DB35-T 2132-2023 實(shí)驗(yàn)用秀麗隱桿線蟲 飼育技術(shù)

07.080CCS

4435 DB35/T

實(shí)驗(yàn)用秀麗隱桿線蟲飼育技術(shù)

Caenorhabditis

202

DB35/T

2023目次前言

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II

范圍

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術(shù)語和定義

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人員

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環(huán)境與設(shè)施

.........................................................................

引種與保種

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繁育

...............................................................................

飼養(yǎng)

...............................................................................

.....................................................................

10

廢棄物處理

........................................................................

11

記錄與檔案

........................................................................

儀器設(shè)備及耗材

......................................................

培養(yǎng)基及試劑

........................................................

.......................................

11

線蟲的生長周期

.....................................................

13

的培養(yǎng)

........................................................

14

..........................................

15參考文獻(xiàn)

.............................................................................

16DB35/T

2023前 言本文件按照GB/T

1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定DB35/T

2023實(shí)驗(yàn)用秀麗隱桿線蟲飼育技術(shù)

GB/T

GB

34791—2017

JG/T

秀麗隱桿線蟲 Caenorhabditis

elegansCaenorhabditis大腸埃希氏菌

OP50 Escherichia

coli

E.

coli

Caenorhabditis

Caenorhabditis

elegans

DB35/T

2023按照GB/T

布局

飼育區(qū)

DB35/T

2023

應(yīng)選取L1幼蟲期線蟲或耐受期線蟲進(jìn)行長期保種。

溫度低于﹣80

凍存液選用

緩沖液

B；

600～1

只線蟲，每支凍存管中分裝

mL；

凍存管梯度降溫完成后轉(zhuǎn)移至﹣80

凍存24

皿中觀察，復(fù)蘇后的線蟲存活率應(yīng)高于20％。

在﹣80

雄蟲DB35/T

2023

體中的比例為1‰～3‰。為獲取足夠的交配雄蟲，宜將L4幼蟲期線蟲中的雌雄同體線蟲置于30

℃條件

雄蟲和雌雄同體的比例按為

2∶1；

22

整體外觀符合線蟲的顯微形態(tài)學(xué)表型（附錄

L4

L4

線蟲以大腸埃希氏菌

OP50（以下簡稱

E。每1

cm

每1

cm

OP50-NGM

cm、

2

液體飼養(yǎng)應(yīng)用

s～5

生長溫度在

15

20

40％～80％；光照不超過

30

lx；DB35/T

2023蕩頻率為

100

r/min。

易感染的微生物和寄生蟲見附錄F。

產(chǎn)生的生物廢棄物和污水按照SN/T

4835的規(guī)定進(jìn)行無害化處理，其他實(shí)驗(yàn)室廢棄物按照相關(guān)規(guī)定

DB35/T

2023

搖床材質(zhì)無毒、無害、無放射性。配有溫度控制系統(tǒng)，能夠在10

℃溫度范圍內(nèi)調(diào)節(jié)箱內(nèi)溫

r/min～300

r/min。

高壓滅菌鍋材質(zhì)耐熱、耐腐蝕、無放射性，最高滅菌工作溫度不低于130

移液器

酒精燈

挑蟲器

﹣80

提供﹣80

液氮罐A.2

培養(yǎng)皿DB35/T

2023

多孔板

三角瓶無毒、無害、無放射性、耐腐蝕、無菌。常用規(guī)格有50

mL、150

mL、1

000

mL等。

提供每分鐘降低1

凍存管用于﹣80

DB35/T

2023

B.1

GB/T

B.2

LB

LB

g胰蛋白胨，0.5

g酵母粉，1

g氯化鈉（NaCl），加入雙蒸水定容至100

mL，121

C、0.107

滅菌20

min。

LB

MPa滅菌20

B.3

2.5

g酪蛋白胨，17

g瓊脂粉，3

NaCl，加入975

mL的雙蒸水，121

C、0.107

MPa滅菌20

min。冷卻至55

℃后，加入下列溶液（膽固醇溶液過濾除菌，其余溶液在121

C、0.107

MPa

滅菌20

min）。

mL

2

mL

4

24

2HPO4

B.4

M9

g磷酸氫二鈉（Na2HPO4），3

24

NaCl，0.25

g七水硫酸鎂（MgSO47H2O），加入雙蒸

滅菌20

B.5

B.5.1

S緩沖液1

mL

24，871

0.05

KH2PO4

MPa滅菌20

min。

700

mL

DB35/T

20235.85

NaCl，1

24，6

KH24，加入999

mL的雙蒸水，121

C、0.107

MPa滅菌20

min，再加入1

mL

1.86

二胺二鈉（EDTANa2，0.69

亞鐵（FeSO47H2，0.2

（MnCl22O），0.29

g七水硫酸鋅（ZnSO42O），0.025

42

000

MPa滅菌20

S-basal基礎(chǔ)培養(yǎng)液，10

mL

pH

6.0檸檬酸鉀溶液，10

mL微量金屬溶液，3

CaCl2

mL

4

MPa

DB35/T

2023

C.1

DB35/T

2023

DB35/T

2023

幼蟲：在22

℃的培養(yǎng)條件下，野生型秀麗隱桿線蟲產(chǎn)出的卵經(jīng)過大概9

h即孵化成L1。線蟲的幼蟲分為4個(gè)階段，分別為一齡、二齡、三齡及四齡幼蟲（L1，L2、L3、L4）。從L1發(fā)育至L4需經(jīng)歷三次蛻

DB35/T

2023

線蟲是以O(shè)P50為食，OP50具有尿嘧啶缺陷，在NGM培養(yǎng)皿上不可無限生長。LB液體培養(yǎng)基即能滿足

mL

于37

℃搖床過夜振蕩培養(yǎng)(220

℃保存4周。OP50的質(zhì)量控制：每批次擴(kuò)增的OP50均進(jìn)行一次質(zhì)量檢測。質(zhì)量符合如下要求：OP50菌落呈圓形，微生物

Bacillus

thuringiensis

Drechmeria

coniospora

Leucobacter

Verde

1

Leucobacter

Verde

2www.bPseudomonas

寄生蟲

Nematocida

parisii

Nematocida

displodere被感染的線蟲在顯微鏡下會(huì)呈現(xiàn)出特定的表型，能以此來判斷線蟲是否被感染。微生物種屬鑒定參照16S核糖

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2023