免疫血清學(xué)實(shí)驗(yàn)課件

雙向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)

直接凝集試驗(yàn)抗原〔antigen,Ag〕:能夠刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體和致敏淋巴細(xì)胞，并能與之特異性結(jié)合的物質(zhì)?？贵w(antibody,Ab)：

B細(xì)胞識(shí)別抗原后增殖分化為漿細(xì)胞所產(chǎn)生的可特異性結(jié)合抗原的一組糖蛋白。抗原-抗體反響的根本檢測(cè)方法凝集反響(agglutination):顆粒性抗原與抗體的反響。沉淀反響(precipitation):可溶性抗原與抗體的反響。補(bǔ)體參與的反響免疫標(biāo)記技術(shù)〔immunolabellingtechnique〕:用示蹤物質(zhì)標(biāo)記抗原或抗體，進(jìn)行抗原-抗體反響的檢測(cè)。一、沉淀反響-雙向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)原理用半固體瓊脂凝膠作為介質(zhì)，可溶性抗原、抗體在其中能自由擴(kuò)散。將可溶性抗原和抗體分別參加瓊脂板上相對(duì)應(yīng)的孔中，兩者各自向四周擴(kuò)散，如果抗原和抗體相對(duì)應(yīng)，那么在兩者比例適當(dāng)處形成白色沉淀線。主要材料

器材：載玻片、EP管、微量加樣器、槍頭、打孔器、注射器針頭試劑：生理鹽水、瓊脂粉、抗原〔正常小鼠IgG〕、抗體〔兔抗小鼠IgG血清〕

配制1%瓊脂：用生理鹽水配制，加熱溶解制板：趁熱將3.5ml融化瓊脂水平鋪在玻片上，室溫下冷卻凝固打孔：用打孔器按圖示打孔稀釋抗體：取5支EP管，將抗體倍比稀釋加樣：周圍孔參加不同稀釋度的抗體，中間孔參加抗原瓊脂板放入濕盒內(nèi)，置4℃，24-48小時(shí)后觀察結(jié)果。實(shí)驗(yàn)步驟

Ag12345control6倍比稀釋法1:41:81:161:64100μL100μL100μL100μL100μL100μL100μL樣品管第一管第二管第四管結(jié)果判斷

123456應(yīng)用測(cè)定抗體的效價(jià)用特異性抗體檢測(cè)抗原檢查抗原和免疫血清的特異性、純度或濃度，比較抗原之間的異同點(diǎn)兩個(gè)樣品為同一抗原存在三種不同的抗原兩個(gè)樣品局部相同二、凝集反響原理顆粒性抗原(完整的病原微生物或紅細(xì)胞等)與相應(yīng)抗體特異性結(jié)合，在有電解質(zhì)存在的條件下，形成肉眼可見的凝集團(tuán)塊。根本類型直接凝集反響、間接凝集反響、凝集抑制反響等。直接凝集實(shí)驗(yàn)〔ABO血型鑒定〕器材：酒精棉球、滅菌干棉球、微量加樣器、滅菌槍頭、玻片、一次性采血針試劑抗A試劑〔藍(lán)色〕、抗B試劑〔黃色〕主要材料實(shí)驗(yàn)步驟干凈玻片上分別滴加抗A、抗B試劑各一滴酒精棉球消毒無名指，采血針采血用加樣器加末梢血各1滴不斷轉(zhuǎn)動(dòng)玻片，使血液與試劑充分混勻，靜止1-2min左右，觀察結(jié)果AB

抗A抗B結(jié)果判斷

血型抗A試劑抗B試劑A+-B-+0--AB