皮膚性病科實驗室檢査技術(shù)操作規(guī)范2023版

皮膚性病科實驗室檢査技術(shù)操作規(guī)范第一節(jié)皮膚組織病理檢査 第二節(jié)皮膚免疫熒光檢査一、皮膚直接免疫熒光檢查二、皮膚間接免疫熒光檢查三、補體結(jié)合法第三節(jié)皮膚試驗一、斑貼試驗 二、劃破試驗三、皮內(nèi)試驗. 四、揮發(fā)性變應(yīng)原（空氣播散）試驗五、變應(yīng)原檢測體外試驗 第四節(jié)玻片壓診法第五節(jié)皮膚劃痕試驗 第六節(jié)皮膚紫外線最小紅斑量測定第七節(jié)濾過紫外線檢査第八節(jié)真菌檢査一、真菌直接鏡檢 二、真菌培養(yǎng) 第九節(jié)疥螨檢査 第十節(jié)蠕形螨檢查 第十一節(jié)陰虱檢査第十二節(jié)麻風(fēng)桿菌及麻風(fēng)相關(guān)檢査一、皮膚切刮涂片檢查二、組胺試驗 三、出汗試驗 四、立毛肌試驗 第十三節(jié)淋球菌檢査第十四節(jié)衣原體檢査第十五節(jié)解脲脲原體檢査第十六節(jié)梅毒螺旋體檢査一、梅毒螺旋體檢查 二、梅毒血清學(xué)檢查 第十七節(jié)醋酸白（甲苯胺藍）試驗 第十八節(jié)卟啉檢査第十九節(jié)紅斑狼瘡細胞檢査

第一節(jié)皮膚組織病理檢查皮膚組織病理學(xué)改變有時可以協(xié)助臨床確定診斷。由于皮膚位于體表，活檢操作較為簡單，皮膚組織病理學(xué)檢査可作為輔助診斷的重要手段。然而，有時組織學(xué)改變呈非特異性，為明確診斷必須反復(fù)活檢進行病理學(xué)檢査。【適應(yīng)證】按皮膚病理診斷的價值依次為：1.皮膚腫瘤、癌前期病變、病毒性皮膚病、角化性及萎縮性皮膚病、紅斑鱗屑性皮膚病等有高度診斷價值。2.大皰性皮膚病、肉芽腫性皮膚病、代謝性皮膚病、結(jié)締組織病、血管性皮膚病、色素障礙性皮膚病、遺傳性皮膚病、黏膜疾病等有診斷價值。3.某些深部真菌病、皮膚黑熱病、豬囊尾蚴?。蚁x?。┑雀腥拘云つw病可找到病原體?！窘勺C】嚴(yán)重瘢痕體質(zhì)者（尤其是特殊部位）應(yīng)慎重，需要征求患者同意?！静僮鞣椒俺绦颉?.活檢取材方法。(1)常規(guī)消毒。(2)局部麻醉。(3用手術(shù)方法或鉆孔器取材①刀切法：用手術(shù)刀可取較大較深組織，適用于各種皮膚病變，尤其是結(jié)節(jié)、腫瘤等。②鉆孔法：較方便，但應(yīng)用受一定限制。適用〒較小損害，或病變局限于表淺處，或手術(shù)切除有困難者。③削除法：用刀削除病變組織，適用于表淺增生組織，如疣狀物等。2.將所取組織按常規(guī)固定、脫水、包埋、制片。必要時做組織化學(xué)、免疫組織化學(xué)及電鏡等檢査?！咀⒁馐马棥?.皮損選擇一般選擇充分發(fā)育的典型皮損，須取原發(fā)病變。水瘡、膿皰宜取早期皮損。有多種病變同時存在時，應(yīng)分別取材。必要時從皮損邊緣取材，一半病損皮膚，一半正常皮膚，以便對比觀察、如考慮腫瘤和結(jié)節(jié)性皮膚病，取材應(yīng)盡量包括皮下脂肪組織。2.麻醉盡可能在病變周圍進行，避免在擬取皮損內(nèi)直接注入麻醉藥。3.取材取材要根據(jù)實際情況，寬、長足夠，應(yīng)包括表皮、真皮及皮下組織。皮下結(jié)節(jié)須包括皮膚及皮下組織。較小皮損沿其邊緣全部取下即可；較大斑塊、環(huán)狀皮損應(yīng)取活動性邊緣；潰瘍性病變應(yīng)取活動性邊緣。色素痣切口應(yīng)稍寬，切口至皮損邊緣的距離根據(jù)部位不同而定，最好在0.5cm以上。要防止水皰、膿皰破損。活檢組織應(yīng)避免擠壓。4.固定一般用4%甲醛溶液(10%福爾馬林溶液)立即固定。固定液與組織體積之比為5：1。5.術(shù)后處理術(shù)后用無菌敷料包扎，保持創(chuàng)口清潔，選擇適當(dāng)時機拆線。第二節(jié) 皮膚免疫熒光檢查該項檢査技術(shù)是根據(jù)抗原與抗體的結(jié)合反應(yīng)具有高度特異性的特點，采用熒光染料（目前應(yīng)用較普遍的是異硫氰酸熒光素，其異硫瓴基在水溶液中與免疫球蛋白的自由氨基經(jīng)碳酰胺化而形成硫碳氨基鍵，成為標(biāo)記的免疫球蛋白，即熒光素標(biāo)記抗體）標(biāo)記的已知抗原或抗體，通過熒光光源檢査，以發(fā)現(xiàn)未知的抗體或抗原。免疫熒光檢査實際上是血清學(xué)方法與顯微示蹤技術(shù)相結(jié)合。根據(jù)抗原抗體反應(yīng)的不同，分述如下免疫熒光檢査方法。一、皮膚直接免疫熒光檢查【適應(yīng)證】1.非感染性大疤性皮膚病如各型天皰瘡、類天皰瘡、皰疹樣皮炎、線狀I(lǐng)gA大皰性皮膚病、獲得性大皰性表皮松解癥等。2.結(jié)締組織病如紅斑狼瘡等。3.各種血管炎4.某些感染性皮膚病5.皮膚腫瘤等【禁忌證】同本章第一節(jié)“皮膚組織病理檢査”。【操作方法及程序】1.從患者受累或可能受累的皮膚組織黏膜組織處切取活檢標(biāo)本，做冷凍切片，或石蠟切片（特殊方法）。2.將一定濃度的熒光素標(biāo)記特異性抗體與組織抗原共同孵育，設(shè)定適宜的孵育溫度和時間，使組織抗原與抗體充分結(jié)合。3.在熒光顯微鏡下觀察，如發(fā)現(xiàn)反應(yīng)部位顯示相應(yīng)熒光，即為陽性反應(yīng)，根據(jù)熒光分布和形態(tài)確定抗原部位和性質(zhì)?！酒つw直接免疫熒光檢査的基本改變】1.基底膜熒光（1）系統(tǒng)性紅斑狼瘡、盤狀紅斑狼瘡、亞急性皮膚型紅斑狼瘡：基底膜帶呈線狀、顆粒狀或團塊狀熒光。(2)皰疹樣皮炎：真皮乳頭內(nèi)基底膜帶顆粒狀I(lǐng)gA沉積。