《分析化學(xué)》第十二章-液相色譜法

第十二章液相色譜法第一節(jié)概述第二節(jié)柱色譜法第三節(jié)平面色譜法思考與練習(xí)2023/12/191第一節(jié)概述色譜法(chromatography)又稱(chēng)層析法，是一種依據(jù)物質(zhì)的物理化學(xué)性質(zhì)的不同(如溶解性、極性、離子交換能力、分子大小等)而進(jìn)行的分離分析方法。一、色譜法的產(chǎn)生和發(fā)展二、色譜法的分類(lèi)三、色譜法的基本原理2023/12/192一、色譜法的產(chǎn)生和發(fā)展俄國(guó)植物學(xué)家茨維特在1906年使用的裝置，如圖：起分離作用的柱子叫色譜柱，其中的一相固定不動(dòng)，稱(chēng)為固定相；另一相是攜帶試樣混合物流過(guò)此固定相的流體(氣體或液體)，稱(chēng)為流動(dòng)相。色譜法是一種分離技術(shù)2023/12/193小結(jié)：色譜過(guò)程組分的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)微小差異與固定相作用差異隨流動(dòng)相移動(dòng)的速度不等差速遷移色譜分離。兩相及兩相的相對(duì)運(yùn)動(dòng)構(gòu)成了色譜法的基礎(chǔ)；色譜過(guò)程就是組分的分子在流動(dòng)相和固定相間多次“分配”產(chǎn)生“差速遷移”的過(guò)程。2023/12/196（二）分配系數(shù)K被分離組分以不同的程度分布在兩相中，溶質(zhì)既可進(jìn)入固定相，也可進(jìn)入流動(dòng)相，這個(gè)過(guò)程叫分配分配系數(shù):在一定的溫度和壓力下，某組分在兩相間的分配達(dá)到平衡時(shí)濃度（或溶解度）之比。組分在流動(dòng)相中的濃度cm組分在固定相中的濃度csK=K吸附色譜：吸附平衡常數(shù)分配色譜：分配系數(shù)離子交換色譜：交換系數(shù)凝膠色譜：滲透系數(shù)(吸附系數(shù))2023/12/197（三）保留值某組分從開(kāi)始洗脫到從柱中被洗脫下來(lái)所需要的時(shí)間稱(chēng)為保留時(shí)間(retentiontime)，通常用符號(hào)“tR”表示。某組分從開(kāi)始洗脫到從柱中被洗脫下來(lái)所需要的流動(dòng)相的體積稱(chēng)為保留體積(retentionvolume)，通常用符號(hào)“VR”表示。保留值是色譜法定性分析的基本參數(shù)。2023/12/198（四）分配系數(shù)與保留值的關(guān)系K值越大，移動(dòng)速度越慢，tR越長(zhǎng)，后出柱K值越小，移動(dòng)速度越快，tR越短，先出柱混合物中各組分間的分配系數(shù)K相差越大，各組分越容易被分離2023/12/199第二節(jié)柱色譜法一、液-固吸附柱色譜法二、分配柱色譜法三、離子交換柱色譜法四、凝膠柱色譜法2023/12/1910一、液-固吸附柱色譜法（一）原理利用吸附劑對(duì)不同組分的吸附能力的差異進(jìn)行分離的一種色譜法。吸附作用與吸附平衡吸附平衡常數(shù)（吸附系數(shù)）組分在流動(dòng)相中的濃度組分在吸附劑中的濃度=K影響K的因素:吸附劑的活性、組分和流動(dòng)相的性質(zhì)K的意義:組分的吸附系數(shù)K越大，表示越容易被吸附，保留時(shí)間越長(zhǎng)，流出色譜柱就越慢。2023/12/1911（二）吸附劑1.對(duì)吸附劑的基本要求是：(1).具有較大的表面積和足夠的吸附能力。(2).在所用的溶劑和洗脫劑中不溶解；不與試樣各組分、溶劑和洗脫劑發(fā)生化學(xué)反應(yīng)。