抑菌效力檢測(cè)方法對(duì)比表

引用方法消毒技術(shù)規(guī)范2.1.11一次性使用衛(wèi)生用品鑒定試驗(yàn)2.1.11.3產(chǎn)品殺菌性能、抑菌性能及其穩(wěn)定性鑒定2.1.11.3.2溶出性抗(抑)菌產(chǎn)品抑菌性能測(cè)試方法中華人民共和國(guó)藥典2015版藥典通則1121抑菌效力檢查法中華人民共和國(guó)藥典2015版藥典通則1201抗生素微生物檢定法培養(yǎng)基名稱呂養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基(細(xì)菌)或沙氏瓊脂培養(yǎng)基(酵母菌)胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基菌種名稱細(xì)菌：金黃色葡萄球菌(ATCC6538)大腸桿菌(8099或ATCC25922)；酵母菌：白色念珠菌(ATCC10231)。金黃色葡萄球菌CCMCC(B)26003銅綠假單胞菌CCMCC(B)10104大腸埃希菌CCMCC(B)44102白色念珠菌CCMCC(F)98001黑曲霉CCMCC(F)98003枯草芽孢桿菌CCMCC(B)63501、短小芽孢桿菌CCMCC(B)63202、金黃色葡萄球菌CMCC(B)26003或ATCC29213、藤黃微球菌CCMCC(B)28001、大腸埃希菌CMCC(B)44103、啤酒酵母菌ATCC9763、肺炎克雷伯菌CMCC(B)46117、支氣管炎博德特菌CMCC(B)58403準(zhǔn)備準(zhǔn)備將試驗(yàn)菌24h斜面培養(yǎng)物用PBS洗下，制成菌懸液（要求的濃度為：用100如滴于對(duì)照樣片上或5ml樣液內(nèi)，回收菌數(shù)為1X104cfu/片或ml?9X104cfu/片或ml）。取被試樣片（2.0cmX3.0cm）或樣液（5ml）和對(duì)照樣片或樣液（與樣片同質(zhì)材料，同等大小，但不含抗菌材料，且經(jīng)滅菌處理）各4片（置于滅菌平皿內(nèi)）或4管。銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、白色念珠菌若為瓊脂培養(yǎng)物，加入適量的0.9%無(wú)菌麻化鈉溶液將瓊脂表面的培養(yǎng)物洗脫，并將菌懸液移至無(wú)菌試管內(nèi)，用0.9%無(wú)菌麻化鈉溶液稀釋并制成每1ml含菌數(shù)約為108cfu的菌懸液；若為液體培養(yǎng)物，離心收集菌體，用0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液稀釋并、制成每1ml含菌數(shù)約為108cfu的菌懸液。取黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物加人3?5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫，然后，用適宜方法吸出孢子懸液至無(wú)菌試管內(nèi)，加入適量的含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%無(wú)菌麻化鈉溶液制成每1ml含孢子數(shù)108cfu的孢子懸液。測(cè)定1ml菌懸液中所含的菌數(shù)。菌液制備后若在室溫下放置，應(yīng)在2小時(shí)1、 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備標(biāo)準(zhǔn)品的使用和保存，應(yīng)照標(biāo)準(zhǔn)品說(shuō)明書(shū)的規(guī)定。臨用時(shí)照表1（見(jiàn)附件1）的規(guī)定進(jìn)行稀釋。標(biāo)準(zhǔn)品的品種、分子式及理論計(jì)算值見(jiàn)表2（見(jiàn)附件2）。2、 供試品溶液的制備精密稱（或量）取供試品適童，用各品種項(xiàng)下規(guī)定的溶劑溶解后，再按估計(jì)效價(jià)或標(biāo)示量照表1（見(jiàn)附件1）的規(guī)定稀釋至與標(biāo)準(zhǔn)品相當(dāng)?shù)臐舛取?