非發(fā)酵革蘭陰性桿菌-包頭醫(yī)學(xué)院課件

不發(fā)酵革蘭陰性桿菌包頭醫(yī)學(xué)院于敬達(dá)

非發(fā)酵革蘭陰性桿菌，指一大群不發(fā)酵葡萄糖或僅以氧化形式利用葡萄糖的需氧或兼性厭氧、無(wú)芽胞的革蘭陰性桿菌；多為條件致病菌。近年來(lái)由該類(lèi)細(xì)菌引起感染（特別是醫(yī)院內(nèi)感染）的報(bào)告日益增多，已引起臨床醫(yī)學(xué)及檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)的重視。

非發(fā)酵革蘭陰性桿菌包括假單胞菌屬、產(chǎn)堿桿菌屬、無(wú)色桿菌屬、不動(dòng)桿菌屬、莫拉菌屬、金氏桿菌屬、艾肯菌屬、土壤桿菌屬、叢毛單胞菌屬、黃桿菌屬、黃單胞菌屬等。非發(fā)酵菌特點(diǎn)氧化酶試驗(yàn)：絕多大數(shù)為+；葡萄糖氧化/發(fā)酵試驗(yàn)（O/F）：大多數(shù)為氧化型，產(chǎn)生弱酸；動(dòng)力：懸滴法或鞭毛染色，以鑒別某些有動(dòng)力的非發(fā)酵菌。麥康凱（MAC）生長(zhǎng)情況：絕大多數(shù)長(zhǎng)出微小菌落，少數(shù)不生長(zhǎng)。假單胞菌屬

假單胞菌屬為需氧、有鞭毛、運(yùn)動(dòng)活潑，不形成芽胞有莢膜的革蘭陰性桿菌，氧化酶試驗(yàn)陽(yáng)性，包括200多個(gè)種。多數(shù)為腐生菌，少數(shù)為植物和動(dòng)物寄生菌；大多為條件致病菌。代表菌銅綠假單胞菌。假單胞菌屬分布廣泛，土壤、水和空氣中均有存在，人類(lèi)非發(fā)酵菌感染中，假單胞菌占70％～80％，主要為銅綠假單胞菌，其他較為常見(jiàn)的菌種有嗜麥芽窄食單胞菌、熒光假單胞菌、惡臭假單胞菌、產(chǎn)堿假單胞菌等。這些菌種也是醫(yī)院感染的主要病原菌。臨床意義

銅綠假單胞菌廣泛存在環(huán)境中，加之多種傳播途徑，因此易感染。特別在由各種原因所致的人體抵抗力低下時(shí)引起皮膚感染、呼吸道感染、泌尿道感染、燒傷感染等，亦可導(dǎo)致菌血癥、心內(nèi)膜炎、囊性纖維變性，該菌引起的慢性肺部感染占有較大的比例；在AIDS病中，常發(fā)生感染。感染眼部的銅綠假單胞菌，可以合成膠原酶，以致引起角膜穿孔而失明。在假單胞菌屬的感染中銅綠假單胞菌的感染占70％。臨床意義微生物特性

形態(tài)染色

G-直或微彎、較細(xì)長(zhǎng)、散在排列、無(wú)芽胞有莢膜、有端鞭毛或叢鞭毛。銅綠假單胞菌電鏡圖假單胞菌屬（Pseudomonas）培養(yǎng)特性

專(zhuān)性需氧，部分菌株能在兼性厭氧條件下生長(zhǎng)，生長(zhǎng)溫度范圍廣25～42℃，最適生長(zhǎng)溫度為25～30℃，4℃不生長(zhǎng)。普通培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好，產(chǎn)生各種水溶性色素，如綠膿素、熒光素、膿褐素，綠膿素為藍(lán)綠色，可溶于水和氯仿，熒光素只溶于水；液體培養(yǎng)基中渾濁生長(zhǎng)。微生物特性

銅綠假單胞菌菌落特征（普通瓊脂平板）

假單胞菌屬（Pseudomonas）菌落，大小不一，扁平、隆起、光滑、濕潤(rùn)，邊緣不整，呈融合狀態(tài)。產(chǎn)生熒光水溶性色素使培養(yǎng)基變綠色、黃綠色。假單胞菌屬（Pseudomonas）銅綠假單胞菌菌落特征（血瓊脂平板）

在血瓊脂平板上可形成扁平、濕潤(rùn)、有金屬光澤和生姜?dú)馕兜幕揖G色或藍(lán)綠色菌落，有透明溶血環(huán)。假單胞菌屬（Pseudomonas）銅綠假單胞菌菌落特征（MAC）麥康凱平板上18-24h可形成微小無(wú)光澤半透明菌落，48h后菌落中心常呈棕綠色。假單胞菌屬（Pseudomonas）生化反應(yīng)