(3)類天皰瘡、獲得性大皰性表皮松解癥：線狀I(lǐng)gG及C3沉積。(4)線狀I(lǐng)gA大皰性皮膚?。夯啄Ь€狀I(lǐng)gA沉積。(5)扁平苔蘚：真皮乳頭層內(nèi)彌漫性或灶性、球狀I(lǐng)gM和C3沉積。2.表皮細胞間熒光尋常型、紅斑型、落葉型、增殖型天皰瘡及皰疹樣天皰瘡等，可見表皮細胞間IgG沉積。3.血管壁熒光 多種血管性皮膚病，如白細胞碎裂性血管炎、結(jié)節(jié)性多動脈炎等顯示管壁及管周熒光?！咀⒁馐马棥?.原則上，每次實驗應(yīng)該設(shè)有陽性和陰性對照。2.取材部位：在水皰性皮膚病中，應(yīng)盡量取最早期水皰損害，保持皰的完整性，或取初發(fā)的紅斑性損害；在紅斑狼瘡中，取充分發(fā)展的皮損處組織；系統(tǒng)性紅斑狼瘡，亦可取未受累或避光處的皮膚組織，如果為陽性則更有診斷和鑒別診斷價值。3.標(biāo)本應(yīng)及時檢查，并且應(yīng)避光保存，否則熒光會淬滅。二、皮膚間接免疫熒光檢査用以檢測患者血清中的某種特異抗體或自身抗體。反應(yīng)中有兩對抗原抗體相繼發(fā)生結(jié)合反應(yīng)，第一抗體與抗原是相對應(yīng)的特異結(jié)合，而第二抗體(即熒光素標(biāo)記抗體)則是針對第一抗體的抗抗體?！具m應(yīng)證】1.血清中各種抗微生物抗體的測定，可用于感染性疾病的病原學(xué)診斷，如梅毒螺旋體、支原體、衣原體、立克次體、皰疹病毒等。2.血清中各種自身抗體的測定，可用于結(jié)締組織病、大庖性皮膚病和其他自身免疫病的診斷。(1)系統(tǒng)性紅斑狼瘡、皮肌炎、硬皮病、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、混合結(jié)締組織病、干燥綜合征等：有不同類型的抗核抗體。(2)大皰性皮膚病：如抗天皰瘡抗體等。(3)糖尿病：抗胰島細胞抗體等?！窘勺C】無特殊禁忌?！静僮鞣椒俺绦颉?.抽取患者血液，分離出血清。2.將該血清與含有相關(guān)抗原的標(biāo)本共同孵育，使第一抗體與抗原相結(jié)合。3.加入熒光素標(biāo)記的第二抗體與抗自身抗體或抗病原體抗體結(jié)合，共同孵育。4.在熒光顯微鏡下觀察標(biāo)本，如果出現(xiàn)熒光反應(yīng)即為陽性?！咀⒁馐马棥?.血清中抗體、第二抗體和抗原的濃度之比應(yīng)適宜，必要時予以適當(dāng)稀釋。若采用組織抗原標(biāo)本，則應(yīng)盡可能暴露該抗原。2.余同直接免疫熒光檢査。三、補體結(jié)合法在間接法的基礎(chǔ)上發(fā)展而成，即在抗原抗體反應(yīng)時加入補體，再用熒光素標(biāo)記的抗補體抗體進行示蹤。檢査妊娠性皰疹患者的自身抗體時，須采用此法。第三節(jié)皮膚試驗皮膚變應(yīng)原檢測是通過皮膚反應(yīng)來確定過敏性疾病患者的致敏物質(zhì)，有助于指導(dǎo)患者預(yù)防和治療過敏性疾病，特別是對明確職業(yè)性皮膚病的致病原因具有重要意義。常用的變應(yīng)原檢測方法包括：斑貼試驗、劃破試驗、皮內(nèi)試驗和變應(yīng)原檢測體外試驗等。一、斑貼試驗斑貼試驗（patchtest）用于測定遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)?！具m應(yīng)證】1.接觸性皮炎。2.職業(yè)性皮膚病。3.化妝品皮炎。4.濕疹等?！窘勺C】1.皮炎急性期。2.孕婦?！静僮鞣椒俺绦颉?.受試部位一般取上背部脊柱兩側(cè)的正常皮膚。若皮脂過多，可用75%乙醇輕輕擦拭，然后用生理鹽水清洗待干。2.去除斑試器的保護紙，將變應(yīng)原按順序置于惰性聚乙烯塑料或鋁制斑試器內(nèi)。排列順序為自上至下，自左至右，并做標(biāo)記。3.將加有變應(yīng)原的斑試器膠帶自上至下貼敷在受試部位，并用手掌輕壓，以排除空氣。4.觀察結(jié)果。于48h去除斑試器，待30mm后觀察結(jié)果，貼敷后72h再次觀察結(jié)果，必要時于貼敷后1周進行第3次觀察?！窘Y(jié)果判定】1.(—) 陰性（無反應(yīng)） 2.（士〉 可疑陽性 （僅有輕度紅斑）3.(+） 弱陽性 （紅斑、浸潤、可有少量丘疹）4.(++) 中陽性 （紅斑、浸潤、丘疹、水皰）5.(+++)強陽性 （紅斑、浸潤、丘疹、大皰）【注意事項】 1.須囑受試者，如發(fā)生強烈剌激反應(yīng)，應(yīng)及時去除斑試器。2.受試前2周和受試期間不要內(nèi)服皮質(zhì)類固醇，受試前3d和受試期間應(yīng)停用抗組胺類藥物。3.受試期間不宜洗澡、飲酒，避免搔抓斑試部位，盡量減少出汗，減少日光照射。4.應(yīng)保持斑試器在皮膚上48h，盡量不要過早去除斑試器。受試部位要有標(biāo)記。貼敷牢固、緊密，避免出現(xiàn)假陰性。5.應(yīng)對患者的實際接觸致敏物進行斑貼試驗。6.如果在貼敷后72h至貼敷后1周內(nèi)斑試部位出現(xiàn)紅斑、瘙癢等情況，應(yīng)及時來醫(yī)院檢査。7.注意區(qū)分變態(tài)反應(yīng)與刺激反應(yīng)，排除假陽性和假陰性。二、劃破試驗劃破試驗(scratchtest)用于測試速發(fā)型變態(tài)反應(yīng)?！具m應(yīng)證】1.各型蕁麻疹2.特應(yīng)性皮炎3.藥疹4.過敏性鼻炎5.哮喘等【禁忌證】1.高敏體質(zhì)者2.有過敏性休克史者【操作方法及程序】1.一般選擇前臂屈側(cè)為受試部位，局部清潔消毒。2.