寧波沿海森林傘滑刃屬線蟲種類調查

寧波沿海森林傘滑刃屬線蟲種類調查

新余市是浙江省寧波市的一個綜合性國家。森林覆蓋率為44.6%，其中針葉林占樹木總積累量的87.9%。傘滑刃屬線蟲中松材線蟲(Bursaphelenchusxylophilus)是林業(yè)病害——松樹萎蔫病的病原物,致病力強,傳播速度快,發(fā)生后治理難度非常大。為了明確余姚市針葉林中傘滑刃屬線蟲種類及分布情況,為松材線蟲及潛在的其他線蟲危害防治提供理論依據(jù),2008年以來,筆者對余姚市所轄各街道、鄉(xiāng)鎮(zhèn)的松木中傘滑刃屬線蟲種類進行了調查,發(fā)現(xiàn)并鑒定了8種傘滑刃屬線蟲,其中程氏傘滑刃僅在臺灣的木質包裝中報道。1材料和方法1.1樣本來源主要采自余姚市所轄各街道、鄉(xiāng)鎮(zhèn)的針葉林區(qū),包括原木樹干和少量樹枝,共計218份。1.2線蟲分離液的制備采用改良漏斗法分離線蟲。將采來的木樣劈成小片置于漏斗中,加入適量水,在20～25℃下放置24h,用表面皿接取5～10ml線蟲分離液,鏡檢。1.3關于線條形態(tài)的觀察1.3.1臨時玻璃設在載玻片上滴一滴水,解剖鏡下用挑針將數(shù)條線蟲挑取至水滴中,在酒精燈火焰上來回移動幾次,至線蟲恰好被殺死后,加蓋玻片。1.3.2b型線蟲的形態(tài)觀察和照片拍攝臨時玻片制好后,即可用于形態(tài)觀察攝影。用LeicaBX51顯微鏡和數(shù)碼相機對線蟲的整體形態(tài)和內部特征進行觀察、攝影,主要包括線蟲整體、頭部、雌蟲陰門、尾部、雄蟲交合刺和交合傘等。用DeMan公式進行形態(tài)特征測計。1.3.3加固玻片用挑針挑取雄蟲至載玻片上的水滴中,水量要少,加蓋蓋玻片。在顯微鏡低倍鏡下用手輕輕推動蓋玻片,使雄蟲的尾部扭動,直至露出交合傘。2結果與分析2.1兩種傘滑實踐主要線蟲混生情況采自余姚市轄屬的各街道、鄉(xiāng)鎮(zhèn)的松木218份樣品中,初步鑒定了含松材線蟲在內的8種傘滑刃屬線蟲,包括松材線蟲、萊奴爾夫傘滑刃線蟲(B.rainulfi)、擬松材線蟲(B.mucronatus)、林傘滑刃線蟲(B.lini)、湖南傘滑刃線蟲(B.hunanensis)、泰國傘滑刃線蟲(B.thailandae)、中華傘滑刃線蟲(B.sinensis)和程氏傘滑刃線蟲(B.chengi)。調查中發(fā)現(xiàn)大多數(shù)樣品都為2種或2種以上線蟲混生,一些樣品甚至是2種或2種以上傘滑刃屬線蟲混生。發(fā)現(xiàn)頻率分別為松材線蟲192次,萊奴爾夫傘滑刃線蟲83次,擬松材線蟲51次,林傘滑刃線蟲40次,湖南傘滑刃線蟲30次,泰國傘滑刃線蟲5次,中華傘滑刃線蟲3次,程氏傘滑刃線蟲2次。2.2類型形態(tài)的識別特征2.2.1門蓋尾狀松材線蟲主要鑒定特征:雌蟲具有較長的陰門蓋,尾近圓筒形,末端寬圓或指狀,一般無尾尖突;雄蟲交合刺大,顯著彎成弓狀,喙突銳尖,交合刺遠端膨大成盤狀。2.2.2松材線蟲的形態(tài)擬松材線蟲與松材線蟲的區(qū)別主要在雌蟲尾部,擬松材線蟲尾圓錐形,尾尖突長,大于3μm。松材線蟲雌蟲尾端鈍圓,無尾尖突,或少數(shù)個體具有尾尖突,但不超過3μm。依據(jù)形態(tài)和基因序列等差異,擬松材線蟲還進一步分為東亞型和歐洲型2種,東亞型雌蟲尾端漸尖,而歐洲型雌蟲尾端則較鈍,具有尾尖突。調查發(fā)現(xiàn)的擬松材線蟲全部為東亞型。2.2.3陰浚門蓋結構雌蟲蟲體細長,熱殺死后略向腹面彎曲;側區(qū)有2條側線;縊縮明顯,口針長約12μm,基部略膨大,沒有基部球;陰門前唇向后延伸,形成小陰門蓋;尾長圓錐形,明顯向腹面彎曲,末端鈍圓。