(3).顆粒較均勻，有一定的細(xì)度，在使用過(guò)程中不易破碎。(4).具有較為可逆的吸附性，既能吸附試樣組分，又易于解吸。目前最常用的吸附劑是硅膠和氧化鋁，其次是聚酰胺、活性炭，還有大孔吸附樹(shù)脂等。2023/12/19122.常用的吸附劑硅膠：多孔性微粒，表面帶有硅醇基，呈弱酸性。原理:硅醇基(吸附中心)與極性基團(tuán)形成氫鍵(吸附性),組分與硅醇基形成氫鍵(被吸附)的能力不同而分離。應(yīng)用:酸性和中性物質(zhì)的分離，如有機(jī)酸、酚類(lèi)、醛類(lèi).2023/12/1913硅膠活度與含水量的關(guān)系：含水量高，活度低。活化：加熱至100℃左右，除去吸附水提高活度分離效率：與其粒度及表面積等有關(guān)。常用硅膠：硅膠H，不含黏合劑硅膠G，含煅石膏硅膠GF254，含煅石膏和一種無(wú)機(jī)熒光劑，即錳激活的硅酸鋅，在254nm紫外光下呈強(qiáng)烈黃綠色熒光背景。硅膠含水量%活性級(jí)別氧化鋁含水量%0Ⅰ05Ⅱ315Ⅲ625Ⅳ1038Ⅴ152023/12/1914氧化鋁種類(lèi)堿性氧化鋁(pH9～10):適用于分離堿性或中性化合物酸性氧化鋁(pH5～4.5):適用于分離酸性化合物中性氧化鋁(pH7～7.5):適用于分離酸性、中性和堿性化合物活性與含水量的關(guān)系含水量高，活性級(jí)高，活度低硅膠含水量%活性級(jí)別氧化鋁含水量%0Ⅰ05Ⅱ315Ⅲ625Ⅳ1038Ⅴ152023/12/1915其它吸附劑聚酰胺是一類(lèi)由酰胺聚合而成的高分子化合物結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：存在許多酰胺鍵，可與酚類(lèi)、酸類(lèi)、硝基化合物、醌類(lèi)等形成氫鍵。活性碳：屬于非極性吸附劑，吸附能力強(qiáng)，適合于水溶性物質(zhì)的分離大孔吸附樹(shù)脂：不含交換基團(tuán)，具有大孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的高分子吸附劑。用于皂苷及苷類(lèi)化合物的分離2023/12/1916（三）流動(dòng)相(洗脫劑)

1.對(duì)流動(dòng)相的基本要求是：(1).對(duì)試樣組分的溶解度要足夠大。(2).不與試樣組分和吸附劑發(fā)生化學(xué)反應(yīng)。(3).粘度小，易流動(dòng)。(4).有足夠的純度。2.溶劑的極性由弱到強(qiáng)的順序：石油醚<環(huán)己烷<四氯化碳<苯<甲苯<乙醚<氯仿<乙酸乙酯<正丁醇<丙酮<乙醇<甲醇<水2023/12/1917(四）被分離的物質(zhì)(1)烷烴系非極性化合物,一般不被吸附或吸附不牢固.(2)不飽和烴分子中雙鍵越多或共軛鏈越長(zhǎng),其極性越強(qiáng),被吸附力亦越強(qiáng).(3)當(dāng)形成分子內(nèi)氫鍵時(shí),被吸附力減弱.(4)同系物中,分子量越大,極性越小,被吸附力越弱.(5)基本母核相同的化合物,分子中官能團(tuán)極性越大或極性官能團(tuán)越多,則分子的極性越大,被吸附力越強(qiáng).常見(jiàn)官能團(tuán)的極性由小到大的順序：烷烴<烯烴<醚類(lèi)<硝基化合物<酯類(lèi)<酮類(lèi)<醛類(lèi)<硫醇<胺類(lèi)<醇類(lèi)<酚類(lèi)<羧酸類(lèi)2023/12/1918(1)吸附劑的活性與被分離組分極性的關(guān)系分離極性小的組分，選擇吸附性能大的吸附劑，以免組分流出太快，難以分離；分離極性大的組分，宜選用吸附性能小的吸附劑，以免吸附過(guò)牢，不易洗脫。