用消毒的種痘刀或針尖，輕輕劃數(shù)條長0.3-0.5cm的劃痕，兩個受試部位間要有4-5cm距離，深度以無明顯出血為宜。3.在劃痕上滴生理鹽水1滴，然后將受試物涂于劃痕上，混合均勻，留一劃痕僅滴生理鹽水，作陰性對照。4.20min后，用消毒蒸餾水洗凈劃痕上受試物，觀察反應(yīng)變化?！窘Y(jié)果判定】1.(—) 陰性 （無變化，與陰性對照一致）2.（士） 可疑陽性 （紅斑或風(fēng)團直徑＜5rmn，與陰性對照稍有差別）3.(+) 弱陽性 （紅斑或風(fēng)團直徑=5mm，與陰性對照有明顯差別）4.(++) 陽性 （紅斑或風(fēng)團直徑5?10mm，并有明顯紅暈）5.(+++) 強陽性 （紅斑或風(fēng)團直徑＞10mm，有明顯紅暈及偽足）【注意事項】1.必須先測定受試者皮膚有無皮膚劃痕癥。2.所用的受試物應(yīng)清潔、無刺激性。3.結(jié)果為陰性時，應(yīng)繼續(xù)觀察3?4d。必要時，3?4周后重復(fù)試驗。4.應(yīng)排除由原發(fā)性刺激引起的假陽性反應(yīng)。5.應(yīng)準(zhǔn)備腎上腺素注射液，搶救可能發(fā)生的過敏性休克。6.受試前2d應(yīng)停用抗組胺類藥物。三、皮內(nèi)試驗皮內(nèi)試驗（intracutaneoustest）主要用于測試速發(fā)型變態(tài)反應(yīng)。原理同劃破試驗，反應(yīng)結(jié)果較劃破試驗陽性率高，較準(zhǔn)確，但偶可發(fā)生過敏性休克?！具m應(yīng)證】1.各型蕁麻疹。2.特應(yīng)性皮炎。3.藥疹。4.過敏性鼻炎、哮喘等?！窘勺C】1.高敏體質(zhì)者。2.有過敏性休克史者。3.5歲以下兒童?！静僮鞣椒安襟E】1.一般選擇前臂屈側(cè)為受試部位，局部清潔消毒。2.將欲試抗原以無菌生理鹽水適當(dāng)稀釋，以皮試注射器分別吸取0.1ml，注射于受試部位皮內(nèi)。同時注射多種抗原時，應(yīng)在注射部位做標(biāo)記。3.另取一注射器吸取0.1ml無菌生理鹽水，注射于對側(cè)前臂屈側(cè)相應(yīng)注射部位，或同臂原注射部位的下方4?5cm處，作為陰性對照。4.注射后20-30min觀察速發(fā)型反應(yīng)24?48h后觀察遲發(fā)型反應(yīng)，必要時連續(xù)觀察1周?！窘Y(jié)果判定】1.速發(fā)型反應(yīng)注射后20?30min，局部出現(xiàn)直徑1?1.5cm的紅斑或風(fēng)團為陽性。2.遲發(fā)型反應(yīng)注射后開始出現(xiàn)紅斑或鳳團，至24h達最高峰，或24?48h或更長時間后開始出現(xiàn)此種反應(yīng)。麻風(fēng)菌素的遲發(fā)反應(yīng)可達21d。3.陰性反應(yīng)局部無變化，與陰性對照一致?！咀⒁馐马棥?.若出現(xiàn)過敏性休克，應(yīng)立即皮下注射0.1%腎上腺素0.5ml立即吸氧，靜滴皮質(zhì)類固醇，并根據(jù)情況采取其他急救措施。2.陰性對照處應(yīng)無變化，否則應(yīng)重做。若結(jié)果為陰性而有可疑者，可增加欲試抗原濃度，重復(fù)試驗。3.觀察結(jié)果時，應(yīng)注意假陽性及假陰性反應(yīng)。四、揮發(fā)性變應(yīng)原（空氣播散）試驗用于檢測揮發(fā)性變應(yīng)原?！具m應(yīng)證】漆性皮炎等【操作方法及步驟】1.將受試物質(zhì)的原液或稀釋于不同濃度揮發(fā)性溶媒中的稀釋液，盛于小瓶或試管中。2.試驗時用管口或瓶口接觸受試者皮膚，以膠布固定。3.經(jīng)過10?20min去除小瓶或試管，觀察結(jié)果?！窘Y(jié)果判定】1.陽性反應(yīng)受試處皮膚有紅腫現(xiàn)象。2.陰性反應(yīng)受試處皮膚無明顯變化?！咀⒁馐马棥?.避免受試液沾染皮膚。2.觀察結(jié)果時，應(yīng)注意假陽性及假陰性反應(yīng)。3.應(yīng)注意由原發(fā)性刺激引起的假陽性反應(yīng)。五、變應(yīng)原檢測體外試驗于體外對人血清或血漿中的變應(yīng)原特異性IgE抗體進行定性檢測，較上述在體試驗安全、痛苦小、特異性高、操作簡便?？赏ㄟ^放射性免疫吸附法、酶免疫分析法和金標(biāo)法檢測受試者血液中的特異性IgE抗體。【適應(yīng)證】1.各型蕁麻疹。2.特應(yīng)性皮炎。3.藥疹。4.過敏性鼻炎。5.哮喘等?！静僮鞣椒安襟E】1.標(biāo)本的收集和預(yù)處理取靜脈血，分離血清或血漿。2.嚴(yán)格按照所選用試劑盒說明書的步驟進行加樣、反應(yīng)和顯色。3.根據(jù)顯色的速度和強度觀察結(jié)果?！窘Y(jié)果判定】顏色從淺到深的變化速度與顏色的深度和患者血清標(biāo)本中IgE抗體或免疫球蛋白的滴度成比例。1.強變態(tài)反應(yīng)在5min內(nèi)很快出現(xiàn)較深的顏色。2.弱變態(tài)反應(yīng)出現(xiàn)顏色變化的時間＞5min。3.陰性反應(yīng)顏色同陰性對照?！咀⒁馐马棥?.不能使用大量溶血和嚴(yán)重高血脂的血液標(biāo)木。避免標(biāo)本中有顆粒性物質(zhì)。2.不能憑任何單個實驗結(jié)果作出最終臨床診斷，只有臨床醫(yī)師在所有的臨床特征和實驗結(jié)果的基礎(chǔ)上才能作出最后的診斷。3.患者攝人膽固醇后可影響血清抗體的測定水平。4.寄生蟲病患者可產(chǎn)生IgE抗體，使血清中的滴度升高，出現(xiàn)假陽性。5.本試驗為篩選試驗，陰性結(jié)果并不能排除受試者對其他變應(yīng)原的敏感性。