銅綠假單胞菌能夠分解葡萄糖、木糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，但不分解甘露醇、麥芽糖、蔗糖和乳糖。液化明膠。分解尿素，氧化酶陽(yáng)性，還原硝酸鹽產(chǎn)生氮?dú)?，吲哚陰性，利用枸櫞酸鹽，精氨酸雙水解酶陽(yáng)性。氧化酶試驗(yàn)（＋）生化反應(yīng)O/F試驗(yàn)（氧化型）生化反應(yīng)硝酸鹽還原試驗(yàn)（＋）生化反應(yīng)抗原性有兩種抗原：O抗原和H抗原，O抗原包括：內(nèi)毒素脂多糖：是保護(hù)性抗原原內(nèi)毒素脂多糖（OEP）：是一種高分子抗原、具有強(qiáng)免疫性，其抗體不僅對(duì)同一血清型細(xì)菌有特殊性保護(hù)作用，且對(duì)不同血清型的細(xì)菌也有共同保護(hù)作用。OEP廣泛存在于一些革蘭陰性菌中，包括其它類(lèi)的單胞菌、大腸埃希菌、肺炎克氏菌和霍亂弧菌等，是一種極有意義的類(lèi)屬抗原。

抵抗力

較其它革蘭陰性菌強(qiáng)，耐許多化學(xué)消毒劑與抗生素；560C1h可殺死細(xì)菌。致病物質(zhì)侵襲力:粘附素、莢膜多糖外毒素:外毒素A、溶血素、腸毒素、殺白細(xì)胞素內(nèi)毒素綠膿素侵襲性酶類(lèi):彈性蛋白酶、胞外酶S、磷脂酶C所致疾病

條件致病菌

燒傷感染創(chuàng)傷感染下呼吸道感染：氣管切開(kāi)插管、人工機(jī)械輔助通氣尿路感染：留置導(dǎo)尿，內(nèi)窺鏡檢查引發(fā)也可引起中耳炎、角膜炎、尿道炎、胃腸炎、心內(nèi)膜炎、膿胸，也可引起菌血癥、敗血癥及引起嬰兒嚴(yán)重的流行性腹瀉。局部感染銅綠假單胞菌檢驗(yàn)程序

檢驗(yàn)結(jié)果分析與報(bào)告

結(jié)合臨床感染癥狀，患者血、尿液及無(wú)菌體液中分離到銅綠假單胞菌，特別是反復(fù)檢出即可確定是感染病原菌。如無(wú)感染的臨床表現(xiàn)，應(yīng)作為正常菌群。

防治原則

銅綠假單胞菌可由各種途徑傳播，但主要是通過(guò)污染醫(yī)療器械、用具及帶菌醫(yī)護(hù)人員引起醫(yī)源性感染。

臨床上常見(jiàn)的其他假單胞菌

熒光假單胞菌惡臭假單胞菌斯氏假單胞菌致病性醫(yī)源性感染尿路、皮膚感染，骨髓炎傷口、泌尿道感染，肺炎，心內(nèi)膜炎鞭毛特點(diǎn)一端叢鞭毛（>3根）一端叢鞭毛（>3根）一端有單根鞭毛(最適)生長(zhǎng)溫度25~30℃

25~30℃

35℃

4℃生長(zhǎng),42℃不生長(zhǎng)4℃和42℃都不生長(zhǎng)4℃不生長(zhǎng),42℃生長(zhǎng)菌落特點(diǎn)熒光素→黃綠色熒光熒光素黃色素,無(wú)熒光培養(yǎng)特性低溫培養(yǎng),不能35℃陳舊培養(yǎng)基有腥臭味可在6.5%高鹽培養(yǎng)基生長(zhǎng)不動(dòng)桿菌為一群不發(fā)酵糖類(lèi)、氧化酶陰性、不能運(yùn)動(dòng)的G-桿菌、常分離到的菌種有醋酸鈣不動(dòng)桿菌、洛菲不動(dòng)桿菌、溶血不動(dòng)桿菌等，DNAG+Cmol%為38～46.5。存在于正常人體的皮膚、呼吸道和泌尿道，是引起醫(yī)院感染的常見(jiàn)病原菌，為條件致病菌，常從感染患者的血、尿、膿液及呼吸道分泌物、腦脊液等標(biāo)本分離。革蘭陰性桿菌，多為球桿狀，常見(jiàn)成對(duì)排列，可單個(gè)存在，有時(shí)呈絲狀或鏈狀。無(wú)芽孢，無(wú)鞭毛，粘液性菌株有莢膜。為專(zhuān)性需氧菌，對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求一般，最適生長(zhǎng)溫度為35℃生物學(xué)性狀鮑曼不動(dòng)桿菌革蘭染色不動(dòng)桿菌

