寶草錦haworthia cymbiformis vartriebnent poelln組培繼代培養(yǎng)激素優(yōu)化研究

20141304101006+趙秋洋+寶草錦var.triebnentpoelln)組培繼代養(yǎng)的激素優(yōu)化研報告檢測時間：2018-06-12檢測字數(shù)：11,931作者名稱：佚所屬20141304101006+趙秋洋+寶草錦var.triebnentpoelln)組培繼代養(yǎng)的激素優(yōu)化研報告檢測時間：2018-06-12檢測字數(shù)：11,931作者名稱：佚所屬單位：邯鄲學◎中文科技期刊論文全文數(shù)據(jù)◎中文主要報紙全文數(shù)據(jù)◎中國專利特色數(shù)◎博士/碩士學位論文全文數(shù)據(jù)◎中國主要會議論文特色數(shù)據(jù)◎港澳臺文獻資◎外文特色文獻數(shù)據(jù)全◎維普優(yōu)先出版論文全文數(shù)據(jù)◎互聯(lián)網(wǎng)數(shù)據(jù)資源/互聯(lián)網(wǎng)文檔資◎高校自建資源◎圖書資◎古籍文獻◎個人自建資源◎年鑒資◎IPUB原創(chuàng)時間范圍：1989-01-01至2018-06-全文總（總相似比=復寫率+他引率+自引率（原創(chuàng)內(nèi)容占全文的比重（相似或疑似重復內(nèi)容占全文的比重,含專業(yè)用語（引用他人的部分占全文的比重，請正確標注引用（引用自己已發(fā)表部分占全文的比重，請正確標注引用專業(yè)用（公式定理、法律條文、行業(yè)用語等占全文的比重總相似片段1systemforrapidpropagationofbroccoli.Itcanprovidereferenceforgermplasmresourcesprotection,andutilization,horticulturalcultivation,genetictransformationandmolecularbreeding.First,thesystemforrapidpropagationofbroccoli.Itcanprovidereferenceforgermplasmresourcesprotection,andutilization,horticulturalcultivation,genetictransformationandmolecularbreeding.First,thepollution-adventitiousbudsoftheHaworthiacymbiformisvar.triebnetpoellnwereinoculatedinthesupercleanandtheninoculatedintoMSmediumwithdifferenthormoneconcentrationtoproliferate.TheresultsshowedthatoptimummediumforinducingproliferationofadventitiousbudswasMS+6-KeywordsHaworthiacymbiformisvar.triebnetpoelln,tissueculture,adventitiousbud,rapid1前言1.1植物組織培養(yǎng)外植體的選用消毒1.2植物組織培養(yǎng)培養(yǎng)基和培養(yǎng)方式的選用1.2.1培養(yǎng)方式的選用1.2.2培養(yǎng)基的選用1.3培養(yǎng)基的培養(yǎng)條件1.4不定芽增殖所需植物激素的比例1.5寶草錦的概述1.6研究意義2材料與方法42.1主要實驗材料、試劑和設備2.1.1實驗材料2.1.2實驗試劑2.1.3實驗所用培養(yǎng)基2.1.4實驗設備2.2實驗方法2.2.1材料的選擇2.2.2培養(yǎng)基的配制2.2.3寶草錦不定芽接種2.2.4增殖培養(yǎng)3結果與分析3.1植物激素6-BA對寶草錦不定芽的影響3.2植物激素NAA對寶草錦不定芽的影響4結論參考文獻致謝寶草錦(Haworthiacymbiformisvar.triebnet組培繼代培養(yǎng)的激素優(yōu)化研1植物組織培養(yǎng)（PlantTissueCulture）是20世紀初，以植物生理學為基礎發(fā)展起來的一門新興技術，它是指在組織器官或細胞等體的條件下利用人工培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，使其形成完整植株[1,2]。