竇永起教授治療腫瘤學術思想總結及黃芪-莪術配伍抗腫瘤血管生成機制研究

竇永起教授治療腫瘤學術思想總結及黃芪—莪術配伍抗腫瘤血管生成機制研究目的:整理總結導師臨床辨病與辨證相結合診治腫瘤的學術思想,并通過動物實驗和細胞實驗,研究闡明導師常用益氣活血配伍黃芪-莪術的抗腫瘤效果及其抗腫瘤血管生成的作用機制。方法:1.學術思想總結方法:通過整理、總結導師的理論授課、臨證講解、學術論文、專題講座等資料,參考古今中醫(yī)相關文獻,結合同學討論,分析歸納導師在治療腫瘤類疾病方面的臨床經(jīng)驗和用藥規(guī)律,對導師辨病與辨證相結合診治腫瘤的學術思想進行系統(tǒng)總結。2.動物實驗研究方法:皮下注射瘤細胞構建C57BL/6小鼠Lewis肺癌荷瘤模型,隨機分為模型組、順鉑組(DDP)、黃芪及莪術單藥組、黃芪-莪術1:1,2:1,3:1配伍組。中藥組予相應劑量藥物灌胃15d,DDP組在第1,3,5,7,9,11,13,15d腹腔注射順鉑(2mg/kg),給藥期間測量小鼠體重及腫瘤體積變化。第16d處死小鼠后,計算瘤重指數(shù)、抑瘤率、胸腺及脾臟指數(shù),計數(shù)肺轉移結節(jié),H-E染色分析瘤組織病理學變化。選擇模型組、DDP組、黃芪-莪術1:1,2:1,3:1配伍組的瘤組織進行抗腫瘤血管生成相關檢測,免疫組化法檢測瘤組織微血管密度(MVD);WesternBlot檢測瘤組織TGF-β1/MAPKs/HIF-lα信號通路關鍵因子的表達。3.細胞實驗研究方法:采用均勻試驗設計對黃芪-莪術配伍中4種已知的有效成分黃芪多糖、黃芪總皂苷、姜黃素、β-欖香烯進行最優(yōu)組分配伍篩選,并觀察最優(yōu)組分配伍(E)在不同濃度和時間條件下對A549細胞增殖抑制的干預效果。將A549細胞分為空白對照組、CoCl2對照組、DDP+CoC12組(DDP)、0.5E+CoC12組(0.5E)、E+CoC12組(E)、2E+C0Cl2組(2E)進行干預,流式細胞儀檢測細胞凋亡率,應用WesternBlot法檢測凋亡相關的Bax、Bcl-2、caspase-3蛋白及血管生成相關的TGF-β1/MAPKs/HIF-lα信號通路關鍵因子表達水平。結果:1.學術思想總結結果:腫瘤具有共同的發(fā)病基礎及相似的病理機制,而現(xiàn)代治療手段在治療腫瘤的同時又可能成為損傷人體的病理因素;將腫瘤的不同發(fā)展階段、不同臨床特征、不同治療手段,均納入“辨病論治”范疇,并運用中醫(yī)學相關理論對其進行辨病、辨證相結合的診治,將個體化、動態(tài)化的中醫(yī)治療優(yōu)勢體現(xiàn)在腫瘤綜合治療的全過程中。2.動物實驗研究結果:各藥物組的瘤重明顯低于模型組(P<0.05);各中藥組在抑制瘤重和肺轉移方面不如DDP組,但3:1配伍組與DDP組的瘤重指數(shù)和肺轉移灶數(shù)目差異不顯著(P>0.05);各中藥組的胸腺和脾臟指數(shù)高于DDP組(P<0.01)。各藥物組MVD計數(shù)低于模型組(P<0.01);各配伍組的MVD計數(shù)多于DDP組(P<0.05)。DDP組、2:1和3:1配伍組的VEGF、TGF-βl表達低于模型組(P<0.01);3:1配伍組VEGF表達低于DDP組(P<0.01)。各藥物組的HIF-1表達低于模型組(P<0.01);3:1配伍組與DDP組相比無顯著性差異(P>0.05),且低于其它配伍組(P<0.01)。各配伍組的p38MAPK、p-p38MAPK表達低于模型組及DDP組(P<0.01)。各藥物組的ERK1/2、p-ERKl/2和JNK、p-JNK表達較模型組顯著降低(P<0.01);3:1、2:1配伍組的ERK1/2、p-ERKl/2表達均低于DDP組(P<0.01);2:1配伍組p-JNK表達低于DDP組(P<0.01)。3.細胞實驗研究結果:黃芪-莪術配伍中4種已知有效成分的最佳配伍組合(E)為200mg/L黃芪多糖聯(lián)合32mg/L姜黃素,E以劑量和時間依賴性的方式抑制A549細胞增殖。在化學缺氧環(huán)境下,E、2E組的凋亡率與DDP組差異不顯著(P>0.05);2E組的Bax、Bcl-2表達與DDP組相比差異不顯著(P>0.05),各劑量E組的caspase-3表達均低于DDP組(P<0.01);2E組上調Bax、caspase-3及下調Bcl-2表達的作用優(yōu)于其它劑量組。2E組TGF-β1、HIF-1αVEGF表達低于DDP組(P<0.01)。E、2E組p38MAPK、p-p38MAPK表達均低于DDP組(P<0.01);0.5E、2E組的JNK和p-JNK表達低于DDP組(P<0.05);各劑量最優(yōu)配伍組的ERK1/2、p-ERK1/2表達均低于DDP組(P<0.01)。結論:1.導師認為腫瘤共同的發(fā)病基礎是正虛邪實、氣血紊亂;共同的病理因素是氣滯、血瘀、痰凝、癌毒;在辨病基礎上結合中醫(yī)四診的辨證,給予因人而異的、動態(tài)中醫(yī)治療,發(fā)揮對現(xiàn)代醫(yī)學治療方法的增效減毒作用,能夠改善腫瘤患者的生活質量,提高中西醫(yī)結合治療腫瘤的水平。2.不同比例黃芪-莪術配伍能夠抑制Lewis肺癌荷瘤小鼠移植瘤的生長和轉移,降低瘤組織MVD,能夠不同程度的下調TGF-β1/MAPKs/HIF-1α信號通路關鍵因子TGF-β1、p38MAPK、p-p38MAPK、ERK1/2、p-ERK1/2、JNK、p-JNK、HIF-1α、VEGF的表達,抑制腫瘤血管生成。3.黃芪多糖聯(lián)合姜黃素是黃芪-莪術配伍中4種已知有效成分抑制A549細胞增殖的最優(yōu)配伍組合,其通過調控Bax、Bcl-2與caspase-3的表達