溶血不動(dòng)桿菌菌落特征（血瓊脂平板）不動(dòng)桿菌鮑曼不動(dòng)桿菌菌落特征（MAC）

不動(dòng)桿菌臨床意義條件致病菌，醫(yī)院感染的常見(jiàn)病原菌。

所致疾病包括肺炎、尿路感染、皮膚和傷口感染、心內(nèi)膜炎、腦膜炎和腹膜炎等。不動(dòng)桿菌屬檢驗(yàn)程序

產(chǎn)堿桿菌屬與臨床有關(guān)的有糞產(chǎn)堿桿菌及亞型、皮喬特產(chǎn)堿桿菌、木糖氧化產(chǎn)堿桿菌及亞種，DNAG+Cmol%為56～70，典型菌種為糞產(chǎn)堿桿菌。人體的正常菌群，是醫(yī)院感染的病原菌，可引起抵抗力低下患者發(fā)生敗血癥，并可從患者呼吸道、尿液、血液及腦脊液中分離出來(lái)。為G-桿菌，呈鏈狀、周鞭毛、有動(dòng)力，無(wú)莢膜。在普通培養(yǎng)基上18～24h形成無(wú)色透明菌落。氧化酶及觸酶均陽(yáng)性，不分解任何糖類(lèi)，O-F試驗(yàn)堿性，脲酶陰性，不液化明膠。

糞產(chǎn)堿桿菌革蘭陰性短桿菌，常成雙、鏈排列；專(zhuān)性需氧，營(yíng)養(yǎng)要求不高，MAC、SS上成無(wú)色透明菌落；液體培養(yǎng)基中均勻混濁、菌膜，管底形成粘性沉淀，在蛋白胨肉湯中產(chǎn)氨，使pH升至8.6，為鑒別特征。氧化酶+，觸酶+，檸檬酸鹽+；致?。阂饎?chuàng)傷和泌尿道感染。糞產(chǎn)堿桿菌菌落特征（MAC）產(chǎn)堿桿菌屬黃桿菌屬為一群無(wú)動(dòng)力和芽胞、氧化酶陽(yáng)性的G-桿菌。與臨床相關(guān)菌種有短黃桿菌、腦膜炎敗血性黃桿菌、芳香黃桿菌、水田黃桿菌、嗜糖黃桿菌、嗜醇黃桿菌、嗜溫黃桿菌。模式菌種為水田黃桿菌。本菌有兩個(gè)特點(diǎn)：產(chǎn)生黃色素；分解碳水化合物產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。DNAG+Cmol%含量31～42。存在于水、土壤和蔬菜中，還可從口腔、上呼吸道、皮膚中檢出，是條件致病菌，也是引起醫(yī)院感染的常見(jiàn)菌?？梢鹦g(shù)后感染、菌血癥、在新生兒及嬰幼兒的化膿性腦膜炎中分離出腦膜敗血性黃桿菌比例較高。Ｇ-桿菌，需氧代謝，血瓊脂培養(yǎng)基生長(zhǎng)良好，典型菌落為淡黃色，氧化酶、觸酶、磷酸酶陽(yáng)性。臨床上常見(jiàn)的腦膜炎敗血黃桿菌及芳香黃桿菌等對(duì)廣譜抗菌藥(如氨基糖甙類(lèi)、β-內(nèi)酰胺酶類(lèi)、四環(huán)素類(lèi)、氯霉素)有耐藥性，應(yīng)根據(jù)藥敏試驗(yàn)選擇用藥。

黃桿菌屬莫拉菌屬與臨床有關(guān)的有缺陷莫拉菌、犬莫拉菌、非液化莫拉菌、亞特蘭大莫拉、林肯莫拉菌、苯丙酮酸莫拉菌、奧斯陸莫拉。DNAG+Cmol％為40～47．5。能引起眼結(jié)膜炎、氣管炎、肺炎、腦膜炎、腦膿腫、心肌炎、心內(nèi)膜炎及泌尿生殖系統(tǒng)炎癥。近年來(lái)非液化莫拉菌引起腦膜炎及嬰幼兒菌血癥者日益多，應(yīng)引起高度重視。Ｇ-球桿菌，雙短鏈狀排列，具有多形性。營(yíng)養(yǎng)要求較高，血瓊脂平板上生長(zhǎng)，無(wú)色不溶血的菌落。氧化酶陽(yáng)性，觸酶陽(yáng)性，無(wú)動(dòng)力，不分解糖類(lèi)，吲哚試驗(yàn)陰性。對(duì)青霉素類(lèi)敏感，對(duì)頭孢類(lèi)、四環(huán)素類(lèi)、氨基糖甙類(lèi)藥物均為敏感。