第四節(jié)玻片壓診法【適應(yīng)證】1.區(qū)別毛細血管擴張、炎性紅斑、血管瘤與皮下出血。尋常狼瘡。3.區(qū)別色素脫失斑與貧血痣。【禁忌證】無特殊禁忌。【操作方法及程序】1.將玻片用力壓在皮疹上10?20s。2.觀察受壓皮疹。(1)毛細血管擴張、炎性紅斑或血管瘤壓診后消失，而皮下出血不變。(2)尋常狼瘡結(jié)節(jié)壓診后呈蘋果醬顏色。(3)貧血痣壓診后白斑消失，而色素脫失斑不變。第五節(jié)皮膚劃痕試驗【適應(yīng)證】1.蕁麻疹。2.皮膚劃痕癥。3.癢疹等?！窘勺C】無特殊禁忌?！静僮鞣椒俺绦颉?.用鈍器用力劃過皮膚。2.觀察劃過處皮膚反應(yīng)，出現(xiàn)三聯(lián)反應(yīng)者為陽性。(1)第一反應(yīng)i劃后15s，劃過處產(chǎn)生紅色線條。(2)第二反應(yīng)：劃后30s，紅色線條兩側(cè)發(fā)生紅斑。(3)第三反應(yīng)：劃后1?3min，劃過處發(fā)生隆起，蒼白色的條狀風(fēng)團。第六節(jié)皮膚紫外線最小紅斑量測定最小紅斑量(minimalerythemaldose，MED)測定指能產(chǎn)生肉眼所見最弱紅斑所需要的紫外線照射時間或劑量，它有助于了解皮膚對所接受的紫外線的敏感程度。【適應(yīng)證】1.對紫外線敏感的皮膚病患者，如光敏性皮炎、多形性日光疹、慢性光化性皮炎等。2.了解皮膚對日光照曬的耐受程度，以選用合適的防曬護膚制劑，測定閂光保護指數(shù)(SPF)值。【禁忌證】不合作或不能進行者?！静僮鞣椒俺绦颉?.光砰高壓汞燈、金屬鹵素?zé)艉蜔晒鉄艄軣?。發(fā)射光源應(yīng)以中波紫外線(290?320nm)為主峰，功率500W。2.照射部位應(yīng)在非曝光區(qū)域皮膚照射，如背部、前胸或前臂屈側(cè)，事先準(zhǔn)備好一塊具有6個長方形小孔格的布，孔格約0.8cmX1.5cm，間距約0.8cm。3.照射方法燈源垂直于實驗區(qū)皮膚，相距約25cm，把具有6個小孔格的布平整鋪在照射部位皮膚上并固定好，按階梯式遞增的時間或劑量照射各孔，照射最短時間一般為15s。4.結(jié)果判斷照射后24h在充足的自然光線下觀察，以肉眼所見與孔格一致、輪廓清楚、色澤均勻的最弱紅斑所需的照射時間或劑量為最小紅斑量?！咀⒁馐马棥?.最小紅斑量隨個體差異、皮膚色澤、照射部位、試驗季節(jié)及光源的光譜和強度等不同有較多差異，臨床上應(yīng)以正常人數(shù)據(jù)為對照。2.對紫外線敏感的程度差異較大，異常敏感者照射時間較長皮膚上會出現(xiàn)紅腫，甚至水皰，或可遺留色素沉著，經(jīng)處理后會逐漸恢復(fù)正常。第七節(jié)濾過紫外線檢查【適應(yīng)證】1.頭癬。2.花斑癬。3.細菌性皮膚病如紅癬等。4.色素性皮膚病。5.卟啉類物質(zhì)的檢査等。【禁忌證】無特殊禁忌。【操作方法及程序】1.在紫外線燈上裝上一種含氧化鎳的紫色石英玻璃，獲得320^400nm的長波紫外線。2.在暗室中用這種光線照射某些皮膚病患者的頭發(fā)、皮損等處，可以產(chǎn)生特殊的熒光，有助于這些皮膚病的診斷和治療?！窘Y(jié)果判定】1.頭癬的診斷與療效觀察黃癬呈暗綠色熒光，白癬呈亮綠色熒光，黑點癬無熒光。治療后病發(fā)熒光消失。某些無癥狀頭癬患者可出現(xiàn)陽性熒光反應(yīng)。2.花斑癬的診斷呈黃棕色熒光。3.細菌性皮膚病的診斷紅癬呈珊瑚紅色熒光；腋毛癬呈暗綠色熒光。4.色素性皮膚病的診斷白癱風(fēng)邊界清楚，可與其他色素減退斑相區(qū)別。5.卟啉類物質(zhì)的檢查卟啉類物質(zhì)可呈淡紅色、紅色或橙紅色熒光?！咀⒁馐马棥?.避免用該燈照射患者眼部。2.頭癬患者檢查前3d最好停用外用藥，以免誤診。第八節(jié)真菌檢查一、真菌直接鏡檢是一種方便、準(zhǔn)確診斷真菌病的檢測方法。此法簡便易行，陽性可明確真菌是否存在，結(jié)合臨床表現(xiàn)可確診皮膚真菌病，但一般不能確定致病菌種類，而且陰性不能完全排除真菌病診斷?！具m應(yīng)證】各種淺部、深部真菌病。【禁忌證】無特殊禁忌。【操作方法及程序】1.用鈍刀刮取皮損邊緣部的皮屑，或用小刀刮取變色松脆的甲屑，用拔毛鑷拔取病發(fā)，置載玻片上，加1滴10%的KOH溶液，蓋上蓋玻片后在酒精燈上微微加熱，待櫬本溶解，輕輕加壓蓋玻片使標(biāo)本透明，然后在顯微鏡下觀察。2.檢査時應(yīng)遮去強光，先在低倍鏡下觀察有無真菌菌絲和孢子，然后用高倍鏡觀察孢子和菌絲的形態(tài)、特征、位置、大小和排列等。3.典型真菌鏡檢所見(1)花斑癬：短粗、兩頭鈍圓、稍彎曲的菌絲，成堆的圓形或卵圓形厚壁孢子，有時有芽胞。(2)頭癬①黃癬：黃癬痂，發(fā)內(nèi)孢子、鹿角狀菌絲，可見氣溝、氣泡。②白癬：斷發(fā)外菌鞘由鑲嵌或成堆圓形孢子組成。③黑癬：發(fā)內(nèi)鏈狀孢子。(3)體股癬、手足癬：分支分隔的長菌絲。(4)甲癬：分支分隔的長菌絲，常斷裂為關(guān)節(jié)孢子樣。(5)念珠菌病，假菌絲、圓形或橢圓形芽胞。(6)隱球菌病：圓形或橢圓形雙壁孢子，外圍有一層透光莢膜，在黑色背景下極為明亮。(7)著色芽生菌?。鹤厣珗A形厚壁分隔孢子。(8)暗色絲孢霉病，棕色分支分隔菌絲或酵母樣細胞。(9)鏈狀芽生菌?。烘湢畛鲅挎咦印?10)毛霉?。簩挻缶z，不分隔?！咀⒁馐马棥?.取材應(yīng)在損害活動區(qū)，如環(huán)形損害的邊緣、水庖頂部，量要充足。2.體液標(biāo)本應(yīng)離心后取沉渣鏡檢。有條件者應(yīng)同時進行真菌培養(yǎng)。3.取材前皮損部位應(yīng)盡量避免涂藥。