、 雙碟的制備取直徑約90mm，高16~17mm的平底雙碟，分別注入加熱融化的培養(yǎng)基（表1）20ml，使在碟底內(nèi)均勻攤布，放置水平臺(tái)面上使凝固，作為底層。另取培養(yǎng)基適量加熱融化后，放冷至48?50°C（芽孢可至60C），加入規(guī)定的試驗(yàn)菌懸液適量（能得清晰的抑菌圈為度）。二劑量法標(biāo)準(zhǔn)品溶液的高濃度所致的抑菌圈直徑在18?22mm，三劑量法標(biāo)準(zhǔn)品溶液的中心濃度所實(shí)驗(yàn)操作實(shí)驗(yàn)操作取上述菌懸液，分別在每個(gè)被試樣片或樣液和對(duì)照樣片或樣液上或內(nèi)滴加100Ml，均勻涂布/混合，開(kāi)始計(jì)時(shí)，作用2min、5min、10min、20min，用無(wú)菌鑷分別將樣片或樣液（0.5ml）投入含5mlPBS的試管內(nèi)，充分混勻，作適當(dāng)稀釋，然后取其中2個(gè)?3個(gè)稀釋度，分別吸取0.5ml，置于2個(gè)平皿，用涼至40°C?45°C的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（細(xì)菌）或沙氏瓊脂培養(yǎng)基（酵母內(nèi)使用；若保存在2?8°C，可在24小時(shí)內(nèi)使用。黑曲霉的孢子懸液可保存在2?8°C，在1周內(nèi)使用。取包裝完整的供試品至少5份，直接接種試驗(yàn)菌，或取適量供試品分別轉(zhuǎn)移至5個(gè)適宜的無(wú)菌容器中（若試驗(yàn)菌株數(shù)超過(guò)5株，應(yīng)增加相應(yīng)的供試品份數(shù)），每一容器接種一種試驗(yàn)菌，1g或1ml供試品中接菌量為105?106cfu，接種菌液的體積不得超過(guò)供試品體積的1%，充分混合，使供試品中的試驗(yàn)菌均勻分布，然后置20?25C避光貯存。致的抑菌圈直徑在15?18mm，搖勻，在每1雙碟中分別加入5ml，使在底層上均勻攤布，作為菌層。放置在水平臺(tái)上冷卻后，在每1雙碟中以等距離均勻安置不銹鋼小管（內(nèi)徑為6.0mm±0.1mm*高為10.0mm±0.1mm，夕卜徑為7.8mm±0.1mm）4個(gè)（二劑量法）或6個(gè)（三劑量法），用陶瓦圓蓋覆蓋備用。二劑量法：取照上述方法制備的雙碟不得少于4個(gè)，在每1雙碟中對(duì)角的2個(gè)不銹鋼小管中分別滴裝高濃度及低濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，其余2個(gè)小管中分別滴裝相應(yīng)的高低兩種濃度的供試品溶液；高、低濃度的劑距為2:1或4:1。在規(guī)定條件下培養(yǎng)后，測(cè)量各個(gè)抑菌圈直徑（或面積），照生物檢定統(tǒng)計(jì)法（通則1431）中的（2.2）法進(jìn)行可靠性測(cè)驗(yàn)及結(jié)果計(jì)算存活菌數(shù)測(cè)定：根據(jù)產(chǎn)品類型，按表結(jié)果計(jì)算存活菌數(shù)測(cè)定：根據(jù)產(chǎn)品類型，按表2-1、表2-2、表2-3規(guī)定的間隔時(shí)間，分別從上述每個(gè)容器中取供試品1ml（g），測(cè)定每份供試品中所含的菌數(shù)，測(cè)定細(xì)菌用胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基，測(cè)定真菌用沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基。存活菌數(shù)測(cè)定方法及方法適用性試菌）15ml作傾注，轉(zhuǎn)動(dòng)平皿，使其充分均勻，瓊脂凝固后翻轉(zhuǎn)平板，35°C±2°C培養(yǎng)48h（細(xì)菌）或72h（酵母菌），作活菌菌落計(jì)數(shù)。