2019年新型冠狀病毒實時熒光定量RT-PCR檢測技術(shù)

2019年新型冠狀病毒

實時熒光定量RT-PCR檢測技術(shù)參考標(biāo)準(zhǔn)：2019年新型冠狀病毒實驗室檢測技術(shù)指南新型冠狀病毒實驗室生物安全指南標(biāo)本采集對象：2019年新型冠狀病毒感染疑似病例、疑似聚集性病例患者；其他需要進(jìn)行2019年新型冠狀病毒感染診斷或鑒別診斷者；其他需要進(jìn)一步篩查檢測的環(huán)境或生物材料（如溯源分析）。疑似病例：同時符合以下2條：流行病學(xué)史：發(fā)病前兩周內(nèi)有武漢旅行史，或武漢市相關(guān)市場，特別是農(nóng)貿(mào)市場直接或間接接觸史；鑒于有限的人傳人的證據(jù)：密切接觸者有以上流行病學(xué)史臨床表現(xiàn)：發(fā)熱；具有肺炎的影像學(xué)特征；發(fā)病早期白細(xì)胞總數(shù)降低或正常,或淋巴細(xì)胞計數(shù)減少；經(jīng)規(guī)范抗菌藥物治療3天(參照中華醫(yī)學(xué)會呼吸病學(xué)分會頒布的《中國成人社區(qū)獲得性肺炎診斷和治療指南（2016年版）》及國家衛(wèi)生健康委《兒童社區(qū)獲得性肺炎診療規(guī)范（2019年版）》)，病情無明顯改善或進(jìn)行性加重。標(biāo)本采集要求：（含有病毒保存液的采樣管）采集標(biāo)本種類和要求：血清標(biāo)本用真空采血管：急性期；恢復(fù)期深咳痰液、鼻咽抽取物、鼻咽拭子同時采樣樣本的包裝：樣本的包裝：分裝成三份：一份用于當(dāng)?shù)貙嶒炇覚z測；其余兩份上送省疾控流感實驗室。務(wù)必在凍存管上注明樣本編號、種類、患者姓名以及采樣日期（務(wù)必與送檢單上信息一致）。樣本的保存：上送樣本：各地市州核酸檢測陽性的樣本上送省疾控中心流感實驗室，進(jìn)行復(fù)核。實驗室生物安全：三級防護(hù)實驗室檢測靶標(biāo)：試劑盒選擇：國家疾控認(rèn)證的試劑盒：

選用針對新型冠狀病毒的ORF1a/b、E、N引物和探針上海輝睿公司（單通道）上海伯杰公司（雙通道）上海捷諾公司（雙通道/三通道）省疾控中心流感實驗室領(lǐng)取（1盒），后續(xù)由各個網(wǎng)絡(luò)實驗自行購買檢測試劑。需要注意的地方：務(wù)必做好個人防護(hù)：PPE、N95口罩、雙層手套、防護(hù)眼罩（有條件的實驗室可以使用負(fù)壓實驗室＋正壓通風(fēng)防護(hù)面罩）冠狀病毒對熱敏感（56℃30分鐘）、乙醚、75%乙醇、含氯消毒劑（現(xiàn)用現(xiàn)配）、過氧乙酸和氯仿均可有效滅活病毒。熟練掌握個人防護(hù)服的穿戴和脫摘順序，建議實驗之前準(zhǔn)備一份“個人防護(hù)操作規(guī)程”，必要時配備一名監(jiān)督員提醒每個順序。含氯消毒劑（泡騰片；注意效期）每次實驗時現(xiàn)用現(xiàn)配（浸泡廢棄槍頭）。生物安全柜和實驗核心區(qū)域準(zhǔn)備酒精棉球擦拭。實驗完畢用75%乙醇噴灑防護(hù)眼罩/面罩。每次實驗完畢立即對本次實驗產(chǎn)生的廢棄物，污染的手套，防護(hù)服等進(jìn)行高壓滅菌處理。盡量采集下呼吸道樣本：上呼吸道樣本檢出率很低；避免漏檢下呼吸道樣本咽拭子陰性結(jié)果：并不能排除病毒感染，需要再次重新采集病人下呼吸道樣本進(jìn)行核酸檢測（