雄蟲蟲體前部與雌蟲相似,熱殺死后蟲體尾部彎成鉤狀;交合刺成對,背面拱形,腹面平直,長約3μm的喙突位于交合刺的中部;基頂突高,端部略向腹面彎曲;遠端盤狀突不顯著;尾強烈向腹面彎曲,爪狀,交合傘小,形態(tài)卵圓形、鏟形等多變。2.2.4雄蟲熱陰門藥物泰國傘滑刃線蟲鑒定特征比較明顯,雌蟲熱殺死后蟲體幾乎伸直,唇區(qū)高,縊縮,陰門無陰門蓋,陰唇明顯突出,尾部呈細長圓錐形,尾端尖。雄蟲熱殺死后尾部彎向腹面,呈“J”形,交合刺較小,喙突鈍圓,遠端沒有盤狀突;尾爪狀,交合傘很小,有時幾乎不可見。2.2.5陰門陰門雌蟲熱殺死后向腹面彎曲,體表有細環(huán)紋;側區(qū)有3條側線;唇區(qū)稍縊縮;口針長約20μm,錐部與稈部分界不明顯,口針基部不膨大;中食道球長卵圓形至近方形;陰門明顯骨化,略向后延長,但不形成陰門蓋;直腸和肛門幾乎不可見;尾圓錐形,細長,向腹面彎曲,末端鈍圓。雄蟲前部與雌蟲相似,熱殺死后尾部強烈彎向腹面,交合刺成對,較直,僅遠端略向腹面彎曲,基頂突較高,喙突位于交合刺中部,交合刺遠端圓,不具盤狀突,但末端略向背面彎曲呈鉤狀;尾乳突兩對,1對位于肛門前,另1對位于交合傘起始處。2.2.6成蟲的前壁和腹結構雌蟲熱殺死后略向腹面彎曲;唇區(qū)高,縊縮明顯;口針長約20μm,錐部約占桿部的1/2,基部不膨大,沒有基部球;中食道球長卵圓形,瓣膜清晰;陰門無陰門蓋;尾圓錐形,約為肛門處體寬的3倍,向腹面彎曲,末端鈍圓。雄蟲體前部與雌蟲相似,熱殺死后蟲體尾部彎成鉤狀;交合刺成對,喙突顯著,末端鈍圓,交合刺遠端鈍,沒有盤狀突;基頂半圓形;尾向腹面彎曲,尾端鈍圓,交合傘形態(tài)多變,卵圓形或平截形。2.2.7陰門陰門雌蟲蟲體細長,熱殺死后略向腹面彎曲;唇區(qū)高,縊縮顯著;口針細弱,長約14～15μm,無基部球,但基部略增厚;食道前體部圓柱形,中食道球發(fā)達,近圓形;陰門位于體后部,具小而明顯的陰門蓋;肛門和直腸明顯;尾圓錐形,尾端略向腹面彎曲,末端鈍圓或尖,有時末端有不規(guī)則的尾尖突。雄蟲體前部與雌蟲近似,熱殺死后身體末端強烈向腹面彎曲;交合刺成對,強壯,末端約1/3處強烈向腹面彎曲?；敻邎A,喙突指狀,末端鈍圓,交合刺末端有盤狀突。交合傘平截或銳尖,有時呈不規(guī)則形。尾乳突9個,肛前1個加1對、肛后1對很明顯,但位于交合傘起始處的2對很小,不清晰。2.2.8陰浚經(jīng)皮結構雌蟲蟲體較短,略向腹面彎曲,側區(qū)有2條側線;唇區(qū)高,縊縮明顯,口針錐部長度接近口針長的l/3,基部略膨大,無基部球;中食道球近圓形或卵圓形,瓣膜清晰;陰門前唇向后延伸,形成小陰門蓋;子宮與后陰子宮囊連接處(近陰道處)可見3個細胞形成的特殊結構;尾圓錐形,幾乎直或略向腹面彎曲,末端鈍圓或尖,有時有小尾尖突。雄蟲體前部與雌蟲相似,熱殺死后蟲體尾部彎成“J”形;交合刺成對,其腹面有明顯的膜狀結構,基頂幾乎呈方形,喙突不明顯;交合刺背面拱形,遠端明顯向腹面彎曲,盤狀突不明顯;尾明顯向腹面彎曲,末端鈍尖,交合傘小,形態(tài)多變。尾乳突7個,泄殖腔前1個加1對,近尾部1對,近交合傘起始處1對。3擬松材線蟲、萊奴爾夫傘線蟲發(fā)現(xiàn)頻率調查結果表明,幾乎所有的松木樣本中都攜帶有2種或2種以上的線蟲種類,包括滑刃屬線蟲、長尾科線蟲、外滑刃屬線蟲、墊刃目線蟲以及一些腐生類線蟲等,由于研究只針對傘滑刃屬線蟲,其他種類不作統(tǒng)計。在所調查樣品中,松材線蟲是優(yōu)勢種群,其次為萊奴爾夫傘滑刃線蟲,大于擬松材線蟲的發(fā)現(xiàn)頻率。調查中還發(fā)現(xiàn)松材線蟲與擬松材線蟲混生,松材線蟲與萊奴爾夫傘滑刃線蟲、湖南傘滑刃線蟲等其他傘滑刃屬線蟲混生,或擬松材線蟲與其他傘滑刃屬線蟲的混生的現(xiàn)象,對于其中的相互作用機理,各種線蟲之間有何影響,則有待于進一