飲料工廠微生物控制課件

微生物檢測基礎(chǔ)

質(zhì)量人

12/6/20231一．什么是微生物？

微生物是指所有形體微小，具有單細胞或簡單的多細胞結(jié)構(gòu)，或沒有細胞結(jié)構(gòu)的一群最低等的生物。

整個微生物家族的主要成員有：病毒、細菌、霉菌、酵母、藍細菌、支原體、立克次氏體、衣原體、微細藻類、原生動物。12/6/20232病毒

沒有細胞結(jié)構(gòu)的專性寄生的大分子生物。如流感病毒、肝炎病毒（人體病毒），雞瘟病毒、口蹄疫病毒（動物病毒），煙草花葉病毒、番茄叢矮病毒（植物病毒），噬菌體（細菌和放線菌病毒）等。

12/6/20233細菌

單細胞原核生物，一般在普通光學(xué)顯微鏡（油鏡）下放大一千倍以上并染色才能清楚看見其個體。如人體腸道內(nèi)的大腸桿菌、糞鏈球菌，用于釀醋的醋酸桿菌，使牛奶變酸的乳酸桿菌，生產(chǎn)味精的谷氨酸短桿菌，生產(chǎn)淀粉酶的枯草桿菌等。12/6/2023412/6/20235酵母菌

單細胞真菌，最低等的真核生物。一般用高倍鏡（401～600倍）觀察其個體細胞形態(tài)。如面包酵母、釀酒酵母、紅酵母等。12/6/20236霉菌

真核生物，單細胞或多細胞絲狀真菌可用低倍或高倍鏡觀察其形態(tài)。如釀制小曲酒的根霉、制豆腐乳的毛霉、生產(chǎn)葡萄糖的曲霉菌、生產(chǎn)青霉素的青霉等。

12/6/20237藍細菌（藍綠藻）

原核微生物，單細胞或細胞聚合體。12/6/20238單細胞，介于細菌與病毒之間的一類原始而小型的原核微生物。

支原體、衣原體、立克次氏體12/6/20239微細藻類單細胞藻類。如紅藻、綠藻、小球藻等。

12/6/202310原生動物單細胞，無真正細胞壁。如變形蟲、吸管蟲、草履蟲等。

12/6/202311二．微生物的特性

主要有五個方面12/6/2023121．種類多

到目前為止，人們已認識的微生物已有10多萬種。

12/6/2023132．分布廣

微生物因其形體微小，重量輕，故可以隨著風(fēng)和水流到處傳播。

12/6/2023143．繁殖快

微生物驚人的生長繁殖速度是其他任何生物都望塵莫及的。一般細菌的世代時間為幾十分鐘到一百多分鐘。在最適宜的條件下，人們最熟悉的大腸桿菌每13～20min就可分裂出新的一代。

12/6/2023154．代謝強

微生物的代謝強度比起高等生物要高出幾百到幾萬倍，主要表現(xiàn)在吸收多轉(zhuǎn)化快。12/6/2023165．易變異微生物容易發(fā)生變異的主要原因是個體多為單細胞或結(jié)構(gòu)簡單的多細胞，甚至非細胞結(jié)構(gòu)，因而在受到外界物理或化學(xué)因素影響后，很容易引起細胞內(nèi)的遺傳物質(zhì)發(fā)生突變，結(jié)果導(dǎo)致遺傳性狀，包括形態(tài)或生理表型上的變異。微生物易變異的另一個原因是細胞增殖速度快，細胞數(shù)量多，因而盡管其自發(fā)突變率很低，也會造成在短時間內(nèi)產(chǎn)生較多的變異后代。12/6/202317三．常見微生物的

形態(tài)結(jié)構(gòu)

12/6/20231812/6/20231912/6/20232012/6/20232112/6/20232212/6/20232312/6/20232412/6/20232512/6/20232612/6/20232712/6/20232812/6/20232912/6/20233012/6/20233112/6/202332四．實驗室微生物的培養(yǎng)

12/6/202333實驗室中微生物生長（培養(yǎng)）在液體或固體培養(yǎng)基中。細菌生長的培養(yǎng)基應(yīng)含所有生長的基本需求：能量、碳源、氮源以及基本的離子，磷、硫、鈉、鈣、鉀和鐵及各種微量元素。12/6/202334原養(yǎng)型不需要在培養(yǎng)基中添加另外的成分，而營養(yǎng)缺陷型需要添加生長因子如氨基酸、維生素和含氮堿基。所用的培養(yǎng)基可以是所有成分及量均確切知道的限定培養(yǎng)基（合成培養(yǎng)基）和含有不確定營養(yǎng)物混合物的天然培養(yǎng)基。12/6/202335