其中包括器官培養(yǎng)、莖尖分生組織培養(yǎng)、細胞培養(yǎng)、原生質體培和愈傷組織培養(yǎng)等。但是愈傷組織培養(yǎng)最為常見。一般類型都要經(jīng)歷愈傷組織階段才能形成完整植株，莖尖分生組織培養(yǎng)和少數(shù)器3培養(yǎng)除外。植物組織培養(yǎng)的原理是利用細胞的全能型，即指一個完整的植物細胞擁有形成一個完整植株所培養(yǎng)除外。植物組織培養(yǎng)的原理是利用細胞的全能型，即指一個完整的植物細胞擁有形成一個完整植株所必須的全部信息。利用這個特性使植物成熟細胞經(jīng)歷脫分化之后形成愈傷組織再經(jīng)由再分化形成完整的植株[3]植物組織培養(yǎng)這項技術已經(jīng)成為舉世矚目的生物技術之一。經(jīng)過幾十年的發(fā)展在醫(yī)學、農(nóng)業(yè)、工業(yè)和林業(yè)中得到廣泛應用，尤其新品種培育、快速繁殖、植物次生代謝產(chǎn)物和苗木脫毒等生產(chǎn)方面發(fā)揮著巨大作用，并創(chuàng)造了巨大的經(jīng)濟效益[4]1.1植物組織培養(yǎng)外植體的選用和選擇合適的外植體是組織培養(yǎng)工作中的第一步，其種類的選擇直接影響組織培養(yǎng)的效果。外植體選擇時需要考慮培養(yǎng)目的、外植體培養(yǎng)能力及取材是否會對母株造成影響等因素。芽、葉片和花徑都可以作為多肉植物的外植體誘導再生植株，然而各有各的缺點。此，多肉植物最適外植體的選擇還要根據(jù)多肉種類和實際情況而定。外植體消毒滅菌是植物組培重中之重。它既要消除微生物又不破壞織物表面細胞及組織。往往消毒滅菌是非常嚴謹?shù)?，要根?jù)其生長環(huán)境、取材位置、取材時間等等來確定消毒劑和消毒時間。用的消毒劑有：乙醇、升汞（或二氯化汞）、次氯酸鹽等[5]。那淑芝[6]用75%的酒精溶液浸泡15s，然后用0.1%HgCl2溶液滅菌min，來給庫拉索蘆薈滅菌。趙娟[7]等用70%酒精消毒30s，0.1%HgCl2滅菌15min，來給褐斑伽藍葉片滅菌。宋揚[8]采用75%處理冰燈玉露幼嫩花莖10s，再用0.1%升汞消毒7min。目前，多肉植物外植體消毒比較常用的方法是70%75%的酒精與0.1%的氯汞以不同時間的組合對外植體進行消毒1.2植物組織培養(yǎng)培養(yǎng)基和培養(yǎng)方式的選1.2.1培養(yǎng)方式的選植物組織培養(yǎng)有半固體培養(yǎng)，固體培養(yǎng)和液體培養(yǎng)3種培養(yǎng)方法。最常用的還是固體培養(yǎng)[9]，其中百合科植物美麗豹子花[10]、虎萬年青[11]、延齡草[12]、虎尾蘭[13]、長蕊萬壽竹[14]等組織培養(yǎng)都采用固體培養(yǎng)基；谷祝平[15]等將百合未授粉子房放入改良MS和固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)可以能獲得完整的植株，蔡朝暉等[16]對暗紫貝母小鱗莖進行繼代培養(yǎng)后發(fā)現(xiàn)固體培養(yǎng)比液體震蕩培養(yǎng)要生的慢，用液體震蕩培養(yǎng)生物堿的含量要高于固體培養(yǎng)。蘇斌等[17]在進行麝香百合快速繁殖中可以發(fā)現(xiàn)，采用液體震蕩培養(yǎng)要遠比固體培養(yǎng)和半固體培養(yǎng)節(jié)省生產(chǎn)成本。