2023/12/1919(2)流動(dòng)相的極性與被分離組分極性的關(guān)系分離極性較大的組分時(shí)，宜選擇極性大的溶劑作洗脫劑；而分離極性小的組分時(shí)，宜選擇極性較小的溶劑作洗脫劑.2023/12/1920(五)選擇色譜分離條件的一般原則被分離組分的極性較小，應(yīng)選擇吸附活性較大的吸附劑和極性較小的洗脫劑.2023/12/1921（六）操作方法1.裝柱2.加樣3.洗脫2023/12/1922二、液－液分配柱色譜法（一）分離機(jī)理利用混合物中不同組分在兩相溶劑中溶解性不同(分配系數(shù)不同)，當(dāng)流動(dòng)相攜帶樣品流經(jīng)固定相時(shí)，各組分在兩相間不斷進(jìn)行溶解、萃取，再溶解、再萃取。樣品在色譜柱內(nèi)經(jīng)過(guò)無(wú)數(shù)次分配之后，而使分配系數(shù)稍有差異的組分得到分離。正相色譜：流動(dòng)相的極性比固定相的極性弱反相色譜：流動(dòng)相的極性比固定相的極性強(qiáng)2023/12/1923(二)固定相載體（擔(dān)體）載體的作用在分配色譜中，載體起著負(fù)載或支持固定液的作用對(duì)載體的要求：惰性、純凈、顆粒大小適宜；既能吸附固定液，又不吸附被分離的組分和流動(dòng)相常用的載體：吸水硅膠、多孔硅藻土、纖維素粉、濾紙2023/12/1924(二)固定相固定相是液體，涂布或吸附在載體表面。正相色譜中固定相主要有：水、稀酸、甲醇、甲酰胺等強(qiáng)極性溶劑；反相色譜中為石蠟油等非極性液體。2023/12/1925（三）流動(dòng)相對(duì)流動(dòng)相的要求：流動(dòng)相的極性與固定相的極性應(yīng)相差很大，才能互不相溶。柱色譜中的固定相的極性都較大，因而流動(dòng)相應(yīng)選擇極性較小的溶劑常用的流動(dòng)相：正相色譜中有石油醚、醇類(lèi)、酮類(lèi)、酯類(lèi)、鹵代烷、苯或混合溶劑；反相色譜中有水、稀醇溶液等。2023/12/1926(四)操作方法1.預(yù)處理將固定液與流動(dòng)相混合，相互飽和，靜置后分離固定液涂布在載體上2.裝柱3.加樣4.洗脫2023/12/1927三、離子交換色譜法分離原理：固定相：離子交換樹(shù)脂流動(dòng)相：水、酸或堿溶液分離對(duì)象：離子型化合物利用離子交換劑與溶液中的離子發(fā)生交換作用而使離子分離的方法.當(dāng)被分離的離子隨著流動(dòng)相流經(jīng)色譜柱時(shí)，與離子交換樹(shù)脂上可被交換的離子連續(xù)進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)交換，由于不同離子與交換樹(shù)脂的競(jìng)爭(zhēng)交換能力不同，因而在柱內(nèi)的移動(dòng)速度也不同，交換能力弱的離子移動(dòng)速度快，保留時(shí)間短，先流出色譜柱。2023/12/1928（一）離子交換樹(shù)脂的分類(lèi)離子交換樹(shù)脂是具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的復(fù)雜的有機(jī)高分子聚合物。網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的骨架部分一般很穩(wěn)定，不溶于酸、堿和一般溶劑。在網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的骨架上有許多可被交換的活性基團(tuán)。根據(jù)活性基團(tuán)的不同、離子交換樹(shù)脂可分為陽(yáng)離子交換樹(shù)脂和陰離子交換樹(shù)脂兩大類(lèi)。