67mg/kg(L)13E. 正確度3對人工加標的巧克力基質(zhì)回收率范圍為88.0%~112.7%,對人工加標的冰淇淋基質(zhì)回收率范圍為80.7%~89.3%,對人工加標的脆米花基質(zhì)回收率范圍為89.8%~104.9%,對人工加標的香腸基質(zhì)回收率范圍為80.7%~82.6%,對人工加標的葡萄酒基質(zhì)回收率范圍為86.0%~91.6%,對人工加標的嬰幼兒米粉基質(zhì)回收率范圍為90.0%~94.9%,對人工加標的嬰幼兒豆粉基質(zhì)回收率范圍為88.0%~96.9%,對人工加標的嬰幼兒輔食基質(zhì)回收率范圍為76.0%~91.0%,對人工加標的餅干基質(zhì)回收率范圍為86.0%~96.2%,對人工加標的烘焙預混粉基質(zhì)回收率范圍為90.9%~92.8%,對人工加標的早餐谷物基質(zhì)回收率范圍為86.0%~95.2%,對人工加標的豆奶基質(zhì)回收率范圍為92.0%~97.1%,對人工加標的玉米粉基質(zhì)回收率范圍為88.7%~100.6%,對人工加標的蛋糕基質(zhì)回收率范圍7為84.0%~105.1%

,對人工加標的果汁樣品回收率范圍為94.

%~106.0%。74E. 特異性4對谷物類、豆類、種子類、肉類、堅果、香料、調(diào)料、食品添加劑、果汁、蛋等85種食品樣品使用不同的樣品提取方法后檢測交叉反應率均為0。5E. 精密度5對巧克力、脆米花、香腸、葡萄酒、嬰幼兒米粉、嬰幼兒豆粉、嬰幼兒輔食、餅干、烘焙預混粉、早餐谷物、豆奶、玉米粉、蛋糕、果汁進行不同濃度的人工加標,變異系數(shù)范圍為3.9%~8.4%,平均值為66.2%,回收率范圍為92.0%~113.0%,回收率平均值為106.6%。6E. 耐變性99 1 91 1 3分別對4個實驗條件進行耐變性實驗:樣品提取水浴溫度(5℃,90℃),樣品/標99 1 91 1 3(0μL,10μL),孵育時間(

min,1min),孵育溫度(8℃,0℃)。實驗結(jié)果表明,參數(shù)的變化對檢測結(jié)果無顯著影響

。文件的使用者。如果采用其他產(chǎn)品可以得到相同或更好的檢測效果,經(jīng)實驗評估后可以使用這些等效產(chǎn)品。23學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載6SN/T5655.—2023學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載6附 錄 F(規(guī)范性)-β乳球蛋白致敏原夾心酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒6)-1F. 試劑盒組成1:6a)

預包被β-乳球蛋白抗體的48孔可拆分微孔板

8×6孔;:6b)

1×酶標記物:

mL/瓶×1瓶;1132c)

10×洗滌緩沖液濃縮液:00mL/瓶×1瓶;1132d)

10×致敏原提取緩沖濃縮液:00mL/瓶×1瓶;e)

2×提取液2:0mL/瓶×3瓶;f)

添加劑1:g×1瓶;3 β3 1β3 5β3 5β3 5βg)3 β3 1β3 5β3 5β3 5βh)

標準品2:1.

mL/瓶×1瓶,-乳球蛋白含量為0.67mg/kg;i)

標準品3:1.

mL/瓶×1瓶,-乳球蛋白含量為0.

mg/kg;j)

標準品4:1.

mL/瓶×1瓶,-乳球蛋白白含量為1.

mg/kg;k)

標準品5:1.

mL/瓶×1瓶,-乳球蛋白白含量為4.

mg/kg;1l)

底物/發(fā)色劑:0mL/瓶×1瓶;11m)

終止液:4mL/瓶×1瓶。12F. 試劑盒驗收和保存22122 223243F.. 每個批號試劑盒應進行回收率測試的驗收試驗,2122 223243F.. 試劑盒于2℃~8℃避光保存,使用前回復至室溫(0℃~25℃)。F..不同批號試劑盒中組分不應混用。F.. 超過有效期的試劑盒不應使用。F. 試劑盒評估31F.. 定期進行回收率評估,回收率應在80%~120%之間。3132F.. 回收率評估可使用商品化β-乳球蛋白致敏原質(zhì)控品或?qū)嶒炇易孕兄苽涞娜斯ぬ砑訕悠贰?24F. 標準曲線譜圖41標準曲線譜圖示例見圖F.。16)

6)

rbipharmRIDASCREEN

FASTβLactoglobuln試劑盒是適合的市售產(chǎn)品實例。給出這一信息是為了方便本文件的使用者。如果采用其他產(chǎn)品可以得到相同或更好的檢測效果,經(jīng)實驗評估后可以使用這些等效產(chǎn)品。24學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載6SN/T5655.—2023學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載61圖F. 標準曲線譜圖示例125學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載6SN/T5655.—2023學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載6附 錄

G(資料性)β-乳球蛋白致敏原競爭酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒評價結(jié)果7)1G. 線性和范圍10線性范圍為5.

mg/kg~810.

mg/kg。02G. 檢出限和定量限21 L 0 L對β-乳球蛋白致敏原的檢出限為2.0mg/kg(

),定量限為1 L 0 L3G. 正確度3對人工加標的低致敏性嬰幼兒配方粉基質(zhì)回收率范圍為88.6%~102%。4G. 特異性4對谷物類、豆類、種子