羅麗萍[18]等認為，液體震蕩培養(yǎng)對龍牙百合次生小鱗莖的增重效果明顯優(yōu)于固體培養(yǎng)。所在選擇培養(yǎng)方式的時候要根據(jù)組培苗特性來選用適合的培養(yǎng)基1.2.2培養(yǎng)基是根據(jù)植物生長發(fā)育所需的營養(yǎng)而設計的。培養(yǎng)基通常包括大量元素、微量元素、糖類鐵鹽、有機復合物、和植物激素等。同植物種類、不同的培養(yǎng)目的，要求提供的物質也不一樣。隨著慢慢研究的深入，培養(yǎng)基的種類越來越復雜，其內(nèi)部成分也越來越。在組織培養(yǎng)中，常用的培養(yǎng)基有MS、WPM、B5、White、N6和SH等。最為常用的培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基，但也有采用N6[19]、SH[20]作為本培養(yǎng)基的，但是效果不及MS培養(yǎng)基。孫必賢等[21]在對大蒜進行不定芽誘導時，發(fā)現(xiàn)B5效果也很好，盧其能[22]對MS、B5、和e3種培養(yǎng)基進行分化效果比對實驗，實驗結果表明，分化效果最好的培養(yǎng)基是MS培養(yǎng)基，其次是B5培養(yǎng)基，最差的是White楊柏云等[23]研究MS培養(yǎng)基、改良MS(將MS培養(yǎng)基中的NH4NO3去掉，KNO3加倍)和B5培養(yǎng)基對切花百合小鱗莖的增殖效果，發(fā)現(xiàn)MS基與改良的MS培養(yǎng)基對小鱗莖增殖效果比B5培養(yǎng)基好，但二者的作用沒有明顯差別1.3溫度、光照強度、培養(yǎng)基的pH值和培養(yǎng)中室內(nèi)環(huán)境都能影響組織培養(yǎng)的效果。在愈傷組織誘導和增殖過程中，一般選用光照弱或者暗的條件下培養(yǎng)效果比較好。在增加培育苗高度的情況下，Kozai[24]等研究了日平均氣溫20下的三個溫度差，實驗結果表明培隨著溫度差增大從而生長高度增加。謝從華等人認為在器官分化階段，培養(yǎng)基培養(yǎng)要滿足三個條件，即高強度的燈光照射、2030度范圍及5.86.0的pH值范圍[25]1.4寶草錦不定芽增殖所需植物激素的比激素種類、濃度及其配比對百合科植物組織的形態(tài)發(fā)生和形成速度有顯著影響，楊煒茹等[26]在野生渥丹鱗片的不定芽增殖培養(yǎng)中用的激素是6-BA，徐凌飛等[27]、王芳等[28]在對蘭州百合和玉簪芽進行增殖培養(yǎng)時也采用了相同的激素；而馬永紅[29]在野鱗莖增殖培養(yǎng)中采用了6-BA和2，4-D；田英翠等[30]單獨使用IAA對郁金香芽進行增殖培養(yǎng)。而龐新霞等[31]通過對東方百合鱗莖4培芽增殖研究后，認為當NAA0.1mg/L時，6-BA或KT濃度在1.02.0mg/L之間會使芽增殖倍數(shù)高且生長健壯，但6-BA或KT濃度過低.0mg/L)或過高>2.0mg/L)時，培芽增殖研究后，認為當NAA0.1mg/L時，6-BA或KT濃度在1.02.0mg/L之間會使芽增殖倍數(shù)高且生長健壯，但6-BA或KT濃度過低.0mg/L)或過高>2.0mg/L)時，不利于芽增殖，芽的生長也緩慢。因此最適激素濃度配比對植物快速繁殖尤為重要[32]1.5寶草錦的概述和前寶草錦(Haworthiacymbiformisvar.triebnetpoelln)是寶草的斑葉變異品種，它是百合科(Liliaceae)十二卷屬多年生肉質草植物，寶草錦葉片綠色兼有縱向黑色或白色的條紋，形成半透明的窗，總狀花序，但較松散，小花白綠色，花期春末至夏季。寶草喜溫暖，適合在陽光柔和，或半陰的環(huán)境栽培。耐干旱，較耐寒，忌高溫、積水，怕烈日暴曬，也不宜過于蔭蔽。無明顯的休眠期生長適溫為18-25攝氏度，冬季不低于5攝氏度。生長期可正常澆水，秋冬季節(jié)水量酌減。可用泥炭（腐葉土）、蛭石、珍珠巖的混土作介質，并摻入少量的骨粉等石灰質材料。