2023/12/1929（一）離子交換樹(shù)脂的分類(lèi)1.陽(yáng)離子交換樹(shù)脂陽(yáng)離子交換樹(shù)脂具有酸性基團(tuán)，如應(yīng)用最廣泛的強(qiáng)酸性磺酸型聚苯乙烯樹(shù)脂，它是以苯乙烯和二乙烯苯聚合，經(jīng)濃硫酸磺化而制得的聚合物。這種樹(shù)脂的化學(xué)性質(zhì)很穩(wěn)定，具有耐強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、氧化劑和還原劑的性質(zhì)，因此應(yīng)用非常廣泛。2023/12/1930各種陽(yáng)離子交換樹(shù)脂含有不同的活性基團(tuán)、常見(jiàn)的有磺酸基(-SO3H)、羧基(-COOH)和酚羥基(-OH)等。根據(jù)活性基團(tuán)離解出H+能力的大小不同，陽(yáng)離子交換樹(shù)脂分為強(qiáng)酸性和弱酸性?xún)煞N。例如含-SO3H的為強(qiáng)酸性陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，常用R-SO3H表示(R表示樹(shù)脂的骨架)，含-COOH和-OH的弱酸性陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，分別用R-COOH和R-OH表示。陽(yáng)離子交換反應(yīng)-++--++-+-==+-ClHMSORClMHSOR332023/12/19312.陰離子交換樹(shù)脂所連的活性基團(tuán)為堿性基團(tuán)如含季胺(-N(CH3)3)的樹(shù)脂稱(chēng)為強(qiáng)堿性陰離子交換樹(shù)脂，含伯胺基(-NH2)、仲胺基(-NHCH3)和叔胺基(-N(CH3)2)的樹(shù)脂為弱堿性陰離子交換樹(shù)脂。樹(shù)脂水化后分別形成R-NH3OH、R-NH2CH3OH、R-NH(CH3)2OH和R-N(CH3)3OH等氫氧型陰離子交換樹(shù)脂，所連的OH-可被陰離子交換和洗脫。陰離子交換反應(yīng)---+==+OHXOH)CH(RN33RN(CH3)3+X-+2023/12/1932樹(shù)脂的再生

陽(yáng)離子交換樹(shù)脂用HCl溶液處理

陰離子交換樹(shù)脂用NaOH溶液處理-++--++-+-==+-ClMHSORClHMSOR33-++==+OH)CH(RNNaOHX－)CH(RN3333+Na+X-2023/12/1933(二）離子交換樹(shù)脂的性能1.交聯(lián)度交聯(lián)度：樹(shù)脂中交聯(lián)劑的含量。常以重量百分比表示交聯(lián)度對(duì)樹(shù)脂性質(zhì)的影響：（1）交聯(lián)度大，形成的樹(shù)脂結(jié)構(gòu)緊密，機(jī)械強(qiáng)度高；（2）交聯(lián)度大，孔徑就小，交換體積大的離子進(jìn)入樹(shù)脂受阻，因而提高了交換的選擇性；（3）但交聯(lián)度過(guò)大，網(wǎng)眼過(guò)小，會(huì)使交換速度減慢，交換容量下降。陽(yáng)離子交換樹(shù)脂交聯(lián)度8%，陰離子交換樹(shù)脂交聯(lián)度4%。2023/12/19342.交換容量理論上的交換容量是指每克干樹(shù)脂所含活性基團(tuán)的物質(zhì)的量，而實(shí)際交換容量是指在實(shí)驗(yàn)條件下，每克干樹(shù)脂能交換離子的物質(zhì)的量。單位：mmol/g顯然交換容量的大小取決于網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)內(nèi)所含活性基團(tuán)的數(shù)目。