試驗(yàn)重復(fù)3次，按下式計(jì)算抑菌率：X二村°-N$乂100%NC式中：X為抑菌率，%；NC為對(duì)照樣品平均菌落數(shù)，cfu/片；NS為被試樣品平均菌落數(shù)，cfu/片。效價(jià)計(jì)算。三劑量法：照上述方法制備的雙碟不得少于6個(gè)，在每1雙碟中間隔的3個(gè)本銹鋼小管中分別滴裝高濃度（S3）、中濃度（S2）及低濃度（S】）的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，其余3個(gè)小管中分別滴裝相應(yīng)的高、中、低三種濃度的供試品溶液；高、低濃度的劑距為1:0.8。在規(guī)定條件下培養(yǎng)后，測(cè)量各個(gè)抑菌圈直徑（或面積）照生物檢定統(tǒng)計(jì)法（通則1431）中的（3.3）法進(jìn)行可靠性測(cè)驗(yàn)及效價(jià)計(jì)算。二劑量法：照生物檢定統(tǒng)計(jì)法（通則1431）中的（2.2）法進(jìn)行可靠性測(cè)驗(yàn)及效價(jià)計(jì)算。三劑量法?。赫丈餀z定統(tǒng)計(jì)法（通則1431）中的（3.3）法進(jìn)行可靠性測(cè)驗(yàn)及效價(jià)計(jì)算。驗(yàn)照“非無(wú)菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計(jì)數(shù)法（通則1105）”進(jìn)行，方法適用性試驗(yàn)用菌株見(jiàn)表1,菌液制備同培養(yǎng)基適用性檢查，方法適用性試驗(yàn)試驗(yàn)菌的回收率不得低于70%。根據(jù)存活菌數(shù)測(cè)定結(jié)果，計(jì)算1ml（g）供試品各試驗(yàn)菌所加的菌數(shù)及各間隔時(shí)間的菌數(shù)，并換算成lg值。結(jié)果判斷供試品抑菌效力評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表2-1、表2-2、表2-3,表中的“減少的lg值”是指各間隔時(shí)間測(cè)定的菌數(shù)lg值與1ml（g）供試品中接種的菌數(shù)lg值的相差值。表中“A”是指應(yīng)達(dá)到的抑菌效力標(biāo)準(zhǔn)，特殊情況下，如抑菌劑可能增加不良反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)，則至少應(yīng)達(dá)到“B”的抑菌效力標(biāo)準(zhǔn)。抑菌率N50%?90%,產(chǎn)品有抑菌作用，抑菌率N90%抑菌率N50%?90%,產(chǎn)品有抑菌作用，抑菌率N90%,產(chǎn)品有較強(qiáng)抑菌作用?！鯳的岫惘dli扣f.4d28dAj—NRB.一]3—NilA2-—NTAMB—*——1Ml也，NRr箕蠹菌正恢址生悅.N】=未地血.史尚對(duì)嫩-中奏崖ut間，氐輸篇圮10曲牲好不培it0(4-*2-3耳用?0^.鼻牌制割，喜雎峭甫:U耐、

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附件1:抗生素類別試驗(yàn)菌培養(yǎng)基滅菌緩沖液抗生素濃度范圍培養(yǎng)條件編號(hào)pH值pH值單位/ml溫度時(shí)間/小時(shí)鏈霉素枯草芽抱桿菌〔CMCC(B)63501〕I7.8?8.07.80.6 1.635 3714 16卡那霉素枯草芽抱桿菌〔CMCC(B)63501〕I7.8?8.07.80.9 4.535 371416阿米卡星枯草芽抱桿菌〔CMCC(B)63501〕I7.8?8.07.80?94.535 3714 16巴龍霉素枯草芽抱桿菌〔CMCC(B)63501〕I7.8?8.07.80-9 4-535 3714 16核糖霉素枯草芽抱桿菌〔CMCC(B)63501〕I7.8?8.07.82.0 12.035 371416卷曲霉素枯草芽抱桿菌〔CMCC(B)63501〕I7.8?8.07.810.0 40.035 3714 