二、真菌培養(yǎng)目的是進一步提高病原體檢出的陽性率，同時確定致病菌的種類，一旦發(fā)現(xiàn)肯定的致病菌如紅色毛癬菌或新型隱球菌時，診斷即可確立。但如果分離出條件致病菌如白色念珠菌或煙曲霉時，應(yīng)結(jié)合臨龐進行判斷。從無菌部位如血液或腦脊液中分離出條件致病菌常提示肯定的感染，但對來自于膿、痰或尿的標(biāo)本則應(yīng)謹(jǐn)慎解釋結(jié)果，單靠一次培養(yǎng)陽性往往不能確定診斷、有時還須結(jié)合直接鏡檢的結(jié)果，因此強調(diào)直接鏡檢與培養(yǎng)檢査相結(jié)合的重要性。【適應(yīng)證】1.疑似真菌感染的標(biāo)本。2.進一步確定感染真菌種類。【禁忌證】無特殊禁忌?！静僮鞣椒俺绦颉?.在無菌操作下，將標(biāo)本接種于沙氏葡萄糖瓊脂(SDA)，置25?27攝氏度溫箱內(nèi)培養(yǎng)4?6周。2.如懷疑有深部真菌，應(yīng)同時在35?37攝氏度培養(yǎng)。3.菌落出現(xiàn)后，應(yīng)定期觀察其生長情況。4.常規(guī)分離鑒定使用的培養(yǎng)基為SDA斜面培養(yǎng)基，加0.005%氯霉素，對皮膚癬菌，還應(yīng)添加0.05%放線菌酮。5.對分離到的真菌，應(yīng)結(jié)合菌落和顯微鏡下形態(tài)學(xué)特點將其鑒定到種。真菌常用形態(tài)學(xué)鑒定，而酵母常以形態(tài)學(xué)和生理生化學(xué)方法結(jié)合進行鑒定。6.常見真菌培養(yǎng)所見：(1)念珠菌?。耗逃蜕湍笜泳?2)隱球菌病：乳白色酵母樣菌落，而后為淺橘黃色，質(zhì)地呈黏液狀。(3)孢子絲菌病：棕色至棕黑色菌落。(4)曲霉?。狐S綠色毛狀菌落。(5)芽生菌病：真菌相為白色棉花樣菌落，酵母相為奶油色或棕色菌落。(6)暗色絲孢霉病：棕黑色菌落。(7)諾卡菌病：橘黃色或紅色菌落，有泥土氣味?！咀⒁馐马棥?.應(yīng)與直接鏡檢結(jié)果綜合進行判斷。2.嚴(yán)格無菌操作，避免污染。3.提倡多管(點)、多次培養(yǎng)，確保結(jié)果可信性。第九節(jié)疥螨檢查【適應(yīng)證】疥瘡?！窘勺C】無特殊禁忌?！静僮鞣椒俺绦颉?.隧道墨汁試驗以藍墨水滴在可疑有隧道處，用棉簽輕揉30s?1min，再用酒精棉球擦去表面墨跡，觀察是否有藍墨水滲人隧道的藍色痕跡，間接證明疥螨的存在。2.針挑法此法常用。選取疥瘡疹或隧道末端(盲端)，用6號注射針頭，針口斜面向上，從其側(cè)旁刺入，并從底部繞過蟲體，將針口稍加轉(zhuǎn)動，疥蟲可落入針口內(nèi)，之后輕輕挑破皮膚，出針檢査疥蟲。3.皮膚刮片法適用于新鮮的炎性丘疹。先在皮損上放置少量液狀石蠟(石蠟油，也可在消毒的手術(shù)刀片上沾少許液狀石蠟)，用消毒手術(shù)刀片在丘疹上平刮6?7下，刮取丘疹頂部的角層部分，直至有細小出血點為度，將刮取物移至載玻片上，顯微鏡下可見疥蟲、蟲卵或蟲屎。【結(jié)果判定】1.在良好的光線下，活疥蟲用肉眼僅可見針頭大小的灰白色小點，能活動。2.將疥蟲移至有油的載玻片上，低倍顯微鏡下即可見疥蟲。3.如蟲體被挑破，可見其中一部分。有時見橢圓形蟲卵或蟲屎?！咀⒁馐马棥?..査見疥蟲是診斷疥瘡的有力證據(jù)，査見蟲卵或蟲屎也可作出診斷。一些時間較長的、繼發(fā)感染的或者濕疹化的疥瘡査不到疥蟲，根據(jù)傳播和流行情況、接觸史、典型的臨床癥狀也可作出疥瘡診斷。2.檢査時應(yīng)注意選擇完整的未經(jīng)搔抓的早期新鮮的丘皰疹或隧道(末端)，陽性率較高。反復(fù)搔抓、擠壓、感染、腫脹、濕疹化等均可破壞蟲體，影響檢查結(jié)果。3.陰性也不能完全排除疥瘡的診斷。第十節(jié)蠕形螨檢查【適應(yīng)證】酒渣鼻等?！窘勺C】無特殊禁忌?！静僮鞣椒俺绦颉?.擠刮法(1)選取鼻溝、頰部及顴部等皮損區(qū)，用刮刀或手?jǐn)D壓。(2)擠出物置于玻片上，加一滴生理鹽水或50%甘油，蓋上蓋玻片，并輕輕壓平。(3)鏡檢。2.透明膠帶法(1)取透明膠帶貼于鼻溝、頰部及顴部等皮損區(qū)。(2)數(shù)小時或過夜后，取下膠帶貼f載玻片上，鏡檢。【注意事項】1.擠刮法應(yīng)避開皮損合并嚴(yán)重感染灶處。2.透明膠帶法對膠帶過敏者、面部有急性炎癥者等慎用。第十一節(jié)陰虱檢查【適應(yīng)證】陰虱病?！窘勺C】無特殊禁忌?！静僮鞣椒俺绦颉?.用細密的篦子將陰毛上的陰虱梳下，或用小鑷子直接取下陰虱，或用眼科剪剪下黏附有陰虱或陰虱卵的陰毛。2.將上述標(biāo)本置于載玻片上，加一滴10%KOH，在酒精燈上微加熱后，于顯微鏡下檢査，尋找陰虱或陰虱卵。陰虱呈蟹形，有3對足，前足較小，中后組足巨大，有粗大爪抓住陰毛。陰虱卵為鐵銹色或淡紅色楠圓形小粒，常斜向附貼在陰毛上，在顯微鏡下可見到卵體?！咀⒁馐马棥?.由于陰虱和陰虱卵常貼附于陰毛的近根部，因此在采集陰毛標(biāo)本時應(yīng)在毛干根部采集，2.陰性也不能完全排除陰虱病的診斷。第十二節(jié)麻風(fēng)桿菌及麻風(fēng)相關(guān)檢查一、皮膚切刮涂片檢查【適應(yīng)證】麻風(fēng)病【禁忌證】無特殊禁忌。【操作方法及程序】1.皮膚取材法(1)取材部位皮膚經(jīng)碘酒、75%乙醇或碘伏消毒后，左手捏緊皮膚，使之缺血，右手持消毒的11號手術(shù)刀切長約5mm，深2?3mm切口。(2)以刀尖來回3-4次刮取切口邊緣和底部組織液，在刀尖上見到少量組織液時，立即涂抹在干凈載玻片上成直徑5?7mm圓形涂膜。(3)面部切口創(chuàng)面僅用消毒棉球止血5min，肢體部位可加膠布固定或用創(chuàng)可貼止血。