塵螨或卡介苗注射新生大鼠對(duì)發(fā)育后期氣道炎癥及T-H細(xì)胞亞群功能的影響

塵螨或卡介苗注射新生大鼠對(duì)發(fā)育后期氣道炎癥及T_H細(xì)胞亞群功能的影響目的已證實(shí)TH1/TH亞群功能失衡在哮喘發(fā)病中起重要作用，機(jī)體早期接觸不同性質(zhì)抗原可能影響TH1/TH平衡。我們?cè)O(shè)想：在嬰兒早期注射某些抗原，或者早期即注意避免接觸某些抗原，可能使免疫反應(yīng)維持TH1優(yōu)勢(shì)，減少將來特應(yīng)癥或變態(tài)反應(yīng)的發(fā)生。本實(shí)驗(yàn)擬用不同特性抗原（HDM、BCG）早期接種Wistar大鼠，應(yīng)用組織學(xué)、免疫學(xué)等方法研究不同干預(yù)方法對(duì)大鼠氣道炎癥的影響及其作用機(jī)制，并進(jìn)一步從肺組織IL-4mRNA表達(dá)探討氣道炎癥的免疫學(xué)發(fā)病機(jī)理，對(duì)預(yù)防由TH1/TH2功能失衡引起的過敏性疾病、研制“哮喘疫苗”以及“預(yù)防小兒哮喘應(yīng)從胎兒期和/或嬰兒期開始”的新觀點(diǎn)提供重要的理論依據(jù)。方法將所有Wistar大鼠分為HDM組、BCG組、陽(yáng)性對(duì)照組、陰性對(duì)照組共4組。HDM組：新生大鼠于生后24小時(shí)內(nèi)，用HDM點(diǎn)刺液0.1ml（含Derp5000SBE）/只進(jìn)行皮下注射，每周一次，共4次。BCG組：新生大鼠于生后24小時(shí)內(nèi)，皮下注射一次BCG0.1ml（含5×104CFU）<WP=6>1./只。陽(yáng)性對(duì)照組和陰性對(duì)照組均按照HDM組實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行早期致敏，但用N.S替換HDM。于生后日齡第31天時(shí)，所有大鼠用OVA制作哮喘模型，但陰性對(duì)照組用N.S代替OVA。2.外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)的制備及培養(yǎng)，采用ELISA法檢測(cè)培養(yǎng)上清中IL-4、IFN-γ水平。3.應(yīng)用ELISA法進(jìn)行血清OVA特異性IgE抗體檢測(cè)4.支氣管肺泡灌洗及灌洗液中細(xì)胞分類計(jì)數(shù)。5.肺組織光鏡和電鏡形態(tài)學(xué)分析。6.原位雜交檢測(cè)肺組織IL-4mRNA表達(dá)。結(jié)果1．Wistar大鼠BALF中各細(xì)胞成分百分比：BALF平均回吸率均>80%，并按EOS、NEU、LYM、MAC進(jìn)行分類計(jì)數(shù)。陽(yáng)性對(duì)照組EOS百分比明顯高于陰性對(duì)照組。HDM組較陽(yáng)性對(duì)照組明顯增高。BCG組較陽(yáng)性對(duì)照組明顯降低。2．病理變化；（1）光學(xué)顯微鏡下病理改變：陰性對(duì)照組的肺組織標(biāo)本無任何炎癥改變；而陽(yáng)性對(duì)照組、HDM組有明顯的變態(tài)反應(yīng)性炎癥變化，如：氣道及其周圍有大量的EOS浸潤(rùn)、氣道變狹窄、有部分氣道內(nèi)能見到黏液栓的形成等變化。但BCG組這種病理改變減輕了，表現(xiàn)在：氣道內(nèi)EOS浸潤(rùn)明顯減少，氣道狹窄程度減輕，沒有黏液栓形成等。（2）電子顯微鏡下病理改變：在陰性對(duì)照組中沒有發(fā)現(xiàn)EOS<WP=7>浸潤(rùn)，而陽(yáng)性對(duì)照組中則發(fā)現(xiàn)明顯EOS浸潤(rùn)。3．血清中OVA特異性免疫球蛋白IgE水平的檢測(cè)：通過陽(yáng)性對(duì)照組與其他各組間的比較可以發(fā)現(xiàn)，陽(yáng)性對(duì)照組的OVA特異性IgE水平明顯高于陰性對(duì)照組，HDM組則明顯高于陽(yáng)性對(duì)照組，而BCG組則明顯低于陽(yáng)性對(duì)照組。4．PBMC產(chǎn)生IL-4的檢測(cè)：在各組中，陰性對(duì)照組為最低，HDM組為最高，陽(yáng)性對(duì)照組及BCG組居中，但是，BCG組明顯低于陽(yáng)性對(duì)照組及HDM組。5．PBMC產(chǎn)生IFN-γ的檢測(cè)：各組中，HDM組和陽(yáng)性對(duì)照組為較低，BCG組和陰性對(duì)照組為較高。6．原位雜交檢測(cè)肺組織IL-4mRNA的表達(dá)：陽(yáng)性對(duì)照組、BCG組和HDM組致敏大鼠在最后一次激發(fā)后24小時(shí)的肺組織標(biāo)本表達(dá)IL-4mRNA細(xì)胞百分比分別為：25.3±4.6%，9.2±3.9%，30.9±5.0%，陰性對(duì)照組中無IL-4mRNA表達(dá)。陽(yáng)性對(duì)照組、HDM組和陰性對(duì)照組比較，陽(yáng)性對(duì)照組和BCG組比較，HDM組和BCG組比較差異均有顯著性。結(jié)論和意義1．大鼠哮喘模型的建立及在哮喘研究中的作用：我們用Wistar大鼠，以O(shè)VA為免疫抗原，選擇Al（OH）3為佐劑，聯(lián)合i.p、s.c和氣道吸入途徑進(jìn)行致敏和激發(fā)，并在s.c時(shí)采用多點(diǎn)注射，成功地制作出Wistar大鼠哮喘模型。該模型動(dòng)物具有明顯氣道炎癥，血清OVA特異性IgE升高，<WP=8>PBMC產(chǎn)生IL-4異常增高而IFN-γ明顯降低，以及肺組織標(biāo)本IL-4mRNA表達(dá)水平增高，進(jìn)一步表明該模型出現(xiàn)的變態(tài)反應(yīng)與TH1/TH2失衡有關(guān)。2．HDM是最常見的引起致敏和哮喘發(fā)作的吸入性變應(yīng)原，與哮喘的關(guān)系非常密切。我們的實(shí)驗(yàn)表明，生后早期接觸HDM能加重以后氣道變態(tài)反應(yīng)性炎癥。HDM組大鼠于生后即皮下注射HDM，在制成哮喘模型后出現(xiàn)明顯的氣道炎癥。引起這些病變的原因除了與TH1/TH2失