高效液相色譜法測定飲料中咖啡因的含量

實驗102高效液相色譜法測定飲料中咖啡因的含量102.1實驗?zāi)康?1)掌握用高效液相色譜法測定飲料中咖啡因的方法。(2)掌握采用高效液相色譜法進行定性及定量分析的根本方法。

102.2實驗原理咖啡因又稱咖啡堿，屬黃嘌呤衍生物，化學(xué)名稱為l,3,7-三甲基黃嘌呤，是由茶葉或咖啡中提取而得的一種生物堿。它能興奮大腦皮層，使人精神興奮?？Х戎泻Х纫蚣s為l.2%～1.8%，茶葉中約為2.0%～4.7%?？蓸凤嬃?、APC藥片均含咖啡因。其分子式為C8H10O2N4,結(jié)構(gòu)式為：

定量測定咖啡因的傳統(tǒng)分析方法是采用萃取分光光度法。用反相高效液相色譜法將飲料中的咖啡因與其他組分〔如：單丁酸、咖啡酸、蔗糖等〕別離后，將已配制的濃度不同的咖啡因標準溶液也注入色譜系統(tǒng)。如流速和泵的壓力在整個實驗過程中是恒定的，測定它們在色譜圖上的保存時間tR〔或保存距離〕或峰面積A后，可直接用tR定性，用峰面積作為定量測定的參數(shù)，采用工作曲線法〔即外標法〕測定飲料中的咖啡因含量。102.3操作流程1．標準儲藏液的配制：準確稱取25.0mg咖啡因標準試劑，用配制的流動相溶解，轉(zhuǎn)入100mL容量瓶中，稀釋至刻度。2．用標準儲藏液配制質(zhì)量濃度分別為25g/mL，50g/mL，75g/mL，100g/mL，125g/mL系列標準溶液。3．啟動泵，翻開檢測器，設(shè)置泵的流速為2.3mL/mm，檢測器的靈敏度設(shè)在0.08AUFS，翻開記錄儀，將紙速設(shè)在1cm/min。當(dāng)流動相通過色譜柱約5～10min．記錄儀上基線穩(wěn)定后，開始進樣。4．將進樣閥放在半截〔LOAD〕位時，用注射器取25L濃度最低的標準樣〔比進佯閥上定量管多5L以上)，注入進樣閥中。5．將進樣閥從裝載〔LOAD〕位轉(zhuǎn)向進樣〔1NJECT0位，同時按標記鈕(MARKER)，使在記錄紙上翻開進樣信號。6．當(dāng)咖啡因的色譜峰出完后，按照步驟4～5連續(xù)操作2次，使最低濃度的標準試液獲得3張色譜圖。7．按標準試液濃度增加的順序，按步驟4～6操作，使每一種標準樣獲得3個數(shù)據(jù)。8．取2mL咖啡飲料試液放入25mL容量瓶中〔或取5mL茶液放入50mL容量瓶中〕，分別用流動相稀釋至刻度。9．按步驟4～6操作，分析飲料試液〔咖啡或茶〕。102.4本卷須知〔1〕鋼瓶的工作壓力，一定要控制在所規(guī)定范圍內(nèi)，不得超壓工作。必須切記，保障平安。〔2〕實驗結(jié)束后，檢查儀器是否正常，關(guān)閉是否正確。102.5問題討論〔1〕解釋用反相柱n-C18測定咖啡因的原理?！?〕在色譜分析中為什么常采用相對校正因子fi？〔1〕解釋用反相柱n-C18測定咖啡因的原理。答：反相柱n-C18,是將非極性物質(zhì)n-C18烷〔正構(gòu)烷烴〕鍵合到硅膠基質(zhì)上，別離過程中以極性溶劑為流動相，實現(xiàn)弱極性化合物的別離。與其他組分〔如：單丁酸、咖啡酸、蔗糖等〕相比，咖啡因為弱極性化合物。102.6參考答案

答：試樣中各組分經(jīng)色譜柱別離后進入檢測器，在一定操作條件下，被測組分的質(zhì)量m〔或濃度c〕與檢測器響應(yīng)訊號〔色譜峰的峰高h或峰面積A〕成正比，即m=f′A。這是色譜分析定量的依據(jù)。式中的f被稱為絕對校正因子。由于同一檢測器對不同的組分響應(yīng)值不一樣，即同樣的量在檢測器中產(chǎn)生信號大小〔峰高h或峰面積A〕不同，為了使檢測器產(chǎn)生的信號能真實地反響出物質(zhì)的含量，需要對響應(yīng)值進行校正，這就是校正因子的意義。由于校正因子f′與色譜操作條件有密切關(guān)系，不易準確測定〔不是一個定植〕，因此，在色譜分析中采用相對校正因子fi，既被測物質(zhì)i和標準物質(zhì)s絕對校正因子的比?！?〕在色譜分析中為什么常采用相對校正因子fi？中國課件站

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