其繁殖方式為分株繁殖近幾年來，多肉市場尤為火爆。在一線城市中如北京、廣東等，大多數(shù)多肉植物出現(xiàn)供不應求的局面。而寶草錦只能進行分株繁殖不能適應市場環(huán)境限制了其發(fā)展前景。所以快速繁殖體系的建立尤為重要。這樣就能有效地緩解一線城市和發(fā)達地區(qū)供不應求的局，也能解決因物種稀少價格昂貴從而人們消費不起的情況1.6近年來，多肉植物由于種類繁多、體態(tài)清雅而奇特、花色艷麗而多姿和果實碩大而鮮艷等特點，越來越受到廣大消費者的關注和愛，新一輪的多肉植物研究和開發(fā)利用高潮正在興起[33]。由于多肉植物耐旱耐瘠薄的特性，在種植管理時相較于其他園林植物更節(jié)水節(jié)肥，正符合了我國可持續(xù)發(fā)展的戰(zhàn)略思想，是值得大力推廣的新型園林植物[34]。我國是多肉植物原產(chǎn)地之一，但由于起晚，研究經(jīng)費投入較少，資源開發(fā)力度不足，也沒有形成規(guī)模化的生產(chǎn)，因此多肉植物的新品種主要靠國外進口[35]。因此，研究草錦快速高效的繁殖生長在我國具有非常不錯的應用前景2材料與2.1主要實驗材料、試劑和2.1.1寶草錦分化無污染的不定芽2.1.2(1(2)體積分數(shù)為75(3)體積分數(shù)為95(4)體積分數(shù)為0.1%的HgCl2(5)物質的量為1mol/L的HCl(6)物質的量為1mol/L的NaOH(7)MS培養(yǎng)基母液、、(8(9(10)濃度為1mg/L的6-BA溶液配制：準確稱取100mg的6-BA，然后用少量的1mol/L的HCl溶液進行溶解，待溶解完畢，加蒸餾水至(11)濃度為1mg/L的NAA溶液配制：準確稱取100mg的NAA，然后用少量的1mol/L的NaOH溶液進行溶解，待溶解完畢，加蒸餾水至(12)濃度為1mg/L的KT溶液配制：準確稱取100mg的KT，然后用少量的1mol/L的NaOH溶液進行溶解，待溶解完畢后，加蒸餾水定至100ml2.1.3實驗所用培養(yǎng)MS培養(yǎng)基：大量元素母液I（20倍）+微量元素母液II（100倍）+鐵鹽母液III（100倍）+有機物質母液IV（100倍）5寶草錦不定芽進行增殖所采用的培養(yǎng)基均是MS培養(yǎng)基，在此基礎上，按照試驗表添加不同濃度激素配比的6-BA和NAA，找出寶草錦不定芽進行增殖所采用的培養(yǎng)基均是MS培養(yǎng)基，在此基礎上，按照試驗表添加不同濃度激素配比的6-BA和NAA，找出最佳的素濃度配比組合注：上述培養(yǎng)基中還需要添加30g的蔗糖、7g的瓊脂粉，先加熱煮沸至透明后，在調(diào)整其pH值至5.86.02.1.4電子天平（FA2204N型）；電磁爐；高壓蒸汽滅菌鍋（LDZX-40型）；超凈工作臺（VS-1300L-U型）；冰箱（BCD-219BSV型）材料的選選取生長狀態(tài)良好且沒有被污染的寶草錦不定芽2.2.2培養(yǎng)基的配配置1L的培養(yǎng)基，首先分別量取所需要的母液50mL、母液20mL、母液20mL、母液20mL和KT然后按照實驗表的需要添加NAA和6-BA。后用電子天平準確稱量出7g瓊脂粉、30g蔗糖。然后向陶瓷缸中加入蒸餾水定容至1000ml，將已經(jīng)量好的各母液加入其中，放磁爐上，邊加熱邊用玻璃棒攪拌，直至液體呈現(xiàn)出半透明狀后將搪瓷缸取下，用精密pH試紙測培養(yǎng)基的pH值，用1mol/L的HCl溶液1mol/L的NaOH溶液來調(diào)節(jié)其pH值，直到培養(yǎng)基的pH值符合要求為止（5.86.0）。將已經(jīng)配制好的培養(yǎng)基趁熱分裝到各個組培瓶每瓶50mL，并在組培瓶外壁貼上相應標簽，放入高壓蒸汽滅菌鍋中進行滅菌，設置溫度121，時間20min，滅菌完畢后將培養(yǎng)基放組培室儲藏待其凝固。