曲馬多對心肌缺血大鼠丘腦束旁核部位5-h1a受體mrna表達的影響

曲馬多對心肌缺血大鼠丘腦束旁核部位5-h1a受體mrna表達的影響

在心肌缺血期間，心臟交動血清素質化機制會增加心臟交動血清素的輸入沖動，從而誘發(fā)心絞痛。但由心肌缺血引發(fā)的心絞痛(癥狀)和急性心肌梗死(損傷)的程度往往不相平行。丘腦束旁核(parafascicularnucleus,Pf)是內臟痛覺感受、調制和整合的重要中樞,Pf內含有豐富的5-HT能神經末梢及其受體。研究表明,5-HT1A受體在大鼠內臟痛模型中發(fā)揮著重要的作用,但目前對5-HT1A受體mRNA的研究多局限于外周炎癥后脊髓水平的表達,心肌缺血時Pf水平5-HT1A受體mRNA的表達尚無定論。本研究擬觀察曲馬多對急性心肌缺血大鼠Pf部位5-HT1A受體mRNA表達的影響。動物cao及pf區(qū)域組織切片鑒定動物與分組健康成年雄性SD大鼠24只(山西醫(yī)科大學實驗動物中心),體重260～280g,隨機分為4組(n=6):(1)對照組(C組),即非冠狀動脈(冠脈)扎閉組,開胸后冠脈左前降支下穿線,不結扎;(2)扎閉冠脈(CAO)組(CAO組),CA06h;(3)曲馬多+CAO組(TCAO組),靜脈注射曲馬多(批號346G,GrunenthalGmbH有限公司,德國)12.5mg*kg-115min后CA06h;(4)嗎啡+CAO組(MCAO組),靜脈注射嗎啡(批號040602G,沈陽第一制藥廠)1.25mg·kg-115min后CAO6h。動物模型的建立腹腔注射20%烏拉坦1.2g/kg麻醉后氣管切開,控制呼吸,呼吸頻率75次/min,潮氣量8ml/kg。在左胸骨旁第4、5肋間作1cm長切口,暴露心臟,剪開心包膜后用7-0無損傷縫線結扎冠脈左前降支(C組僅穿線不結扎),并計時。然后逐層關胸,行胸腔負壓引流后,解除人工通氣,動物恢復自主呼吸。建模成功標準:(1)CAO后肉眼可見明確的心肌缺血區(qū);(2)動物總出血量不超過1ml;(3)動物生命體征未出現(xiàn)劇烈波動。Pf位置標定將CAO后的大鼠固定丁ST-7腦脊柱立體定位儀(成茂株式會社,日本)上。依照文獻(以前囟為0點,距前囟向尾側4.0～4.2mm、距中縫旁開0.8～1.2mm、腦表面下5.5～6.5mm),鉆孔開顱顯露腦組織,用單腔玻璃微電極(尖端直徑0.5～1.0μm)由微推進儀從腦表面垂直刺入,到達Pf位置后,用微電泳儀(DP-301,WarnerInstrument公司,美國)以芝加哥藍陰極電流(10μA,20min)進行Pf位置標定。CA06h后處死動物(C組冠脈左前降支下穿線),取心臟和大腦做組織學檢查和鑒定。腦切片制備參照文獻方法操作,采用LeicaCM-1850恒冷箱切片機(Leica公司,德國)行15μm厚冠狀冰凍連續(xù)切片。原位雜交染色(漂浮法)。每組均設立試劑(陰性)對照。5-HT1A受體mRNA原位雜交檢測試劑盒、原位雜交專用蓋玻片、DAB顯色試劑盒均購自武漢博士德公司,焦碳酸二乙酯(DEPC)購自美國Sigma公司。采用BX51光學顯微鏡(Olympus公司,日本)高倍鏡(×400)下以IDA-2000數碼顯微圖像分析系統(tǒng)(中國科學院北京空?？萍及l(fā)展有限公司)對Pf5-HT1A受體mRNA染色陽性神經元(胞漿棕黃色顆粒)進行半定量分析。通過組織切片上的電極標記點及神經解剖結構確認Pf位置,隨機選取以標記點為中心的周圍六個視野,每張切片隨機分析包括標記點在內的七個視野。采用SPSS11.5統(tǒng)計軟件,計量資料以均數±標準差(±s)表示,組間比較采用單因素方差分析,P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。對5-ht1a受體的作用5-HT1A受體mRNA表達的比較C組Pf內有散在的陽性神經元,形態(tài)呈不規(guī)則型;CAO組Pf內陽性神經元增多,形態(tài)呈不規(guī)則型;TCAO組Pf中陽性神經元較CAO組明顯減少,胞漿著色較淺,細胞突起較少。MCAO組變化同TCAO組。5-HT1A受體mRNA陽性單位、陽性面積率、平均光度和積分光度表達的比較與CAO組比較,TCAO組和MCAO組上述指標的表達降低(P<0.05)。與C組比較,CAO組以上指標的表達升高(P<0.05),TCAO組和MCAO組差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表1。5-HT及其受體是與痛覺調制有密切關系的神經遞質-受體系統(tǒng)。腦內5-HT主要參與鎮(zhèn)痛作用,但不同類型5-HT受體在痛覺生理和病理生理中發(fā)揮作用不同。在腦內,5-HT1A受體廣泛地分布于與痛覺有關的區(qū)域。5-HT1A受體可分布在突觸前膜或突觸后膜,若分布在5-HT神經元胞體上,則稱為自身受體。5-HT1A自身受體在腦干的激活抑制5-HT神經元的電沖動,從而使5-HT神經遞質釋放減少;而分布在突觸后膜上的5-HT1A受體激動后除了調節(jié)5-HT的釋放外,還能引起去甲腎上腺素的釋放,從而發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用。本研究結果表明對照組Pf5-HT1A受體mRNA的表達處于一較低水平,CA06h后顯著增加。冠脈阻塞造成心肌缺血后,隨著心臟代謝功能的變化,各種痛敏介質和促炎物質通過多種途徑釋放出來,通過外周和中樞痛覺敏感化的機制,造成大量化學性傳入通路的激活,從而引起心絞痛的傳入沖動增加,通過丘腦Pf廣泛的神經纖維聯(lián)系,使其接受的傷害性刺激也增加,最終導致Pf部位5-HT1A受體mRNA的轉錄和合成增加、表達增多。劉保堅等認為,中樞5-HT1A受體激動后,通過抑制5-HT的釋放來調節(jié)交感和迷走神經的活動,使交感神經活性降低,心肌缺血傷害性刺激傳入沖動減少。雷亞娟等研究認為5-HT1A受體激動劑烏拉地爾對心肌缺血誘發(fā)Pf痛敏神經元的放電具有抑制作用,并被5-HT拮抗劑美西麥角所逆轉。本研究還觀察到曲馬多能夠抑制CAO誘導的5-HT1A受體mRNA表達增強。嗎啡具有類似曲馬多作用。曲馬多有微弱的μ-阿片受體激動劑活性,并能抑制神經遞質主要是5-HT和去甲腎上腺素的再攝取[O]。其(+)性對映體選擇性作用于μ-受體,而(-)性對映體則增加神經元外5-HT的濃度,并抑制神經元突觸對去甲腎上腺素的再攝取。這兩種對映