其他臨床非發(fā)酵菌

不動(dòng)桿菌屬產(chǎn)堿桿菌屬黃桿菌屬莫拉菌屬模式菌株醋酸鈣不動(dòng)桿菌糞產(chǎn)堿桿菌水生黃桿菌

致病性條件致病菌條件致病菌條件致病菌腦膜炎、嬰幼兒菌血癥糖類(lèi)不發(fā)酵不分解可分解碳水化合物產(chǎn)酸不產(chǎn)氣不發(fā)酵氧化酶陰性陽(yáng)性陽(yáng)性陽(yáng)性運(yùn)動(dòng)性不能不能不能不能生長(zhǎng)溫度最適35℃

最適25~35℃

最適35℃最適32~35℃

營(yíng)養(yǎng)要求一般營(yíng)養(yǎng)要求不高營(yíng)養(yǎng)要求一般營(yíng)養(yǎng)要求較高

普板、MAC普板、MAC、EMB、肉湯血平板、MAC血清及心腦浸液、血平板鑒定生化反應(yīng)生化反應(yīng)生化反應(yīng)生化反應(yīng)營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基軍團(tuán)菌屬

共有39種及3個(gè)亞種，60個(gè)血清型。O抗原將嗜肺軍團(tuán)菌分成15個(gè)血清型;將伯茲曼軍團(tuán)菌，菲利軍團(tuán)菌，長(zhǎng)灘軍團(tuán)菌等分為2個(gè)血清型。

軍團(tuán)菌屬胞內(nèi)菌，能在巨嗜細(xì)胞內(nèi)繁殖，所以其免疫主要是細(xì)胞免疫。嗜肺軍團(tuán)菌的生存能力較強(qiáng)，在蒸餾水中存活100天以上，在污水中可存活1年、對(duì)熱和常用化學(xué)消毒劑敏感。

軍團(tuán)菌屬

Ｇ-桿菌，無(wú)芽胞和莢膜，端鞭毛或側(cè)鞭毛。觸酶陽(yáng)性，可液化明膠，不分解糖類(lèi)，氧化酶陽(yáng)性；本菌營(yíng)養(yǎng)要求苛刻，專(zhuān)性需氧，生長(zhǎng)緩慢，氧氣含量低生長(zhǎng)速度減慢，2．5％-5％的CO２環(huán)境中生長(zhǎng)良好，生長(zhǎng)溫度為350C，最適pH6.7～7.0。軍團(tuán)菌屬

軍團(tuán)菌屬（Legionella）軍團(tuán)菌屬（Legionella）嗜肺軍團(tuán)菌菌落特征在活性炭-酵母浸液瓊脂培養(yǎng)基(BCYE)上3-5天可形成1-2mm直徑的光澤菌落。

嗜肺軍團(tuán)菌革蘭染色軍團(tuán)菌屬（Legionella）

嗜肺軍團(tuán)菌免疫熒光染色軍團(tuán)菌屬（Legionella）嗜肺軍團(tuán)菌菌落SEM圖

軍團(tuán)菌屬（Legionella）臨床意義軍團(tuán)菌廣泛存在于土壤及自然和人工的水環(huán)境中，尤其是在空調(diào)冷凝水中的檢出率最高，是醫(yī)院感染的重要病原菌之一。臨床表現(xiàn)多種多樣，最常見(jiàn)的是肺炎型。

定期清洗空調(diào)預(yù)防軍團(tuán)菌病軍團(tuán)菌屬（Legionella）

嗜肺軍團(tuán)菌是軍團(tuán)菌病的病原菌，流行于夏秋季，治療不當(dāng)，死亡率達(dá)15%軍團(tuán)菌屬（Legionella）軍團(tuán)菌檢驗(yàn)程序

軍團(tuán)菌鑒定

溴甲酚紫(BCP)斑點(diǎn)試驗(yàn)BCP100mg溶于1mol／LKOH10ml中，配成10％濃度。然用蒸餾水稀釋25倍，使之成為0.4％濃度。試驗(yàn)時(shí)取此試劑1滴，滴于濾紙上，再刮取新培養(yǎng)菌，涂抹于含有BCP試劑的濾紙上，若在30s內(nèi)出現(xiàn)藍(lán)寶石色澤即為陽(yáng)性。色素產(chǎn)生試驗(yàn)產(chǎn)生的色素可分為①在培養(yǎng)基中產(chǎn)生的褐色素；②細(xì)胞外熒光，該熒光是由細(xì)菌分泌的—種化合物進(jìn)人瓊脂培養(yǎng)基中而形成的，用長(zhǎng)波紫外線照射時(shí)可出現(xiàn)黃色或黃