Maldi-tof技術與質(zhì)譜儀的使用課件

MALDI-TOF技術與質(zhì)譜儀的使用Maldi-tof技術與質(zhì)譜儀的使用MALDI技術離子化技術：MALDIMatrix-AssistedLaserDesorption/IonizationMALDI技術的原理樣品與基質(zhì)，在樣品靶表面形成的共結晶薄膜激光照射，基質(zhì)吸收能量基質(zhì)把能量傳遞給樣品分子，將電荷轉移給樣品，樣品電離。Maldi-tof技術與質(zhì)譜儀的使用MALDI技術中基質(zhì)的作用基質(zhì)的作用把樣品分子彼此分開(基質(zhì)：樣品=10，000：1)，削弱樣品分子之間的相互作用?；|(zhì)吸收激光的能量，并將部分能量傳遞給樣品。幫助樣品離子化。Maldi-tof技術與質(zhì)譜儀的使用常用基質(zhì)及選擇基質(zhì)樣品HCCA蛋白，多肽，糖，小分子，極性聚合物DHB蛋白，多肽，糖，小分子，極性聚合物HPA核苷酸Dithranol非極性聚合物IAA非極性聚合物Maldi-tof技術與質(zhì)譜儀的使用LaserSampleTargetDetectorClockTime-of-FlightMolecularMassTOF的基本原理

Maldi-tof技術與質(zhì)譜儀的使用EnablingLifeScienceToolsBasedonMassSpectrometryTMEk

=zqUEk=1/2mV2V2=2qUz/m=2qU/(m/z)Maldi-tof技術與質(zhì)譜儀的使用triggerdiodelaservariableattenuator250l/sturbo250l/sturbo3.4mreflector1.8mlinearMALDITOFMS的構成檢測器1：線性模式檢測器2：反射模式Maldi-tof技術與質(zhì)譜儀的使用反射模式下TOF的分辨率高于線性模式Maldi-tof技術與質(zhì)譜儀的使用線性模式和反射模式優(yōu)缺點所選方法（即flexcontrolmethods）反射模式（linear）一般測試分子量小于4000的樣品分辨率高，單同位素清晰準確線性模式（reflection）一般測試大分子量樣品（M>4000）分辨率低，得到是平均分子量的質(zhì)荷比Maldi-tof技術與質(zhì)譜儀的使用樣品和標準品點靶標準品的作用：對儀器參數(shù)進行校準，使樣品測試的質(zhì)量準確度更高。注意：樣品和標準品，必須點靶方式一致，所選基質(zhì)一樣。Maldi-tof技術與質(zhì)譜儀的使用內(nèi)標法和外標法內(nèi)標法:樣品與標準品點在同一靶點。優(yōu)點：樣品和標準點條件一致，質(zhì)量準確度更高，質(zhì)荷比可準確到0.02。缺點：標準品干擾樣品出峰。外標法:樣品與標準品點在不同靶點。優(yōu)點：無標準品干擾缺點：質(zhì)量準確度低，質(zhì)荷比準確到0.1。Maldi-tof技術與質(zhì)譜儀的使用MALDI常用點靶方法干滴法（DriedDroplet）樣品和基質(zhì)充分混合，點樣樣品靶上。注意：以HCCA和DHB為基質(zhì)的樣品，一般用干滴法點靶薄層法先將基質(zhì)點于靶上，帶基質(zhì)結晶后，再把樣品溶液點于基質(zhì)的層上。注意：以HPA為基質(zhì)的樣品，都要采用薄層法。Maldi-tof技術與質(zhì)譜儀的使用點樣方法：DriedDropletmatrixanalytesamplesolutionsampledepositionAnalytedispersedthroughoutmatrixcrystalsEnablingLifeScienceToolsBasedonMassSpectrometryTMMaldi-tof技術與質(zhì)譜儀的使用MALDI-TOF質(zhì)譜儀的使用標準品點靶；樣品點靶；進樣品靶；質(zhì)譜測試和圖譜保存：flexcontrol軟件；圖譜讀取和分析：flexanalysis軟件Maldi-tof技術與質(zhì)譜儀的使用點靶注意事項移液槍的使用取不同試劑，需要更換一次性槍頭。點靶注意事項防止基質(zhì)污染，防止標準品污染，防止樣品靶污染，防止試劑污染防止樣品靶跌落點靶時，槍頭請勿接觸樣品靶（懸點）點完靶，請在靶表相應位置標明樣品名Maldi-tof技術與質(zhì)譜儀的使用進靶和退靶點擊儀器右側面的綠色按鈕（loadandeject按鈕）。在flexControl軟件里，點擊carrier后面按鈕進退靶按鈕Maldi-tof技術與質(zhì)譜儀的使用質(zhì)譜測試和圖譜保存質(zhì)譜測試的軟件是：flexcontrol打開軟件選擇方法校準儀器的參數(shù)（與ESI-MS（LCQ）差別）掃描樣品保存數(shù)據(jù)上傳數(shù)據(jù)至大型儀器管理平臺文件系統(tǒng)Maldi-tof技術與質(zhì)譜儀的使用打開桌面Flexcontrol軟件雙擊打開flexcontrolMaldi-tof技術與質(zhì)譜儀的使用選擇方法選擇方法Maldi-tof技術與質(zhì)譜儀的使用方法的選擇根據(jù)分子量大小選擇相應的方法方法路徑：D:\methods\flexcontrolmethods\usualmethod一般樣品正離子都能出峰；對于正離子模式不出峰的樣品，改換為負離子模式的方法掃描。更換方法時，對以前的方法不要保存。Maldi-tof技術與質(zhì)譜儀的使用選擇方法L:線性模式R:反射模式P:正離子模式N:負離子模式PepMix:多肽混合物，適合范圍700-4000DaProtMix:蛋白混合物，適合范圍5000–20000DaClinProt:多肽/蛋白化合物，適合范圍1000–20000Da66kDa:大分子蛋白，適合范圍20000-100000DaProteomics_HPC:高精度校正，適合范圍700-4000DaRP_lowmolecular_HPC高精度校準，適合范圍100-1000DaMaldi-tof技術與質(zhì)譜儀的使用2.反射模式；正離子；高精度；700-4000Da；與RP_PepMix.par差別不大1.反射模式；正離子；700-4000Da3.線性模式；正離子；700-4000Da4.反射模式；負離子；700-4000Da5.線性模式；正離子；5000-20000Da6.線性模式；負離子；700-4000Da7.反射模式；正離子；100-1000Maldi-tof技術與質(zhì)譜儀的使用Flexcontrol的按鈕檢測范圍，可微調(diào)掃描區(qū)放大表峰顯示單次掃描顯示疊加圖Maldi-tof技術與質(zhì)譜儀的使用保存數(shù)據(jù)的按鈕Maldi-tof技術與質(zhì)譜儀的使用校準儀器的參數(shù)Maldi-tof技術與質(zhì)譜儀的使用掃描標準品時，出峰太弱，多疊加幾次。點擊Calibrate，選中疊加圖，點擊自動校準（automaticassign），點擊apply，即完成自動校正。如果自動校準通過不了，進行手動校準。注意：必須有三個以上的點匹配上，匹配點越多越好Maldi-tof技術與質(zhì)譜儀的使用手動校準Maldi-tof技術與質(zhì)譜儀的使用掃描樣品和保存數(shù)據(jù)找到樣品點的位置掃描樣品，疊加并保存數(shù)據(jù)