培養(yǎng)基放置時要盡量處于水平，否則培養(yǎng)基凝固時會出現(xiàn)傾斜的現(xiàn)象2.2.3寶草錦不定芽接先將超凈工作臺進行紫外燈照射20min，然后再進行接種。接種時要用酒精棉擦拭自己的雙手，然后用鑷子在錐形瓶中取出寶草錦不定芽，先用解剖刀慢慢剃去上面的愈傷組織，然后再用解剖刀把它們分離開，取出培養(yǎng)基把切好的不定芽接種到培養(yǎng)基上。每次種時，要將錐形瓶瓶口放在酒精燈火焰附近防止細菌污染。按照上述方法接種完畢后要將培養(yǎng)基放入組培室進行培養(yǎng)2.2.4將長勢良好的寶草錦不定芽接種后，放入光照條件充足、室溫25攝氏度左右且無菌的組培室中進行增殖培養(yǎng)，激素濃度配比見表1每天觀察其生長的狀況，查看并記下不定芽的增殖情況，匯總實驗結果，制出圖表，得出寶草錦不定芽增殖的最佳激素配方表1寶草錦繼代培養(yǎng)基1L植物激素6-BA用量表（單位Table1Dosageformofplanthormone6-BA1LinsubculturemediumofHaworthiacymbiformisvar.Triebnet組別6-BA10.521表2寶草錦繼代培養(yǎng)基1L植物激素NAA用量表（單位Table2Dosageformofplanthormone6-BA1LinsubculturemediumofHaworthiacymbiformisvar.Triebnet組別6-BA10.520.53結果與在添加不同濃度的6-BA和NAA的培養(yǎng)基中轉接上寶草錦的不定芽，然后把培養(yǎng)基置于組培室光照條件下連續(xù)培養(yǎng)20天，統(tǒng)計實驗結。3.1植物激素6-BA對寶草錦不定芽的影表36-BA不同濃度配比對寶草錦不定芽增殖的影Table3Effectofdifferentconcentrationof6-BAonproliferationofadventitiousbudsofHaworthiavar.Triebnet6實驗組接種數(shù)(個)出芽數(shù)(個)增殖率平均每個不定芽數(shù)（個NAA0.1mg/L302893.3%6-NAA0.1mg/L302996.7%實驗組接種數(shù)(個)出芽數(shù)(個)增殖率平均每個不定芽數(shù)（個NAA0.1mg/L302893.3%6-NAA0.1mg/L302996.7%表46-BA不同濃度配比對寶草錦不定芽增殖的效Table4Effectofdifferentconcentrationof6-BAonproliferationofadventitiousbudsofHaworthiavar.Triebnet實驗組愈傷組織的質地不定芽的顏色不定芽的大6-NAA0.1mg/L疏松不定芽為翠綠6-NAA0.1mg/L致密不定芽為翠綠BA的濃度對寶草錦不定芽增殖有著明顯影響。由表3可知，當6-BA濃度由0.5mol/L增加為1mg/L時，出芽個數(shù)由28增加至29，增值由93.3%增加至96.7%，平均每個不定芽數(shù)由6.1增加至7。由表4可知，當6-BA濃度增加時，愈傷組織的質地由疏松變?yōu)橹旅?見圖1、），但是不定芽也會隨之由大變小。由此可見，6-BA濃度增加時，其出芽數(shù)、增殖率、平均每個不定芽數(shù)都增加，其愈傷組織的質也會由疏松變?yōu)橹旅?。因此可以得出結論：寶草錦不定芽增殖的培養(yǎng)基中6-BA最佳濃度為1mg/L圖16-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L寶草錦不定芽增殖培Figure16-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/LpropagationmediumofadventitiousbudofHaworthiacymbiformisvar.Triebnet圖26-BA1mg/L+NAA0.1mg/L寶草錦不定芽增殖培養(yǎng)Figure26-BA1mg/L+NAA0.1mg/