(4)皮膚取材部位一般取4?6處，常規(guī)部位為左右眶上、左右耳垂加兩處皮損，皮損應(yīng)取病情最活動處。取材完畢后，涂片在火焰上烘干固定，送實驗室染色鏡檢。染色方法染色時可用加溫法或不加溫法，加溫法用時較短。(1)加溫法①將已固定的載玻片放在染色架上，滴加苯酚復(fù)紅染液覆蓋整個涂膜，用酒精燈在載玻片背面加溫15min，以染液勿沸騰為度，載玻片上染液干涸時要隨時添加染液。②傾去苯酚復(fù)紅染液，用自來水從載玻片的一端輕輕沖洗(勿直接沖洗涂膜），再加1%鹽酸乙醇作用15?30s，輕輕晃動載玻片使之脫色。如涂膜較厚，脫色時間可稍延長，待涂膜呈淡紅色為度。③在玻片上加0.3%亞甲藍（美藍）染液30?60s，用自來水從載玻片的一端輕輕沖洗。待載玻片干后鏡檢。亞甲藍復(fù)染的時間應(yīng)視涂膜的厚薄而定。涂膜厚時染色時間應(yīng)短，防止背景過深，鏡檢時視野透光不良，難以檢出紅染的抗酸桿菌而影響鏡檢結(jié)果。應(yīng)使涂膜的背景為淺藍色為宜。（2）不加溫法①在室溫條件下，在第一步染色中，滴加苯酚復(fù)紅染液30min，無須加溫，余染色步驟與加溫法同。②不加溫法染色，染色條件和結(jié)果都比較穩(wěn)定，值得提倡。理想的染片，應(yīng)該是背景淺藍色，在一個油鏡視野內(nèi)有數(shù)個炎癥細胞，提示組織液取材符合真皮深度，抗酸桿菌呈現(xiàn)鮮紅色。細菌密度標(biāo)準(zhǔn)計算Ridley推薦的一種10倍分級法，可大體反映皮損內(nèi)細菌密度，在現(xiàn)場防治和科研中被廣泛應(yīng)用。陰性：檢査100個以上油鏡視野未査到菌。1十：平均100個視野査到1?10條菌。2十：平均10個視野査到1?10條菌。3十：平均每個視野査到1?10條菌。4十：平均每個視野査到10?100條菌。5十：平均每個視野査到100?1000條菌。6十：平均每個視野査到1000條以上菌。4.細菌密度指數(shù)（BI）的計算BI=各涂膜細菌密度（+）數(shù)的總和/涂膜數(shù)【注意事項】1.取材部位要選取活動性皮損，如結(jié)節(jié)、斑塊、紅斑、彌漫性浸潤等。2.取材的深度一定要夠，一般為2?3mm，要捏緊皮損，防止出血，刀尖要確認(rèn)刮到組織液后再涂片。因取材深度不夠而取組織液太少，不能形成符合規(guī)定的涂膜是產(chǎn)生査菌假陰性的主要原因。3.組織液取材勿含血液，否則會影響鏡檢結(jié)果，也是出現(xiàn)査菌假陰性的主要原因。4.抗酸染液一定要新鮮配制，一般勿超過1年。麻風(fēng)診斷中已經(jīng)有因染液過期出現(xiàn)查菌假陰性而漏診的情況。5.染色要按規(guī)定操作方法進行，要根據(jù)涂膜的厚薄調(diào)整染色的時間。涂膜太厚，亞甲藍染色時間太長是涂片藍色背景太深而出現(xiàn)假陰性結(jié)果的常見原因。6.完整菌指菌體完整、染色均勻的正常形、超過1/2的短桿形及延仲形細菌。非完整菌為菌體斷裂、染色不均勻的顆粒形、小于1/2的斷裂形、雙球形、念珠形等。7.細菌形態(tài)對判斷麻風(fēng)早期療效和復(fù)發(fā)很有用，在疑似復(fù)發(fā)的患者的涂片中見到較多的完整菌，則基本可確定麻風(fēng)復(fù)發(fā)。經(jīng)過有效治療的患者，麻風(fēng)菌均呈現(xiàn)顆粒狀，無完整菌存在。二、組胺試驗【適應(yīng)證】麻風(fēng)病?！窘勺C】對所試藥物高度過敏者?！静僮鞣椒俺绦颉?.用碘酒、75%乙醇或碘伏消毒后，在正常和麻風(fēng)皮損處分別皮內(nèi)注射1：1000的磷酸組胺溶液各0.1ml。2.約30s后，于正常皮膚注射處周圍出現(xiàn)第一個紅斑，直徑約10mm；再過30s，在上述紅斑周圍出現(xiàn)第二個紅斑，直徑30?40mm，邊緣彌漫；最后在紅斑中央出現(xiàn)風(fēng)團a此為完整的三聯(lián)反應(yīng)。表明受試皮膚的神經(jīng)功能正常。3.三聯(lián)反應(yīng)的原理是最初出現(xiàn)的紅斑是皮膚毛細血管受組胺刺激而擴張所致，最后出現(xiàn)的風(fēng)團是繼毛細血管擴張后，血漿滲出引起的局部水腫。重要的是第二個紅斑，是小動脈擴張所致。由于小動脈擴張的前提是支配其血管的末梢神經(jīng)要正常，并能通過軸突反射而傳導(dǎo)沖動才能完成，因此特別有意義。在神經(jīng)切斷，或用普魯卡因封閉神經(jīng)后，就不會有第二個紅斑。麻風(fēng)患者由于皮損處末梢神經(jīng)受到破壞，所支配的小動脈不能擴張，也不出現(xiàn)第二個紅斑，稱三聯(lián)反應(yīng)不完整?！咀⒁馐马棥?.在炎性紅斑處不宜做此試驗，以免判斷失誤。2.組胺三聯(lián)反應(yīng)的不完整，不是麻風(fēng)病所特有的，許多周圍神經(jīng)病變都町出現(xiàn)。3.皮損處的改變要與正常皮膚處對照觀察。三、出汗試驗【適應(yīng)證】麻風(fēng)病?！窘勺C】對所試藥物高度過敏者?！静僮鞣椒俺绦颉?.淀粉法(1)在正常皮膚和皮損處用碘酒和75%乙醇消毒后，再各涂碘酒，待干后，分別皮內(nèi)注射1：1000的毛果蕓香堿溶液各0.1ml，擦干針尖處滲液，立即撒上薄層干燥淀粉。(2)3?5min后，正常皮膚部位淀粉處出現(xiàn)藍色小點或小片，表示出汗正常。(3)如果皮損處汗腺破壞或泌汗神經(jīng)破壞，泌汗功能障礙，則碘無法與淀粉發(fā)生作用，不出現(xiàn)藍點或藍色小片。2.試紙法(1)皮內(nèi)注射毛果蕓香堿后，用棉球擦去針眼處滲液，2mm后，將溴酚藍紙按在針眼處，輕輕加壓，15s后將紙取下，如有出汗則在溴酚藍紙上顯示針尖或稍大的藍色小點。