注意：數(shù)據(jù)要保存到課題文件夾內(nèi)，例如：劉育課題組數(shù)據(jù)保存到D:\data\Liuyu\2011\06Maldi-tof技術與質(zhì)譜儀的使用在flexAnalysis打開保存的路徑樣品的名字保存的是疊加圖FlexAnalysis方法，可不選擇Maldi-tof技術與質(zhì)譜儀的使用數(shù)據(jù)的上傳找到所保存的數(shù)據(jù)文件右鍵點擊發(fā)送到壓縮文件夾（zipped）打開大型儀器管理系統(tǒng)網(wǎng)站（.cn）文件系統(tǒng)，上傳壓縮后的數(shù)據(jù)文件夾。Maldi-tof技術與質(zhì)譜儀的使用Maldi-tof技術與質(zhì)譜儀的使用MALDI質(zhì)譜圖解析常見離子峰：正電荷模式：加質(zhì)子峰；加合堿金屬峰（加Na+峰；加K+峰）;減e-峰負電荷模式：加e-峰，加Cl-多出現(xiàn)單電荷分子離子峰，雙電荷和多電荷峰弱或幾乎不出現(xiàn)。Maldi-tof技術與質(zhì)譜儀的使用MALDI-TOF對樣品的要求MALDI優(yōu)點：耐受高濃度的鹽、緩沖劑和其他非揮發(fā)性的成分。兩種雜質(zhì)嚴重影響MALDI測試：離子型去垢劑（表面活性劑），如十