－周紅-AS血栓形成機(jī)制

抗磷脂綜合征血栓形成機(jī)制

周紅江蘇大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與醫(yī)學(xué)技術(shù)學(xué)院內(nèi)容提要APS概念A(yù)PS診斷標(biāo)準(zhǔn)抗磷脂抗體及b2糖蛋白IAPS血栓形成機(jī)制b2GPI受體及其信號通路APS研究展望抗磷脂綜合征

(antiphospholipidsyndrome，APS)

APSisanautoimmunedisease,linksimmunologywiththrombosisandvasculardisease,alsonamedHughesSyndrome

由Hughes等命名于1980’，是一種非器官特異性的自身免疫性疾病APS臨床表現(xiàn)網(wǎng)狀青斑壞疽腦梗塞瓣膜損傷流產(chǎn)或死胎自身免疫病APS動(dòng)靜脈血栓反復(fù)流產(chǎn)血小板減少APS的診斷血栓反復(fù)流產(chǎn)+APS狼瘡樣抗凝物抗心磷脂抗體anti-b2GPIArthritisRheum,1999,42(7):1309-1311Thromb

Haemost,2006,4(2):295-306臨床檢驗(yàn)雜志，2008，26：230-232至少同時(shí)符合一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)和一項(xiàng)臨床指標(biāo)才能診斷為APS以癲癇為首發(fā)癥狀的抗磷脂抗體綜合征1例報(bào)道患者,女,42歲,發(fā)作性四肢抽搐兩年,發(fā)作時(shí)意識不清，診斷為“癲癇”。實(shí)驗(yàn)室檢查:抗核抗體、抗-RNP、抗-Sm、抗-SSA、抗-SSB、抗-JO-1、抗-SCL-70及抗雙鏈DNA均為陰性?？剐牧字贵w(ACA)兩次均為強(qiáng)陽性,狼瘡抗凝物(LA)陽性,頭顱CT:

左側(cè)顳葉放射冠區(qū)腦梗死,右側(cè)半卵圓中心軟化灶。頭顱CTA:左側(cè)大腦中動(dòng)脈多條分支狹窄,部分分支閉塞,右側(cè)大腦中動(dòng)脈側(cè)裂池段節(jié)段性狹窄。心臟彩超:二尖瓣增厚,后葉贅生物(10mm×6mm)并中度關(guān)閉不全。診斷:根據(jù)患者臨床表現(xiàn)及實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果,診斷為抗磷脂抗體綜合征。血栓與止血學(xué)，2008,14(2):93-94抗磷脂抗體及b2糖蛋白I狼瘡抗凝物(LA)1952年，Conley和Hartman發(fā)現(xiàn)約10％的SLE患者體內(nèi)存在一種循環(huán)抗凝物。1972年,Feinstein和Rapaport正式命名LA。

一類能夠干擾磷脂依賴性的凝血試驗(yàn)的免疫球蛋白，可分為IgG、IgM及IgG/IgM混和型。

抗心磷脂抗體(ACL)

1983年,由Harris等發(fā)現(xiàn),為一種標(biāo)志抗體。這類抗體與LA是二組不同的物質(zhì)，且與之存在著交叉反應(yīng)。研究發(fā)現(xiàn)ACL是診斷APS更敏感的指標(biāo)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)ACL與陰性電荷的磷脂,如磷脂酰絲氨酸(PS)以及磷脂酰甘油酯(PG)等存在交叉反應(yīng),故將ACL稱為抗磷脂抗體(APL),將與這類抗體有關(guān)的疾病稱為抗磷脂綜合征(APS)。ACL

：二磷酸?；?、心磷脂、乙酰心磷脂、二甲基心磷脂抗β2GPI抗體

1990年McNeil發(fā)現(xiàn)用離子交換及磷脂親和純化的ACL不能在無小牛血清的ELISA反應(yīng)系統(tǒng)中與反應(yīng)板上的心磷脂結(jié)合，當(dāng)反應(yīng)系統(tǒng)恢復(fù)血清成分后，ACL也恢復(fù)與心磷脂結(jié)合的活性，成分分析表明起這種作用的是血清中的磷脂結(jié)合蛋白-β2糖蛋白I(β2-glyooproteinI，β2GPI)。近年來研究表明，抗β2GPI抗體與APS血栓形成強(qiáng)相關(guān)。beta2糖蛋白I(b2GPI)別稱:APOH，1961年發(fā)現(xiàn)基因:17q23,mRNA約112kb部位:血漿，平均含量約0.2mg/ml組成:326氨基酸殘基，分子量約為50kD功能:凝血及免疫(APS等自身免疫性疾病及一些感染性疾病相關(guān))