交換容量可通過(guò)實(shí)驗(yàn)測(cè)得。樹(shù)脂的交換容量一般為1～10mmol/g交換容量反映了樹(shù)脂交換反應(yīng)的能力2023/12/1935（三）離子交換柱色譜的操作方法1.樹(shù)脂的預(yù)處理目的（1）除去雜質(zhì)（2）進(jìn)行轉(zhuǎn)型商品樹(shù)脂往往含有無(wú)機(jī)或有機(jī)雜質(zhì)，使用前必須用酸、堿處理以除去雜質(zhì)。處理方法：先將樹(shù)脂在水中浸泡使其充分膨脹。市售陽(yáng)離子交換樹(shù)脂為Na型，一般用鹽酸浸泡以除去雜質(zhì)，然后用水洗至中性，這樣可使Na型轉(zhuǎn)化為H型。陰離子交換樹(shù)脂可用氫氧化鈉溶液浸泡沖洗轉(zhuǎn)變?yōu)镺H型。2.裝柱3.交換與洗脫2023/12/1936（四）離子交換法的應(yīng)用1.純水的制備天然水中常含一些無(wú)機(jī)鹽類(lèi)，為了除去這些無(wú)機(jī)鹽類(lèi)以便將水凈化，可將水通過(guò)氫型強(qiáng)酸性陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，除去各種陽(yáng)離子。如以CaCl2代表水中的雜質(zhì)，則交換反應(yīng)為：

2R-SO3H+Ca2+＝(R-SO3)2Ca+2H+再通過(guò)氫氧型強(qiáng)堿性陰離子交換樹(shù)脂，除去各種陰離子。

RN(CH3)3OH+C1-＝RN(CH3)3Cl+OH-交換下來(lái)的H+和OH-結(jié)合成H2O，這樣就可以得到相當(dāng)純凈的所謂“去離子水”，可以代替蒸餾水使用。2023/12/1937（四）離子交換法的應(yīng)用2.干擾離子的分離

(1)陰陽(yáng)離子的分離在分析測(cè)定過(guò)程中，其他離子的存在常有干擾。對(duì)不同電荷的離子，用離子交換分離的方法排除干擾最為方便。例如用BaSO4重量沉淀法測(cè)定黃鐵礦中硫的含量時(shí)，由于大量Fe3+、Ca2+的存在，造成BaSO4沉淀的不純，因此可先將試液通過(guò)氫型強(qiáng)酸性陽(yáng)離子交換樹(shù)脂除去干擾離子，然后再將流出液中的SO42-沉淀為BaSO4進(jìn)行硫的測(cè)定，這樣便可以大大提高測(cè)定的準(zhǔn)確度。2023/12/1938（四）離子交換法的應(yīng)用(2)同性電荷離子的分離如果要使幾種陽(yáng)離子或幾種陰離子分離開(kāi)，可以根據(jù)各種離子對(duì)樹(shù)脂的親和力不同，將它們彼此分離。例如欲分離Li+、Na+、K+三種離子，將試液通過(guò)陽(yáng)離子樹(shù)脂交換柱，則三種離子均被交換在樹(shù)脂上,然后用稀HCl洗脫，交換能力最小的Li+先流出柱外，其次是Na+而交換能力最大的K+最后流出來(lái)。2023/12/19393.微量組分的富集以測(cè)定礦石中的鉑、鈀為例來(lái)說(shuō)明。由于鉑、鈀在礦石中的含量一般為10-5-10-6％，即使稱(chēng)取10克試樣進(jìn)行分析，也只含鉑、鈀0.1微克左右。因此，必須經(jīng)過(guò)富集之后才能進(jìn)行測(cè)定。富集的方法是：稱(chēng)取10-20克試樣，在700℃灼燒之后用王水溶解，加濃HCl蒸發(fā)，鉑、鈀形成PtCl62-和PdCl42-配陰離子。稀釋之后，通過(guò)強(qiáng)堿性陰離子交換，即可將鉑富集在交換柱上。用稀HCl將樹(shù)脂洗凈，取出樹(shù)脂移入瓷鉗鍋中，在700℃灰化，用王水溶解殘?jiān)?