鹽酸二甲雙胍緩釋片中雙氰胺的測定

鹽酸二甲雙胍緩釋片中雙氰胺的測定

鹽酸二甲基丙烯酸酯是一種用于治療非胰島素依賴糖尿病的降血糖藥物。根據(jù)《中華人民共和國藥典》2000年版的第二部分，鹽酸二甲基丙烯酸酯的檢測采用了分層色譜法，限制為0.04%，但鹽酸二甲基甲酯片的“物質(zhì)檢驗”沒有雙氰胺檢驗。在2002年的《英國藥典》版中，鹽酸二甲基丙烯酸酯及其片劑中都有0.02%的雙氰胺試驗。作者在鹽酸二甲雙胍緩釋片的研究過程中,根據(jù)《英國藥典》2002年版鹽酸二甲雙胍片中“雙氰胺檢查”項下的條件,并結(jié)合我國的實際情況,改善了色譜條件,采用國產(chǎn)SCX柱檢查雙氰胺,制定了雙氰胺檢查的標(biāo)準(zhǔn)。鹽酸二甲雙胍和雙氰胺的結(jié)構(gòu)式見圖1。1精密ph計高效液相色譜儀(AutosamplerL—7200,UV—VISDetectorL—7420,PumpL—7110,日本HITACHI公司),精密pH計(上海雷磁儀器廠)。鹽酸二甲雙胍緩釋片(寧夏康亞藥業(yè)有限公司,批號20010221、20010222、20010223),鹽酸二甲雙胍對照品(寧夏康亞藥業(yè)有限公司,含量100.2%),磷酸二氫銨(分析純),磷酸(分析純),重蒸水(自制),雙氰胺(中國藥品生物制品檢定所)。2方法2.1鹽酸二甲雙醚緩釋片中鹽酸二甲雙醚類物質(zhì)的方法學(xué)研究參照《英國藥典》2002年版(BP2002)鹽酸二甲雙胍片“有關(guān)物質(zhì)檢查”項下的檢查方法,進行鹽酸二甲雙胍緩釋片中鹽酸二甲雙胍有關(guān)物質(zhì)的方法學(xué)研究?！吨腥A人民共和國藥典》2000年版鹽酸二甲雙胍“有關(guān)物質(zhì)檢查”項規(guī)定雙氰胺的限度為樣品的0.04%,故規(guī)定鹽酸二甲雙胍緩釋片中,雙氰胺的限度為樣品的0.04%。2.2檢測波長的確定參照《英國藥典》2002年版(BP2002)鹽酸二甲雙胍“雙氰胺檢查”項下的方法,同時通過試驗確定雙氰胺檢查的波長為218nm。2.3流動相、流速色譜柱:hypersilSCX柱(4.6mm×150mm,5μm,大連依利特);流動相:0.43mol·L-1磷酸二氫銨(pH2.5);流速:1.0mL·min-1;柱溫:40℃。2.4鹽酸二甲雙fig的聚合酶鏈反應(yīng)tr溶劑與輔料均在4min以前出峰,不對鹽酸二甲雙胍造成干擾。鹽酸二甲雙胍色譜峰與其他峰達到了完全分離。理論塔板數(shù)按圖2計算:n=5.54×(tR/W1/2)2=5.54×(20.53/0.67)2=5190。tR為鹽酸二甲雙胍的保留時間;W1/2為半峰高寬。A—Sample(1);B—Standardof1-cyanoguanidine;C—Sample(3)參照以上試驗結(jié)果,規(guī)定理論塔板數(shù)按鹽酸二甲雙胍計算不得低于2000。2.5l-1溶液取雙氰胺適量,以蒸餾水為溶劑,制成0.03、0.02、0.01mg·L-1的溶液,進樣20μL。測得各質(zhì)量濃度樣品的峰高與噪音(垂線峰高),計算得最低檢測質(zhì)量濃度80μg·L-1。2.6峰面積rsd的測定取雙氰胺適量,配成雙氰胺質(zhì)量濃度為1mg·L-1的溶液,進樣20μL,重復(fù)進樣6次,記錄峰面積,雙氰胺峰面積的RSD為0.8%。2.7溶液配制與測定精密稱取鹽酸二甲雙胍緩釋片細粉適量(約相當(dāng)于鹽酸二甲雙胍250mg),置100mL量瓶中,加適量無水乙醇分散,加流動相,超聲使溶解,并稀釋至刻度,搖勻,作為溶液(1);精密稱取10mg雙氰胺,置100mL量瓶中,用水溶解并稀釋至刻度,搖勻,再精密量取1mL,用流動相稀釋至100mL量瓶中,作為溶液(2);精密量取溶液(1)1mL至50mL量瓶中,用流動相稀釋至刻度,精密量取2.5mL至50mL量瓶中,用流動相稀釋至刻度,搖勻,作為溶液(3)。精密量取溶液(2)20μL,注入液相色譜儀,調(diào)節(jié)檢測靈敏度,使溶液(2)的峰高不少于滿量程的50%,再精密量取溶液(1)、(3)各20μL,注入液相色譜儀,記錄色譜圖,溶液(1)的色譜圖記錄至主成分峰保留時間的2倍,溶液(1)中雙氰胺的峰面積不超過溶液(2)的峰面積,在排除溶劑峰后,其他雜質(zhì)峰的面積之和不超過溶液(3)主成分峰的峰面積。各溶液色譜圖見圖2。3流動相scx-1a.對鹽酸二甲雙胍片3批樣品(批號20010221、20010222、20010223)進行檢查,結(jié)果溶液(1)中雙氰胺的含量小于溶液(2)中雙氰胺的量;其他雜質(zhì)總量小于0.1%。b.《英國藥典》2002年版(BP2002)采用PartisphereSCX柱、0.15mol·L-1磷酸二氫銨緩沖液(pH3.0)為流動相。作者采用國產(chǎn)HypersilSCX柱(大連依利特),流動相不變,鹽酸二甲雙胍的保留時間約為50min;作者將流動相0.15mol·L-1磷酸二氫銨緩沖液(pH3.0)改為