(2)此法的試驗結(jié)果比較精確(3)溴酚藍紙的制備。取溴酚藍0.1g溶于95%乙醇溶液10ml內(nèi)配成1%溴酚藍溶液；用滴管將1%溴酚藍溶液滴在濾紙上，待自然干燥后成黃色的濾紙，剪成1cmX1cm大小備用。【注意事項】宜在對側(cè)相應(yīng)或鄰近的正常皮膚處作對照，皮損處的變化要與正常皮膚處仔細觀察對比。四、立毛肌試驗【適應(yīng)證】麻風(fēng)病?！窘勺C】對所試藥物高度過敏者?！静僮鞣椒俺绦颉?.在正常和皮損處先以碘酒和75%乙醇消毒后，分別于皮內(nèi)注射1：10萬的苦味酸煙堿溶液0.1ml。2.正常皮膚的末梢神經(jīng)未受損害，立毛肌會收縮，引起雞皮現(xiàn)象。3.麻風(fēng)皮損因神經(jīng)末梢受到破壞而無此現(xiàn)象?！咀⒁馐马棥?.立毛肌試驗時沒有雞皮現(xiàn)象不是麻風(fēng)皮損所特有的，也見于所有末梢神經(jīng)功能在受到阻斷或損傷的情況下。2.宜在對側(cè)相應(yīng)或鄰近的正常皮膚處作對照，皮損處的變化要與正常皮膚處仔細觀察對比。第十三節(jié)淋球菌檢查【適應(yīng)證】淋病?！窘勺C】無特殊禁忌?！静僮鞣椒俺绦颉?.分泌物的涂片檢查主要適用于男性。(1)用滅菌生理鹽水洗凈尿道口。(2)戴消毒手套后，用手指由陰莖根部向尿道口方向擠出膿液，用接種環(huán)或棉拭子蘸取膿液，輕輕涂于載玻片上，待其自然干燥后加熱固定，做革蘭染色，然后鏡檢。(3)在多形核白細胞內(nèi)找到革蘭陰性的腎形雙球菌時，可明確診斷。2.淋球菌的分離培養(yǎng)(1)取材。①男性患者從尿道取材時，可用細小棉拭子伸人尿道2?4cm，輕輕轉(zhuǎn)動后取出分泌物(應(yīng)略帶黏膜。②女性患者取材時，先用陰道窺器暴露宮頸口，用無菌棉拭子拭去宮頸口表面的分泌物，另取一棉拭子插入宮頸口內(nèi)1?2cm，轉(zhuǎn)動并停留10?20s取出。③直腸取材時，應(yīng)將棉拭子插入肛門。④檢査淋球菌性咽炎時，應(yīng)從扁桃體及扁桃體窩取材。⑤對青春期前女童可采集陰道處分泌物標(biāo)本。(2)標(biāo)本取出后立即接種于培養(yǎng)基中，目前常用加入多黏菌素的血液瓊脂或巧克力瓊脂培養(yǎng)基。(3)初次分離應(yīng)使用5%?10%CO2燭缸，培養(yǎng)溫度以36C為宜，相對濕度80%以上，培養(yǎng)24?48h看結(jié)果。(4)淋球菌在多黏菌素B血液瓊脂上經(jīng)24?48h培養(yǎng)后，可形成圓形、凸起、濕潤、光滑、半透明或灰白色的菌落，邊緣呈花瓣狀，直徑0.5-1.0cm，用接種環(huán)觸之有黏性，如繼續(xù)培養(yǎng)，菌落體積増大，表面粗糙，邊緣皺縮。3.淋球菌的鑒定——氧化酶試驗(1)配制氧化酶試劑：0.5%?1%鹽酸二甲基對苯二胺水溶液。(2）將溶液滴加于可疑菌落上，觀察顏色變化。也可先將試劑滴在一小張濾紙片上，然后挑取可疑菌落與之接觸，觀察顏色變化。(3)菌落在接觸氧化酶試劑15?20s出現(xiàn)紅色，保持30s以上，然后逐漸變成紫色，最后呈黑色，為氧化酶試驗陽性，證實為淋球菌?！咀⒁馐马棥?.分泌物涂片時不要用力涂擦，以免細胞破裂和變形，涂片厚薄要合適。2.女性宮頸分泌物、咽和直腸標(biāo)本在涂片中由于雜菌較多，故推薦用培養(yǎng)法。3.分離培養(yǎng)取材時拭子伸人尿道或?qū)m頸的深度一定要足夠。4.培養(yǎng)淋球菌時，取材后應(yīng)立即接種，標(biāo)本離體的時間越短越好。5.分離培養(yǎng)應(yīng)采用加抗生素的選擇性培養(yǎng)基。6.氧化酶試劑應(yīng)為新鮮配制(現(xiàn)用現(xiàn)配)，在棕色瓶中避光保存。7.氧化酶試劑遇鐵也會變紅，故接種環(huán)應(yīng)非鐵絲所制。8.對癥狀不典型的男性患者取材，最好在其晨起排尿前或排尿4h以后。第十四節(jié)衣原體檢查【適應(yīng)證】非淋球菌感染者?！窘勺C】無特殊禁忌?！静僮鞣椒俺绦颉?.直接涂片染色法(1)采集標(biāo)本同淋球菌。(2〉標(biāo)本涂片，自然干燥后甲醛固定10~15min。(3)當(dāng)日配制的姬姆薩溶液染色1h。(4)再用95%乙醇溶液淋洗涂片，干燥。(5)油鏡下陽性標(biāo)本中可在上皮細胞內(nèi)找到1?3個或更多呈藍色、深藍色或暗紫色的包涵體。2.衣原體抗原檢測法(1)采集標(biāo)本同淋球菌。(2)用商品試劑盒檢測，檢測前先將試劑盒和測試卡等室溫下復(fù)溫30min。(3)加試劑至塑料管刻度處(約0.6ml)，將拭子標(biāo)本浸人管內(nèi)搖勻，置水浴，10?20min取出，轉(zhuǎn)動拭子并沿管壁擠壓，棄去拭子，提取液置室溫冷卻后蓋上管蓋。(4)將測試卡置臺面，加入5滴提取液于檢體窗，靜置30min后觀察結(jié)果。(5)質(zhì)控窗和結(jié)果窗均顯示一條藍帶為陽性，結(jié)果窗無變化為陰性。3.免疫熒光法(1)采集標(biāo)本同淋球菌檢查。(2)將標(biāo)本涂于玻片凹孔中或圖圈中，自然干燥，丙酮或無水甲醛固定漂洗，再干燥。(3)加30ml熒光素標(biāo)記的沙眼衣原體單克隆抗體試劑覆蓋凹孔，玻片置濕盒中或37攝氏度下作用15min，去掉多余試劑，用蒸餾水淋洗涂片，自然干燥，加一滴封固液，蓋上蓋玻片，置熒光顯微鏡下檢査。(4)陽性標(biāo)本在高倍鏡下可見上皮細胞內(nèi)的衣原體顆粒，為單一、針尖大小、明亮的綠色熒光，在油鏡下為熒光均勻、邊緣光滑的圓盤樣結(jié)構(gòu)，也可見網(wǎng)狀體等其他形態(tài)的衣原體顆粒?！咀⒁馐马棥客芮蚓鷻z査。