，加鹽酸蒸發(fā)。然后在8mol/LHCl介質(zhì)中，鈀(II)與雙十二烷基二硫代乙二酰胺(DDO)生成黃色配合物，用石油醚-三氯甲烷混合溶劑萃取，用比色法測(cè)定鈀。鉑(IV)用二氯化錫還原為鉑(II)，與DDO生成櫻紅色螯合物可進(jìn)行比色法測(cè)定。2023/12/1940四、凝膠柱色譜凝膠是一種由有機(jī)物制成的分子篩，為多孔性的化學(xué)惰性物質(zhì)。分離機(jī)理用凝膠作固定相，利用凝膠對(duì)分子大小不同的組分有著不同的阻滯作用(或滲透作用)來(lái)進(jìn)行的分離分析方法。2023/12/1941分離機(jī)理在洗脫過(guò)程中，各組分在柱中的保留時(shí)間取決于分子的大小。由于小分子可以完全滲透進(jìn)入凝膠內(nèi)部孔穴中而被滯留，中等分子可以部分的進(jìn)入較大的一些孔穴中，大分子則完全不能進(jìn)入孔穴中，而只能沿凝膠顆粒之間的空隙隨流動(dòng)相向下流動(dòng)。樣品中各組分按大分子在前，中等分子在中，小分子在后的順序依次從色譜柱中流出，從而得到分離2023/12/1942固定相和流動(dòng)相固定相多孔凝膠：軟質(zhì)、半軟質(zhì)和硬質(zhì)流動(dòng)相要求：能溶解試樣、潤(rùn)濕凝膠，粘度要低水溶性試樣選擇水溶液為流動(dòng)相(稱(chēng)為凝膠過(guò)濾色譜）；非水溶性試樣選擇四氫呋喃、氯仿、甲苯和二甲基甲酰胺等有機(jī)溶劑為流動(dòng)相(凝膠滲透色譜）。2023/12/1943第三節(jié)平面色譜法一、薄層色譜法二、紙色譜法2023/12/1944一、薄層色譜法

(thinlayerhromatography；TLC)薄層色譜法：將固定相涂布成一均勻薄層，在此薄層上進(jìn)行分離樣品的方法。薄板：鋪好固定相的板稱(chēng)為薄板。

2023/12/1945

分類(lèi)吸附薄層色譜法;分配薄層色譜法;離子交換薄層色譜法;凝膠薄層色譜法薄層色譜流動(dòng)相的移動(dòng)是依靠毛細(xì)作用。將試樣點(diǎn)在薄板的一端，并將該端浸在作為流動(dòng)相的溶劑（展開(kāi)劑）中，隨著溶劑向上的移動(dòng)，經(jīng)過(guò)試樣點(diǎn)時(shí)，帶動(dòng)試樣向上運(yùn)動(dòng)。（一）、基本原理2023/12/19461.分離原理（吸附薄層色譜法）固定相——吸附劑流動(dòng)相——液體，又稱(chēng)展開(kāi)劑操作方式——薄層板上原理組分在薄層板上吸附、解吸附、再吸附、再解吸附的過(guò)程。吸附系數(shù)不等產(chǎn)生差速遷移，K值大的組分隨展開(kāi)劑移動(dòng)速度慢，在后；K值小的組分隨展開(kāi)劑移動(dòng)速度快，在前。故薄層色譜又稱(chēng)敞開(kāi)的柱色譜2023/12/19472.比移值和相對(duì)比移值比移值Rf原點(diǎn)到溶劑前沿的距離原點(diǎn)到斑點(diǎn)中心的距離=fRcbR乙=caR)甲(f=2023/12/1948比移值R意義：（1)可定性分析：條件一定時(shí)，Rf是一常數(shù)，結(jié)構(gòu)不同的物質(zhì)，性質(zhì)不同，其Rf值不同。（2)各組分的Rf值差越大，分離得越開(kāi)。Rf與分配系數(shù)K的關(guān)系:K大，組分在固定相中濃度大，移動(dòng)速度慢，Rf小。要求：各組分的Rf在0.2～0.8之間，兩種組分的Rf差值大于0.052023/12/1949Rf的影響因素Rf的影響因素（1)吸附劑的吸附性能（2)展開(kāi)劑的極性（3)薄層板中吸附劑的厚度（4)展開(kāi)的時(shí)間（5)色譜缸中蒸氣的飽和程度