生理學(xué)功能尚未完全闡明b2GPI結(jié)構(gòu)形狀:魚鉤狀組成:4個(gè)補(bǔ)體調(diào)控蛋白序列（CCP1-CCP4）和一個(gè)V區(qū)組成．側(cè)鏈:4個(gè)糖基側(cè)鏈，CCP3(3),CCP4(1)b片層（藍(lán)）：CCP2(6);CCP1,3,4(7)；V區(qū)(4)螺旋(紅）：V區(qū)(2)a螺旋（263-266）

310螺旋（320-322）b2GPI結(jié)構(gòu)的二種形式電鏡圖像PhotoscourtesyofDr.MatthiasM?rgelin,UniversityofLund,Sweden模式圖像

JThromb

Haemost，2011,9(7):1275-84.b2GPI可能的生理功能參與免疫防衛(wèi)參與凝血調(diào)節(jié)參與纖溶調(diào)節(jié)清除凋亡細(xì)胞血管生成調(diào)節(jié)APL的產(chǎn)生機(jī)制凋亡細(xì)胞清除障礙假說b2GPI自身反應(yīng)性T細(xì)胞假說TLRs假說分子模擬假說Blood.2007,109:422-430凋亡細(xì)胞清除障礙假說SLE病人的凋亡細(xì)胞清除出現(xiàn)問題遺傳學(xué)易感個(gè)體針對凋亡細(xì)胞表面結(jié)合的分子產(chǎn)生免疫反應(yīng)APS中凋亡細(xì)胞的PS結(jié)合b2GPI和凝血酶原和AnnexinA2凋亡細(xì)胞清除出現(xiàn)問題&凋亡細(xì)胞增多抗b2GPI和凝血酶原和AnnexinA2抗體產(chǎn)生b2GPI自身反應(yīng)性T細(xì)胞假說APS的抗體主要為低親和力的IgG2型抗體APS和健康人存在b2GPI自身反應(yīng)性T細(xì)胞b2GPI/PS復(fù)合物被抗原遞呈細(xì)胞遞呈隱蔽表位凋亡清除障礙時(shí)b2GPI結(jié)合PS可能抗原遞呈提供基礎(chǔ)b2GPI自身反應(yīng)性CD4+/HLAII被抗原遞呈細(xì)胞活化IL6和CD40-CD40L的相互作用介導(dǎo)B細(xì)胞產(chǎn)生抗b2GPITLRs假說Oxi-b2GPI結(jié)合DC細(xì)胞并誘導(dǎo)其活化成熟繼而啟動(dòng)未致敏的T細(xì)胞和Th1細(xì)胞的極化DC活化導(dǎo)致TLRs觸發(fā)的信號級聯(lián)放大Oxi-b2GPI或抗b2GPI/Oxi-b2GPI復(fù)合物作為內(nèi)源性免疫佐劑通過TLR4導(dǎo)致更多的抗體產(chǎn)生

抗b2GPI/b2GPI復(fù)合物可能通過結(jié)合和交聯(lián)TLR4導(dǎo)致自身抗體的產(chǎn)生及放大A.抗b2GPI自身抗體的產(chǎn)生第一步：自身抗原b2GPI（與磷脂結(jié)合的形式或者是氧化的形式）的吸收和轉(zhuǎn)運(yùn)（機(jī)制不明）第二步：b2GPI隱蔽表位遞呈（活化的DC）給自身反應(yīng)性CD4+/HLAIIT細(xì)胞，活化成熟的DC細(xì)胞釋放因子誘導(dǎo)未致敏的T細(xì)胞和Th1細(xì)胞的極化。第三部：活化的自身反應(yīng)性CD4+T細(xì)胞輔助自身反應(yīng)性B細(xì)胞,該B細(xì)胞通過BCR也接收了信號第四步：b2GPI與自身反應(yīng)性B細(xì)胞BCR結(jié)合第五步：抗b2GPI自身抗體產(chǎn)生B.信號放大假說認(rèn)為Oxi-b2GPI或抗b2GPI/b2GPI復(fù)合物作為內(nèi)源性免疫佐劑通過DC細(xì)胞（圈A）B細(xì)胞（圈B）TLR4提供協(xié)同刺激信號導(dǎo)致信號級聯(lián)放大。綠的粗線條表示步驟1到5的放大分子模擬假說細(xì)菌流感(嗜血)桿菌奈瑟(氏)菌屬破傷風(fēng)內(nèi)毒素免疫小鼠產(chǎn)生的抗b2GPI注射給小鼠可以導(dǎo)致小鼠的胚胎吸收。沒有證明顯示這些毒素和有機(jī)體的導(dǎo)致人抗b2GPI的升高抗b2GPI抗體麻風(fēng)病人針對b2GPIV區(qū)，無血栓表現(xiàn)

