猴痘病毒（MPOX）IgM抗體ELISA說明書

【產(chǎn)品名稱】通用名稱：猴痘病毒（MPOX）IgM抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）作|者（瀏覽器搜索）：疾控科研試劑博客聯(lián)|系：I99l--47-47--I94【包裝規(guī)格】96人份/盒【預(yù)期用途】該產(chǎn)品用于體外定性檢測人血清中猴痘病毒（MPOX）IgM抗體。其對MPOX感染的早期診斷具有輔助診斷意義。猴痘病毒（Monkeypoxvirus，MPOX)）歸類于猴痘（Monkeypox）是由猴痘病毒感染所致的人獸共患病。猴痘主要發(fā)生在中非和西非地區(qū)，可感染多種哺乳類動物，主要在動物中流行。人接觸感染動物后可被傳染，猴痘的臨床表現(xiàn)與天花相似（發(fā)熱、皮疹等），但癥狀較輕。迄今為止，所報告的病例主要見于（但不限于）就醫(yī)的男男性行為者。猴痘不是常見的性傳播疾病，皮疹和旅行史更有助于猴痘的確診。以與有癥狀猴痘患者進(jìn)行身體密切接觸的人群風(fēng)險最大。感染MPOX后，可引起體液免疫和細(xì)胞免疫反應(yīng)。在皮疹發(fā)生后5天左右，體液免疫應(yīng)答先出現(xiàn)特異性IgM抗體，可持續(xù)數(shù)周，然后出現(xiàn)IgG抗體，持續(xù)較長時間?！緳z驗原理】本試劑盒采用MPOX重組抗原預(yù)包被板，并配以辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記抗人IgM單克隆抗體作為標(biāo)記物，以ELISA間接法原理，定性檢測人血清中存在的MPOX-IgM抗體。反應(yīng)復(fù)合物在加入底物TMB后顯色，終止反應(yīng)后在450nm波長測各孔O.D值，O.D值的大小與待檢抗體含量成正比?！局饕M成成分】組分名稱主要成分規(guī)格及裝量96人份預(yù)包被反應(yīng)板含MPOX重組抗原12×8標(biāo)本稀釋液含中和因子的磷酸鹽緩沖液22mL濃縮洗滌液（30X）含TW-20的磷酸鹽緩沖液20mL酶結(jié)合物含抗人IgM-HRP顯色劑A含過氧化脲的檸檬酸緩沖液5ml顯色劑B含TMB的檸檬酸緩沖液5ml終止液2MH2SO45ml陰性對照含正常人血清1.0ml陽性對照含MPOX-IgM陽性血清1.0ml注：不同批號試劑不能混用。【儲存條件及有效期】2~8℃密封保存，避免凍結(jié)。有效期12個月。開瓶有效期為7天。運輸途中包裝箱加冰袋密封后37℃以下一周不影響產(chǎn)品性能。生產(chǎn)日期、使用期限或失效期：見標(biāo)簽。【適用儀器】具備450nm檢測波長的酶標(biāo)儀均可使用。【樣本要求】1、采用新鮮血清樣本，如需保存，短期可于2~8℃冷藏48小時，長期可在-20℃以下。避免反復(fù)凍融（3次以上）。2、避免用溶血、混濁或脂血樣本。3、樣本若需運輸，應(yīng)保持2~8℃或凍存狀態(tài)。4、樣本中避免加入抗凝劑或保護(hù)劑或防腐劑，以免影響試驗結(jié)果。5、因本試劑盒標(biāo)本稀釋液含中和因子，經(jīng)標(biāo)本稀釋液處理的標(biāo)本不能用于IgG類抗體和RF因子的相關(guān)檢測?！緳z驗方法】1、將試劑盒平衡至室溫后拆封取出預(yù)包被反應(yīng)板。濃縮洗滌液用蒸餾水1：30稀釋待用。2、標(biāo)本稀釋：按1：100于孔外稀釋待檢標(biāo)本（如：2ul標(biāo)本---200ul標(biāo)本稀釋液），混勻。3、加樣：于各反應(yīng)板孔中加入100ul已稀釋的待檢標(biāo)本。