16磺芐西林枯草芽抱桿菌〔CMCC(B)63501〕I6.5 6.66.05.0 10.035 3714 16去甲萬(wàn)古霉素枯草芽抱桿菌〔CMCC(B>63501〕VIII6.06.09-043.735 3714 16慶大霉素短小芽抱桿菌〔CMCC(B)63202〕I7.8?8.07.82.0 12.035 3714 16紅霉素短小芽抱桿菌〔CMCC(B)63202〕I7.8?8.07.85.020.035 3714 16新霉素金黃色葡萄球菌〔CMCC(B)26003〕II7.8?8.07.8?4.025.035 3714 16四環(huán)素藤黃微球菌〔CMCC(B)28001〕II6.5 6.66.010.040.035 3714 16土霉素藤黃微球菌〔CMCC(B)28001〕II6.56.66.010.040.035 371618金霉素藤黃微球菌〔CMCC(B)28001〕II6.56.66.04.025.035 3716 18藏霉素藤黃微球菌〔CMCC(B)28001〕II6.56.66.030.080.0335 3716 18桿菌肽藤黃微球菌〔CMCC(B)28001〕II6.5 6.66.02.012.035 3716 18黏菌素大腸埃希菌〔CMCC(B)44103〕VI7.27.46.0614234435 371618兩性霉素B?啤酒酵母菌(ATCC9763)IV6.06_210.50.5 2-035 372436

克拉霉素 短小芽抱桿菌〔CMCC(B)63202〕 I7.8?8.07-82.0 8.035 3714 16大觀霉素 肺炎克雷伯菌〔CMCC(B)46117〕 II7.8?8.07.050 20035 3716 18吉他霉素 枯草芽抱桿菌〔CMCC(B)63501〕II④8.08.27.820 4035 3716 18營(yíng)養(yǎng)瓊脂麥白霉素 枯草芽抱桿菌〔CMCC(B>63501〕培養(yǎng)基8.0 8.27.854035 371618小諾霉素 枯草芽抱桿菌〔CMCC(B)63501〕 I7.8?8.07.80.5 2.035371416多黏菌素B 克拉霉素 短小芽抱桿菌〔CMCC(B)63202〕 I7.8?8.07-82.0 8.035 3714 16大觀霉素 肺炎克雷伯菌〔CMCC(B)46117〕 II7.8?8.07.050 20035 3716 18吉他霉素 枯草芽抱桿菌〔CMCC(B)63501〕II④8.08.27.820 4035 3716 18營(yíng)養(yǎng)瓊脂麥白霉素 枯草芽抱桿菌〔CMCC(B>63501〕培養(yǎng)基8.0 8.27.854035 371618小諾霉素 枯草芽抱桿菌〔CMCC(B)63501〕 I7.8?8.07.80.5 2.035371416多黏菌素B 大腸埃希菌〔CMCC(B)44103〕營(yíng)養(yǎng)瓊脂6,56.6培養(yǎng)基6.01000400035 3716 18交沙霉素 枯草芽抱桿菌〔CMCC(B)63501〕7.8?8.07.87,5 3035 3714 16丙酸交沙霉素 枯草芽抱桿菌〔CMCC(B)63501〕7.8?8.07.820 8036 371416替考拉寧 金黃色葡萄球菌〔ATCC29213〕7.8?8.07.810 20035 3716 18萬(wàn)古霉素 枯草芽抱桿菌〔CMCC(B)63501〕VIII6.06.02.512.535 3714 16附件2：標(biāo)準(zhǔn)品品種標(biāo)準(zhǔn)品分子式或品名理論計(jì)算值u/mg標(biāo)準(zhǔn)品品種標(biāo)準(zhǔn)品分子式或品名理論計(jì)算值u/mg鏈霉素(C21H39N7。12)2*3H2SO4798.3紅霉素C37H67NO131000卡那霉素C18H36N4O11*H2SO4831.6氯霉素C11H12C12N2O51000阿米卡星C22H43N5O13^nH2S04⑴日8或2)桿菌肽桿菌肽鋅核糖霉素C17H34N4O10.nH2SO4(n<2)黏菌素硫酸黏菌素新霉素硫酸新霉素去甲萬(wàn)古霉素C65H73Cl2N9O24?HC1975.2慶大霉素硫酸慶大霉素