HIV病毒與艾滋病實驗室檢測 課件

HIV病毒與艾滋病實驗室檢測白求恩國際和平醫(yī)院檢驗實驗中心

賀政新1生命的渴望2HIV病原學中文名稱：人類免疫缺陷病毒英文名稱：humanimmunodeficiencyvirus;HIV定義：引起獲得性免疫缺陷綜合征和相關疾病的RNA病毒。病毒主要侵犯CD4T細胞、CD4單核細胞和B淋巴細胞。IntroductionHIV病毒結構模式圖3HIV病原學Structuralproteins病毒基因組是兩條相同的正股RNA，每條RNA長約。編碼了至少9個蛋白，可分為三類：結構蛋白、調(diào)控蛋白、輔助蛋白。

結構蛋白

Gag

gag基因產(chǎn)生55kD的蛋白p55：p17基質、p24衣殼、p9核衣殼、p6。Pol

Gag-Pol融合蛋白：p10蛋白酶、p50逆轉錄酶、p15RNA酶H及p31整合酶。

Env

Env起先是160kD的蛋白：gp41與gp120。調(diào)控蛋白

輔助蛋白

4HIV病原學HIVstructure&lifecycle5HIV病毒感染病程現(xiàn)已證實HIV感染可分為4個階段，但不是所有感染HIV的患者都一定經(jīng)歷這4個階段。①HIV感染的急性初期；②HIV感染的慢性無病癥期；③HIV感染的病癥期；④晚期，稱為AIDS。6艾滋病實驗室檢測目前檢測HIV的方法有100多種，總體來說可以分為兩大類：抗體檢測病毒檢測細胞培養(yǎng)(病毒別離)p24抗原檢測病毒核酸檢測早期對HIV的診斷主要是通過血清學試驗檢測抗HIV的抗體,間接地診斷HIV感染。7血清學試驗分為初篩和確認試驗。最常用的初篩試驗：酶聯(lián)免疫吸附試驗〔ELISA〕最常用確實認試驗：免疫印跡試驗(WB)。艾滋病實驗室檢測：血清學試驗8HIV病毒感染后血清學動態(tài)變化9HIV病毒感染窗口期WindowPeriod艾滋病窗口期是針對艾滋病檢測的標志物而言，并非一個籠統(tǒng)的概念。人體感染HIV后，一般需要2-3周，最多6周左右血液中才可檢測到HIV抗體或者HIV抗原。因為從感染HIV到機體產(chǎn)生抗體的這一段時間檢測不到HIV抗體或者HIV抗原，故稱之為窗口期，又叫做空窗期，是英文WindowPeriod的翻譯。值得注意的是，感染艾滋病病毒的個體在窗口期內(nèi)同樣具有傳染性。在病毒感染后3個月，大多數(shù)患者的血清學試驗為陽性。盡管有報道有感染1年后才出現(xiàn)血清陽性化，但實際上，所有患者都是在6個月內(nèi)出現(xiàn)血清的陽性轉化。10HIV病毒感染窗口期WindowPeriod11HIV病毒感染窗口期WindowPeriod12艾滋病實驗室檢測：ELISA試劑分代情況：第一代HIV診斷試劑原理為間接ELISA法，所用的包被抗原為體外培養(yǎng)的HIV裂解物，含有很多雜抗原，主要HIV結構和表達蛋白濃度不能保證，靈敏度和特異性不高，出現(xiàn)許多假陰性和假陽性第二代使用基因重組或合成多肽抗原，利用間接ELISA原理，窗口期比第一代診斷試劑縮短了約20天，靈敏度和特異性也有所提高。在一次試驗中可同時檢測HIV-1和HIV-2抗體。第三代利用雙抗原夾心法檢測標本中的抗體，酶標記物改為特異性HIV抗原，檢測HIV-1、HIV-2和HIV-10抗體。第四代HIV診斷試劑是一種HIV-1/HIV-2抗體與HIV-10亞群抗體及p24抗原的聯(lián)合檢測方法。13艾滋病實驗室檢測：ELISA14艾滋病實驗室檢測：確證試驗WB結果判讀15艾滋病實驗室檢測：病毒載量測定病毒核酸提取逆轉錄PCR16病毒數(shù)量預測生存時間HIV-1的數(shù)量（ml）生存期（年）117艾滋病實驗室檢測：流式細胞術CD4淋巴細胞計數(shù)不是診斷性檢查，主要用于判斷免疫抑制的程度。流式細胞儀〔FCM〕工作原理18艾滋病實驗室檢測：流式細胞術用于HIV感染的疾病分期表，凡CD4+T淋巴細<200mm3，或者CD4+T淋巴細胞%<14%的HIV感染者可歸為艾滋病。19艾滋病實驗室檢測：流式細胞術一般而言，CD4+T淋巴細越少，大局部并發(fā)癥出現(xiàn)的頻率越高。20

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