設(shè)陰/陽性對照（每孔100ul，不稀釋）各一孔，空白對照一孔（加100ul標(biāo)本稀釋液震蕩混勻。4、孵育：37℃溫育30分鐘。甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿（或300ul）洗滌液，連續(xù)洗板3次，每次停留30秒，并每次在吸水紙上拍干。5、加酶結(jié)合物：每孔100ul（或2滴），混勻后置37℃溫育30分鐘。同上法連續(xù)洗板3次并拍干。6、顯色：每孔加顯色劑A、B各50ul（或各1震蕩混勻后，置37℃溫育10分鐘。【陽性判斷值】正常健康人應(yīng)為陰性。即待測標(biāo)本O.D值比陰性對照O.D值在2.1倍以內(nèi)即S/N＜2.1，S/N≥2.1為陽【檢驗結(jié)果的解釋】1、目測：在白色背景下觀察各孔顯色情況，藍(lán)色者為陽性，無色者為陰性。2、酶標(biāo)儀測定：每孔加終止液50ul（或一滴），混勻后在450nm波長下以空白孔調(diào)零后測定各孔O.D值。1S/N=標(biāo)本O.D值/陰性對照O.D值。2S/N≥2.1為陽性；3S/N＜2.1為陰性。4陰性對照小于0.10時以0.10計。3、肉眼可見藍(lán)色，但酶標(biāo)儀測出O.D值小于0.21者，為可疑標(biāo)本，應(yīng)重測。對實驗結(jié)果可能產(chǎn)生影響的因素見“注意事項”內(nèi)容。4、陰性對照O.D值應(yīng)＜0.21，陽性對照O.D值應(yīng)≥0.40，同時滿足兩項條件證明實驗有效。否則無效，需重測?！緳z驗方法的局限性】1、本試劑盒檢測結(jié)果只作為輔助診斷，疾病的確診需要結(jié)合臨床癥狀/體征和其他檢查方法方可做出判斷。若要得到準(zhǔn)確值，需要調(diào)整標(biāo)本稀釋度并在判讀結(jié)果時結(jié)合考慮相應(yīng)的稀釋度。3、感染初期，MPOX-IgM抗體未產(chǎn)生或滴度很低會導(dǎo)致陰性結(jié)果，如懷疑有病原體感染，應(yīng)在7~14天內(nèi)復(fù)查?！井a(chǎn)品性能指標(biāo)】1、陽性符合率：對10份企業(yè)陽性質(zhì)控品的檢測全部為陽性。2、陰性符合率：對15份企業(yè)陰性質(zhì)控品的檢測全部為陰性。3、最低檢出量：對企業(yè)最低檢出量質(zhì)控品進(jìn)行檢測，結(jié)果均能檢出。4、精密性：批內(nèi)精密性（CV）值小于10%，批間精密性（CV）值小于15%。無交叉反應(yīng)。6、血液干擾物質(zhì)如黃疸，血紅蛋白，脂肪乳糜的檢測上限分別為5mg/l、200mg/l、500mg/l?！咀⒁馐马棥?、試劑盒僅供體外診斷用。2、微孔板須密封防潮，從冷藏環(huán)境中取出時，應(yīng)置室溫平衡至潮氣盡干后方可開啟使用，余者封存置2~8℃短期內(nèi)用完。3、滴加試劑前應(yīng)將試劑混勻，滴加時保持瓶身垂4、洗滌時每孔均須加滿，防止孔內(nèi)有游離酶不能洗5、試劑置2~8℃存放，不能凍結(jié)。6、本試劑盒中陰/陽性對照含人源性血清成分，雖經(jīng)生物安全性檢測，HBV/HIV/HCV均為陰性反應(yīng)，且經(jīng)60℃1小時滅活處理，但仍應(yīng)按污染物對待。【參考文獻(xiàn)】1、王自正等編著.現(xiàn)代醫(yī)學(xué)標(biāo)記免疫學(xué)[M].北京:人民軍醫(yī)出版社,2000,10-13.2、EmmanuelAlakunle,UgoMoens,GodwinNchind