LpropagationmediumofadventitiousbudofHaworthiacymbiformisvar.Triebnet3.2植物激素NAA對寶草錦不定芽的影表5NAA不同濃度配比對寶草錦不定芽增殖的影Table4EffectofdifferentconcentrationofNAAonproliferationofadventitiousbudsofHaworthiacymbiformisTriebnet實驗組接種數(shù)(個)出芽數(shù)(個)增殖率平均每個不定芽數(shù)（個6-NAA0.1mg/L302893.3%6-NAA0.15mg/L302480%表6當NAA不同濃度配比對寶草錦不定芽增殖的效Table6EffectofdifferentconcentrationofNAAonproliferationofadventitiousbudsofHaworthiacymbiformisTriebnet實驗組愈傷組織的質地不定芽的顏色不定芽的大6-NAA0.1mg/L疏松不定芽為翠綠6-NAA0.15mg/L疏松不定芽為黃綠色+7NAA的濃度對寶草錦不定芽增殖有著明顯影響。通過表5可知，實驗組1中寶草錦不定芽增NAA的濃度對寶草錦不定芽增殖有著明顯影響。通過表5可知，實驗組1中寶草錦不定芽增殖要好于實驗組2，其增殖率為93.3%，每個不定芽數(shù)為6.1。通過表6可知，實驗組1中不定芽顏色呈現(xiàn)翠綠色(見圖3)，要比實驗組2中不定芽(見圖4)的色澤鮮明，其不定發(fā)育要好于實驗組2。由此可見，實驗組1培養(yǎng)基進行寶草錦不定芽增殖要適于實驗組2。由上述可以得知，寶草錦不定芽增殖的基中NAA最佳濃度為0.1mg/L圖36-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L寶草錦不定芽增殖培Figure36-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/LpropagationmediumofadventitiousbudofHaworthiacymbiformisvar.Triebnet圖46-BA0.5mg/L+NAA0.15mg/L寶草錦不定芽增殖培Figure46-BA0.5mg/L+NAA0.15mg/LpropagationmediumofadventitiousbudofHaworthiacymbiformisvar.4根據(jù)以上實驗結果分析可知：當NAA濃度一定時，寶草錦不定芽增殖最適6-BA濃度為1mg/L。當6-BA濃度一定時，寶草錦不定芽增殖適NAA濃度為0.1mg/L。所以寶草錦不定芽快速增殖的最合適培養(yǎng)基為MS+6BA1mg/L+NAA0.1mg/L肖哲麗,柳金鳳.植物組織培養(yǎng)的研究進展及新技術應用[J].寧夏農(nóng)林科技,2011,51(01):13-陳菁瑛,藍賀勝,陳雄鷹.蘭花組織培養(yǎng)與快速繁殖技術[M].北京2004:劉慶昌,吳國良.植物細胞組織培養(yǎng)[J].中國農(nóng)林大學出版社,2002,尹穎.《植物組織培養(yǎng)技術》課程教學改革的探索與實踐[J].銅仁學院學報,2014,7(16):45-梁芳,蔣素華,王潔瓊,等.樹蘭組織培養(yǎng)外植體消毒方法初探[J].植物生理學通訊,2003,39(5):那淑芝,張東豪,甄占軒.庫拉索蘆薈的組織培養(yǎng)和植株的快速生根[J].植物生理學通訊,2003,39(5):趙娟,王玉國,尹美強,等.植物激素對褐斑伽藍葉片分化的影響[J].激光生物學報.2009,18(2):200-宋揚.冰燈玉露的組織培養(yǎng)與快速繁殖技術的研究[J].現(xiàn)代農(nóng)科技,2014(18):164-ChenJY,WenPF,KongWF,etal.E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