Rf的缺點(diǎn)：影響因素很多，很難得到重復(fù)的值2023/12/1950相對(duì)比移值（Rs）Rf小于1，但Rs不一定Rs在0~∞之間若Rs=1，試樣與對(duì)照品一致原點(diǎn)到對(duì)照品斑點(diǎn)中心的距離原點(diǎn)到樣品組分斑點(diǎn)中心的距離=fRbaRs=2023/12/1951(二)吸附劑的選擇與柱色譜中的吸附劑相似，只是顆粒更細(xì)。分離效率比柱色譜高常用的吸附劑有硅膠和氧化鋁，顆粒在200目(顆粒直徑在10～40μm)左右2023/12/1952(三)展開(kāi)劑的選擇薄層色譜中展開(kāi)劑的選擇原則與柱色譜中的洗脫劑的選擇原則相似。在薄層分離中一般各斑點(diǎn)的在0.2～0.8之間，各組分值之間應(yīng)相差0.05以上，否則易造成斑點(diǎn)重疊。薄層色譜法中常用的溶劑，按極性由弱到強(qiáng)的順序石油醚＜環(huán)己烷＜二硫化碳＜四氯化碳＜三氯乙烷＜苯＜甲苯＜二氯甲烷＜氯仿＜乙醚＜乙酸乙酯＜丙酮＜乙醇＜甲醇＜吡啶＜水2023/12/1953混合溶劑先用單一溶劑展開(kāi)，若Rf值太小，則加入一定量極性強(qiáng)的溶劑，如乙醇、丙酮等，如果Rf值太大，則加入適量極性弱的溶劑(如環(huán)己烷、石油醚等)，以降低極性。還可加入一定比例的酸或堿,使斑點(diǎn)集中。若要改變比移值時(shí)，除了改變展開(kāi)劑的極性外，還可通過(guò)改變吸附劑的活性來(lái)調(diào)節(jié)。2023/12/1954(四)操作方法制板均勻點(diǎn)樣距底邊1.5～2cm處畫(huà)一條起始線,試樣點(diǎn)的直徑一般應(yīng)小于0.5mm展開(kāi)(多種方式)預(yù)飽和顯色定性、定量分析2023/12/1955展開(kāi)展開(kāi)的過(guò)程就是混合物分離的過(guò)程。展開(kāi)方式(1)上行法；(2)近似水平法；(3)多次展開(kāi)法(4)雙向展開(kāi)法2023/12/1956顯色（斑點(diǎn)定位）1.直接觀察:有色斑點(diǎn)2.有些組份在紫外光照射下產(chǎn)生熒光，可在紫外燈下用鉛筆將組份斑點(diǎn)描繪出來(lái)。3.化學(xué)顯色:常用的方法有噴灑顯色劑、碘蒸氣熏或氨水熏等2023/12/1957通用型硫酸乙醇溶液:對(duì)大多數(shù)有機(jī)物能顯示出不同顏色碘:對(duì)許多有機(jī)物可顯色，如生物堿、氨基酸0.05%熒光黃甲醇溶液：對(duì)芳香族與雜環(huán)化合物顯色專(zhuān)屬型茚三酮是氨基酸專(zhuān)用顯色劑三氯化鐵－鐵氰化鉀是含酚羥基物質(zhì)的顯色劑溴甲酚綠是酸性化合物的顯色劑顯色劑類(lèi)型顯色方式浸漬法:適用于軟板直接噴霧法:適用于硬板2023/12/1958定性與定量分析定性比移值定量分析目視法斑點(diǎn)洗脫法薄層掃描法2023/12/1959薄層色譜法的優(yōu)缺點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)薄層色譜法簡(jiǎn)單、方便、及操作費(fèi)用低可以在一塊薄板上同時(shí)展開(kāi)多個(gè)試樣。采用方形薄層板還可以方便的進(jìn)行二維展開(kāi)，即按一般方法展開(kāi)后，改變方向和展開(kāi)劑再次展開(kāi)，進(jìn)一步改善分離效果。試樣一般不需要經(jīng)過(guò)預(yù)處理即可分離。缺點(diǎn)分離效率較低，不適用揮發(fā)性試樣分離。2023/12/1960（五）、應(yīng)用薄層色譜法在染料、農(nóng)藥、醫(yī)藥、有機(jī)