細胞培養(yǎng)概述課件

細胞培養(yǎng)概述

體外培養(yǎng)

Tissuecultureinvitro

從動物活體體內(nèi)取出組織，

于模擬體內(nèi)生理環(huán)境等特定的條件下，

進行孵育培養(yǎng)，使之生存并增殖細胞培養(yǎng)把取得組織用機械或消化方法分散成單亇細胞

懸液，然后進行培養(yǎng)、增殖。組織[塊]培養(yǎng)把活體的小片組織置于底物上孵育，

細胞自其周圍移出并增殖器官培養(yǎng)將活體的器官或器官的一部分取出，置于體外,在

適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)條件，氣相條件和生長基質(zhì)等條件下，

生存、生長并同時保持其一定的結(jié)構(gòu)和功能持征。

器官培養(yǎng)器官培養(yǎng)中的小塊組織塊包含了不止一種基本組織。是由幾種組織共同構(gòu)成的具有器官的結(jié)構(gòu)和功能特征的組織塊。培養(yǎng)時,其內(nèi)部的細胞能按照在體內(nèi)器官的正常生長發(fā)育規(guī)律繼續(xù)生長，培養(yǎng)的器官內(nèi)部結(jié)構(gòu)與體內(nèi)相似，保持與在體內(nèi)時相似的解剖關(guān)系和功能特征。器官培養(yǎng)的目的在體外環(huán)境下維持器官內(nèi)部的發(fā)育分化以及結(jié)構(gòu)與功能特征，以便直接觀察和研究器官的發(fā)育分化過程、功能表現(xiàn)及其影響因素。。細胞培養(yǎng)的優(yōu)點

1.活細胞：

能長時間、直接觀察、研究

活細胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動

優(yōu)點

3.應(yīng)用廣：

學(xué)科多：

對象廣：

各種動物：低等動物--高等動物--人類

一種動物：不同年齡--

不同組織--

正?；虍惓＃[瘤--）

優(yōu)點4.較經(jīng)濟：

可提供大量、同時、重復(fù)性好的、

生物學(xué)性狀相似的實驗對象細胞培養(yǎng)的缺點

現(xiàn)人工模擬體內(nèi)環(huán)境的技術(shù)已經(jīng)很高,

但,人工所模擬的條件與體內(nèi)實際情況

仍不完全相同.

當(dāng)細胞被置于體外培養(yǎng)后,

生活在缺乏動態(tài)平衡的環(huán)境中,

久了，發(fā)生變化.與體內(nèi)主要不同

缺乏體內(nèi)的系統(tǒng)作用、

失去神經(jīng)體液的調(diào)節(jié)

和細胞相互間的影響

缺點

因此，相對孤立、相對單一失去原有組織結(jié)構(gòu)和細胞形態(tài)分化減弱或不顯

細胞趨向單一化

3.提示

要正確認(rèn)識體外培養(yǎng)細胞

是一種特定條件下生長的細胞群體。生長類型按生長方式:2型

粘附型細胞:能附著在某一固相支持物表面

生長的細胞。

懸浮型細胞:不必附著于固相支持物表面，而

在懸浮狀態(tài)下即可生長的細胞。

絕大多數(shù)有機體細胞屬粘附型細胞，

只有少數(shù)細胞類型，如某些腫瘤細胞和白細胞

可在懸浮狀態(tài)下生長貼附(粘附)型細胞

粘附:是大多數(shù)有機體細胞在體內(nèi)

生存和生長發(fā)育的基本存在方式含義兩方面結(jié)果基于粘附特性，使細胞與細胞之間相互結(jié)合形成組織，

有機體的絕大多數(shù)細胞必須

粘附于一固相表面

才能生存和生長。

培養(yǎng)時：細胞被放到體外環(huán)境中以后,同樣需要粘附于某一固相表面才能生存和生長，因而

屬于粘附型細胞。粘附(錨定或錨著)依賴型性細胞：

唯有粘附于固相表面才能生存的細胞

類型

細胞在體內(nèi)、外的粘附方式：存在差異

體內(nèi)：粘附是全方位-

外形具有復(fù)雜的立體特征

體外：多數(shù)情況，細胞只有一個附著平面

外形一般與體內(nèi)時明顯不同

按照培養(yǎng)細胞的主要形態(tài)，可分為幾大類型

分類

根據(jù)形態(tài)大致的不同，主要2類：

上皮樣成纖維細胞樣

其它，不定型上皮樣細胞型

名稱：僅形態(tài)上似體內(nèi)，實際上不完全等于--來源：來源于外胚層

如：皮膚及其衍生物消化道，乳腺，肺泡上皮性腫瘤形態(tài)：類似體內(nèi)的上皮細胞

扁平，不規(guī)則多角形，中有圓形核

生長特點

易相連成片

相靠—緊密相連—成薄層—

鋪石狀

生長時呈膜狀移動

很少脫離細胞群而單個活動

成纖維細胞樣細胞

名稱：凡在培養(yǎng)中形態(tài)與成纖維細胞類似的來源：由中胚層間充質(zhì)組織起源的組織

如：真正的成纖維細胞心肌，平滑肌，成骨細胞，形態(tài)：似體內(nèi)成纖維細胞的形態(tài)

胞體梭形或不規(guī)則三角形

胞質(zhì)向外伸出2—3個長短不等的突起

中有卵圓形核生長特點

排列成放射狀，漩渦狀

并不緊靠連成片，

細胞—細胞接觸易斷開而

單獨行動

游離的單獨的成纖維樣細胞，

常有幾個伸長的細胞突起

注意：貼附生長型--類型1.與體內(nèi)同名的細胞不完全相同

如：形態(tài)相似的成纖維細胞，可不同來源

自同一動物不同組織的成纖維樣細胞相似但

發(fā)展趨向不同2.培養(yǎng)細胞的形態(tài)不穩(wěn)定

條件改變，細胞形態(tài)可有變化培養(yǎng)細胞形態(tài)不穩(wěn)定

血清

Hela高血清低血清

成纖維細胞樣上皮樣細胞

pH

Hela太酸或太堿標(biāo)準(zhǔn)pH

成纖維細胞樣上皮樣細胞

細胞密度

3T3低密度高密度

成纖維細胞樣上皮樣細胞

生長狀態(tài)改變

懸浮或貼附

懸浮貼附

圓形成纖維或上皮樣

轉(zhuǎn)化與否

未轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)化后

成纖維樣可成上皮樣

注意細胞鑒定懸浮生長型

概念

培養(yǎng)時不貼附于底物而呈懸浮狀態(tài)生長

或以機械方法使保持懸浮狀態(tài)下生長來源

自血，脾或骨髓，尤以血中白細胞

癌腫細胞也可能特點

在懸浮中生長良好細胞圓形，單個或小細胞團優(yōu)點

生存空間大，提供數(shù)量大