第十五節(jié) 解脲脲原體檢查【適應(yīng)證】非淋球菌感染者?！窘勺C】無特殊禁忌?！静僮鞣椒俺绦颉?.采集標(biāo)本同淋球菌檢查，也可用10ml中段尿離心（2000r/min，10min），取沉渣作接種物。2.將標(biāo)本接種到液體培養(yǎng)基中置燭缸內(nèi)，在37C恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)24?72h，每日觀察顏色變化，如由黃色變?yōu)榉奂t色，可能有解脲脲原體生長。3.取0.2ml培養(yǎng)物接種到固體培養(yǎng)基上，培養(yǎng)48h后于低倍鏡下觀察，有典型“油煎蛋”狀菌落者為陽性?！咀⒁馐马棥客芮蚓鷻z査。第十六節(jié)梅毒螺旋體檢查一、梅毒螺旋體檢査【適應(yīng)證】早期梅毒?！窘勺C】無特殊禁忌?！静僮鞣椒俺绦颉?.暗視野顯微鏡檢查(1)多取材于硬下疳潰瘍面、扁平濕疣及黏膜斑表面、淋巴結(jié)抽出液。(2)先用無菌生理鹽水清洗皮損處，用鈍刀刮除皮損表面組織，擦凈，擠壓周圍組織，使血清及組織液滲出，吸取液體涂片，在暗視野顯微鏡下檢查。(3)結(jié)果以查見梅毒螺旋體為陽性。2.免疫熒光染色檢查(1)上述取材后，用已知抗梅毒螺旋體抗血清，加非致病性螺旋體培養(yǎng)物進行吸收，再用異硫氰酸熒光素(FITC)標(biāo)記，対梅毒螺旋體染色。(2)熒光顯微鏡下見到亮綠色螺旋體為陽性。3.組織切片染色用改良的萊瓦弟(Levoaditis)鍍銀染色，可顯示皮膚及內(nèi)臟器官中梅毒螺旋體，呈黑褐色。二、梅毒血清學(xué)檢査（一）非梅毒螺旋體抗原試驗【適應(yīng)證】1.臨床可疑人群常規(guī)檢査；大量人群篩選檢査。2.定量指標(biāo)觀察療效，是否再發(fā)，是否再感染。3.發(fā)現(xiàn)潛伏梅毒感染者?！窘勺C】無特殊禁忌?！驹囼灧椒ā?.性病研究實驗室試驗(venerealdiseaseresearchlaboratorytest，VDRL)用心磷脂、磷脂酰膽堿(卵磷脂)及膽固醇為抗原，與機體產(chǎn)生的反應(yīng)素發(fā)生顆粒凝集和沉淀反應(yīng)?？上♂屪龆糠磻?yīng)。2.不加熱血清反應(yīng)素試驗(unheatedserumreagintest?USR)用改良的VDRL抗原，血清可不必加熱滅活，抗原不必每天配制。3.快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(rapidplasmareagincirclecardtest，RPR)基本原理與USR相同，但在抗原中加入藥用炭(活性炭)顆粒，判定結(jié)果可在肉眼下進行。也可稀釋做定量反應(yīng)?！窘Y(jié)果判定】(++++)有大塊狀的顆粒和聚合團塊(+++)有中塊狀的顆粒和聚合團塊(++)有小塊狀的顆粒聚合物(+-)有小塊聚合顆粒，均勻分布顆粒細小、混懸，無聚合現(xiàn)象定量用生理鹽水按1：8、1：16、1：32……稀釋，判定陽性標(biāo)準(zhǔn)同上。(二）梅毒蠓旋體抗原試驗【適應(yīng)證】診斷梅毒有高敏感性和高特異性，常被用作梅毒的確證試驗。應(yīng)注意到：梅毒患者該類拭驗呈陽性反應(yīng)后，約有95%的患者雖經(jīng)足量治療，其血清陽性反應(yīng)終生不變，因此不能作為療效觀察、復(fù)發(fā)或再感染的判定指征?！窘勺C】無特殊禁忌?！驹囼灧椒ā?.熒光密螺旋體抗體吸收試驗用間接免疫熒光技術(shù)檢測血清中抗梅毒螺旋體抗體。有高敏感性和高特異性。2.梅毒螺旋體血球凝集試驗是以梅毒螺旋體為抗原的間接血球凝集試驗，是一種特異性和敏感性均較高而且操作較簡單的方法。目前有兩種試驗：一種即TPHA，另一種為梅毒螺旋體顆粒凝集試驗(treponemapallidumparticleagglutinationtest，TP-PA)。兩種方法都用超聲波粉碎的Nichol株螺旋體懸液為抗原，前者用甲醛處理的羊紅細胞作抗原載體，后者用純化的明膠顆粒作抗原載體。3.梅毒螺旋體停動試驗(treponemapallidumimmobilizationtest，TPI)梅毒患者血清中含有一種在補體存在時能使螺旋體停動的抗體。該試驗陽性結(jié)果出現(xiàn)得早，但應(yīng)注意在一期梅毒的晚期、二期梅毒的早期和中期血清峰值開始下降?！咀⒁馐马棥棵范韭菪w檢査陽性對梅毒的診斷提供了重要依據(jù)，但確診梅毒常需要接觸史、臨床癥狀、實驗室檢查綜合判定。梅毒血清試驗可能出現(xiàn)技術(shù)性假陽性和生物學(xué)假陽性反應(yīng)，特別是非梅毒螺旋體抗原試驗。第十七節(jié)醋酸白（甲苯胺藍）試驗【適應(yīng)證】尖銳濕疣?！窘勺C】無特殊禁忌。【操作方法及程序】暴露疣體或可疑皮損，用蘸有5%醋酸的棉拭子壓于可疑皮疹及附近的皮膚黏膜上，觀察3?5min（肛門皮疹須觀察l0min左右）?！窘Y(jié)果判定】作用部位呈均勻一致的變白區(qū)，邊緣清楚，為陽性?！咀⒁馐马棥?.敏感性較高、2.有時在上皮增厚或有外傷擦破情況下有假陽性反應(yīng)。3.該試驗診斷尖銳濕疣并非絕對特異反應(yīng)，應(yīng)作為臨床參考?？赡苡屑訇栃曰蚣訇幮?。第十八節(jié)卟啉檢查卟啉是體內(nèi)合成血紅蛋白等物質(zhì)的中間產(chǎn)物，包括卟膽原，I、II型尿卟啉原和尿卟啉，I、II型糞卟啉原和糞卟啉，常采用尿液、糞便和紅細胞的卟啉檢査法。【適應(yīng)證】各種原發(fā)性和繼發(fā)性卟啉病。1.紅細胞生成性卟啉病包括先天性紅細胞生成性卟啉病、紅細胞生成性原卟啉病、