APS患者針對b2GPII區(qū)細(xì)菌感染導(dǎo)致的非致病性抗b2GPI（V區(qū)）的產(chǎn)生的機(jī)制與APS的致病性的抗b2GPI（I區(qū)）的產(chǎn)生機(jī)制不同APS血栓形成機(jī)制血小板活化(ApoER2'、GPIb)內(nèi)皮細(xì)胞活化(AnnexinA2、TLRs--TLR2和TLR4)單核細(xì)胞活化（AnnexinA2

?）干擾抗凝系統(tǒng)（活化的蛋白C、FX、AnnexinA5）干擾纖溶系統(tǒng)（AnnexinA2、tPA和抗纖容酶）血小板活化激動(dòng)劑如凝血酶和膠原對血小板的預(yù)刺激是抗b2GPI/b2GPI導(dǎo)致細(xì)胞活化的必要條件血小板的預(yù)先刺激除了導(dǎo)致PS外翻以外也可能導(dǎo)致血小板表面ApoER2’的表達(dá)上調(diào)和結(jié)構(gòu)修飾抗b2GPI/b2GPI復(fù)合物首先在細(xì)胞表面的PS上形成抗b2GPI/b2GPI復(fù)合物通過血小板ApoER2’受體導(dǎo)致活化

(Blood.2007;109:422-430)最近，PierangeliSS（Texas）研究組通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)（鼠模型）證明了細(xì)胞表面受體ApoER2參與了APS的致病機(jī)制。

Blood.2011,27;117(4):1408-14(Blood.2007;109:422-430)內(nèi)皮細(xì)胞活化

KeithMcCrae（俄亥俄）研究組證明抗b2GPI/b2GPI可以與內(nèi)皮細(xì)胞表面AnnexinA2和TLR（TLR2和TLR4）家族受體作用介導(dǎo)細(xì)胞的活化Blood2005,105:1964-1969J.Biol.Chem.2000Lupus2008,17:943-951ArthritisRheum2009,60:559-568Blood.Online,April11,2011單核細(xì)胞活化抗b2GPI/b2GPI復(fù)合物體外可以刺激單核細(xì)胞表達(dá)TF以及其他炎癥分子。

YasudaS(Japan),

Immunobiology,2005;210:775–780

本課題組研究發(fā)現(xiàn)，APSIgG及抗b2GPI/b2GPI復(fù)合能夠刺激單核細(xì)胞表達(dá)TF，細(xì)胞表面受體AnnexinA2于此相關(guān)。

ZhouH,etal:Blood.2004,104:2353-2358

ZhouH,etal:

CellRes2007;17:737–739Antibody-InducedMonoctyeTFActivityIsNotFc-MediatedWesternBlotAnalysisofTHP-1CellLysatesbyAnti-ANX2Antibody

DecreasedTFExpressioninTHP-1CellswithANX2RNAi本課題組深入研究發(fā)現(xiàn)，TLR4及其轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在抗b2GPI/b2GPI刺激單核細(xì)胞表達(dá)TF中具有重要作用。

ZhouHetal:IntJMolMed,

2009,24:557-56ZhouHetal:ClinExpImmunol,

2011,163:189-198

TLR4、MyD88、MD-2被誘導(dǎo)表達(dá)增加TLR4MyD88MD-2IRAKs被誘導(dǎo)表達(dá)并活化TRAFs被誘導(dǎo)表達(dá)并活化IRAKs抑制物及蛋白酶體抑制劑阻斷抗b2GPI/b2GPI對TF表達(dá)的刺激效應(yīng)ZhouHetal:Thromb&Hemost,

2011,accepted致謝：課題組各位協(xié)力研究最近，

Furie

B研究組（哈佛）通過活體顯微鏡檢測的方法發(fā)現(xiàn)，來自伴發(fā)血栓的APS患者血漿中的抗β2GPI抗體大大增強(qiáng)活體小鼠激光介導(dǎo)的血管壁損傷，促進(jìn)血栓形成，除去抗β2GPI以外的自身抗體對血栓形成無影響。Blood.2011,24;117(12):3453-3459干擾抗凝系統(tǒng)馮瑩等，血栓與止血學(xué)，2009,15:219-221吳競生等，中華血液學(xué)雜志，2000,39:97-99抗b2GPI/b2GPI與APC抗b2GPI/b2GPI復(fù)合物與A