蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)(實驗)

蛋白質(zhì)的沉淀反響.一、目的要求：了解沉淀蛋白質(zhì)的幾種方法及其實用意義.二、實驗原理：在水溶液中的蛋白質(zhì)分子由于外表生成水化層和雙電層而成為穩(wěn)定的親水膠體顆粒，在一定的理化因素影響下，蛋白質(zhì)顆粒可因失去電荷和脫水，甚至變性，那么以固體形式從溶液中析出，這個過程稱為蛋白質(zhì)的沉淀反響。.蛋白質(zhì)的沉淀反響可分為兩類。〔1〕可逆的沉淀反響蛋白質(zhì)雖然沉淀析出，但蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)尚未發(fā)生顯著變化，除去引起沉淀的因素后，蛋白質(zhì)的沉淀仍能溶解于原來溶劑中，并保持其天然性質(zhì)而不變性。屬于這類反響的有；蛋白質(zhì)的鹽析作用或在低溫下用乙醇〔或丙酮〕短時間作用于蛋白質(zhì)。提純蛋白質(zhì)時，常利用此類反響。.〔2〕不可逆沉淀反響此時蛋白質(zhì)分子內(nèi)部結(jié)構(gòu)發(fā)生重大改變，蛋白質(zhì)常變性而沉淀，不再溶于原來溶劑中。加熱、重金屬鹽、過酸、過堿、震蕩、超聲波或某些有機酸都能使蛋白質(zhì)發(fā)生不可逆沉淀反響。蛋白質(zhì)變性后，有時由于維持溶液穩(wěn)定的條件仍然存在〔如電荷〕，并不析出。因此變性蛋白質(zhì)并不一定都表現(xiàn)為沉淀，而沉淀的蛋白質(zhì)也未必都已變性.三、實驗材料與設(shè)備：〔一〕材料5ml鮮雞蛋清，用蒸餾水稀釋至100ml，攪拌后用4-8層紗布過濾，新鮮配制。.〔二〕試劑蛋白質(zhì)溶液取10ml蛋清，用蒸餾水稀釋至100ml，攪拌均勻后，用紗布過濾濃蛋白溶液雞蛋清稀釋2倍〔1:1〕方法同上飽和硫酸銨，2%硝酸銀，0.5%醋酸鉛溶液濃鹽酸，濃硫酸，濃硝酸，1%硫酸銅，0.1%醋酸，10%醋酸，飽和氯化鈉溶液，10%NaOH溶液，1%醋酸10%鞣酸，飽和苦味酸溶液，0.01%NaOH.〔三〕設(shè)備水浴鍋濾紙，漏斗吸管試管及試管架玻棒.四、實驗步驟：〔一〕蛋白質(zhì)的可逆沉淀蛋白質(zhì)的鹽析過濾2ml蛋白質(zhì)濃溶液等體積飽和濃硫酸溶液沉淀清夜硫酸銨粉末沉淀加水觀察現(xiàn)象.〔二〕蛋白質(zhì)的不可逆沉淀

1.重金屬離子沉淀蛋白質(zhì)重金屬離子與蛋白質(zhì)結(jié)合成不溶于水的復(fù)合物。取3支試管，參加蛋白質(zhì)溶液1mL，參加0.01%NaOH，再加2%硝酸銀溶液1滴、0.5%乙酸鉛1滴和1%硫酸銅1滴，振蕩試管，觀察生成沉淀的顏色和量。放置片刻，傾去上清液，向沉淀中參加少量的水，沉淀是否溶解？為什么？.2.強酸沉淀蛋白質(zhì)取3支試管，各參加10滴蛋白質(zhì)溶液，分別沿管壁參加等量濃鹽酸，濃硫酸和濃硝酸10滴。觀察兩溶液界面處白色環(huán)狀蛋白質(zhì)沉淀的生成。然后搖動試管，蛋白質(zhì)沉淀應(yīng)在過量的鹽酸和硫酸中溶解，在含硝酸的試管中蛋白質(zhì)沉淀不會溶解。〔磷酸不能使蛋白質(zhì)沉淀，無機酸沉淀蛋白質(zhì)的原因可能是蛋白質(zhì)顆粒脫水的結(jié)果，過量的無機酸可使沉淀在溶解〕.3生物堿試劑沉淀蛋白質(zhì)取2支試管，各加2ml蛋白質(zhì)溶液，加1%的醋酸4~5滴，分別滴加鞣酸和苦味酸溶液數(shù)滴，觀察結(jié)果。.4.加熱沉淀蛋白質(zhì)

.本卷須知實驗要求各種試劑的濃度和參加量必須相當(dāng)準(zhǔn)確。作業(yè)列表說明各實驗的顏色變化，說明原因。.思考題:1.為什么蛋清可作為重金屬中毒的解毒劑