瓊脂（洋菜）是用來固化液體培養(yǎng)基的。選擇培養(yǎng)基或鑒定培養(yǎng)基是用來檢測特殊微生物類群的。12/6/202336生長培養(yǎng)基實驗室中細菌通常生長（培養(yǎng)，cultured）在搖瓶、瓶子或稱作發(fā)酵罐的大培養(yǎng)容器液體培養(yǎng)基中或在圓的、通常為塑料、滅菌碟子培養(yǎng)皿的固體培養(yǎng)基中。將微生物引種在這些培養(yǎng)基上稱為接種（inoculation）。12/6/202337培養(yǎng)基的性質(zhì)取決于微生物的天然環(huán)境和微生物生長的營養(yǎng)要求。分離大量微生物或基產(chǎn)物用液體培養(yǎng)基，固體培養(yǎng)基用于個別細菌的分離和保存。12/6/202338限定培養(yǎng)基或合成培養(yǎng)基含有通常為特殊微生物生長基本要求的確定成分。通常是簡單的（最低的）、含有最低生長要求的培養(yǎng)基。12/6/202339

天然培養(yǎng)基

天然培養(yǎng)基含有不確定的成分如蛋白胨（大豆粉酶消化液）和提供足夠營養(yǎng)成分的酵母提取物（氨基酸、維生素、糖和堿基），適合廣泛范圍微生物的生長。天然培養(yǎng)基如營養(yǎng)肉湯（NB）和胰胨、豆胨肉湯（TSB）是實驗室中常規(guī)用的細菌培養(yǎng)基，特別對生長要求還未確定的細菌生長使用。12/6/202340常用血液作培養(yǎng)基的附加成分分離人類病原菌，由于它提供許多難養(yǎng)的人類病原菌生長的基本營養(yǎng)，如鏈球菌。特殊的選擇培養(yǎng)基和監(jiān)別培養(yǎng)基經(jīng)常用于分離特殊的微生物類群，尤其在醫(yī)院的實驗室中。12/6/202341選擇培養(yǎng)基與鑒別培養(yǎng)基設(shè)計這些培養(yǎng)基是為選擇特殊類群的微生物或鑒別兩種菌種時用。選擇培養(yǎng)基含有抑制非目的細菌生長的成分，鑒別培養(yǎng)基是添加某種營養(yǎng)物或／和化學(xué)物質(zhì)，促進所要的微生物生長，使在鑒別培養(yǎng)基平板上兩種不同的微生物的菌落可以區(qū)分開來。12/6/202342生長的環(huán)境條件溫度氧濃度PH水活度12/6/202343溫度

嗜冷微生物適合于－10℃生活的細菌，最適生長溫度在20℃左右。嗜溫微生物生長溫度在15～45℃之間，最適生長溫度在37℃左右的細菌。嗜熱微生物生長溫度在30～75℃之間，最適生長溫度在55℃，在100℃以上溫度生長，稱為嗜高熱微生物。12/6/202344氧濃度

根據(jù)細菌對氧要求的不同分為好氧菌，厭氧菌，包括專性厭氧菌、兼性厭氧菌、耐氧菌微好氧在正常大氣氧濃度20﹪情況下就受到損傷，只能在更低的氧濃度下才能存活。

12/6/202345pH值嗜堿菌（alkaliphiles）：生長在高pH（8.5～11.5）的微生物。嗜酸菌（acidophiles）：生長在低pH（0～5.5）中的微生物。12/6/202346水活度像所有生物一樣，微生物對周圍環(huán)境的滲透壓是敏感的。低滲透壓時，水將聚集于細胞內(nèi)，高滲透壓時水逸出。

12/6/202347五．微生物的生長12/6/2023481．細菌以二等分裂方式（1→2→4）分裂，細菌的生長為指數(shù)生長。群體細胞數(shù)目加倍所需的時間為倍增時間（td）。12/6/202349細菌典型生長曲線

log10穩(wěn)定期（平衡期）活細對數(shù)期衰亡期（死亡期）胞延遲期（指數(shù)期）數(shù)（延滯期）

培養(yǎng)時間12/6/2023502．真菌的生長

真菌是絲狀的、無光合作用的、營異養(yǎng)性營養(yǎng)的真核微生物。12/6/202351真菌生長的各個時期

穩(wěn)定期細減速期胞直線期自溶期

數(shù)

目延遲期指數(shù)期

培養(yǎng)時間12/6/2023523．微生物生長的測定方法微生物的生長可用原生質(zhì)的增加、細胞數(shù)目的增加或以代謝活動情況作指標(biāo)。根據(jù)細胞的干重或某一化學(xué)成分如總氮含量數(shù)量很少，以至誤差很大。最常采用的微生物生長的方法是統(tǒng)計群休數(shù)目。12/6/202353(1)活菌計數(shù)法有時一個菌落并非絕對地都是由一個單細胞所長成的，往往兩個或兩個以上相連結(jié)的細胞只長成一個單菌落；有些細胞比其它細胞較早地分裂，分裂的速度也快，于是它就首先出現(xiàn)可見的菌落，而其它的細胞較遲才出現(xiàn)菌落，所以，必須培養(yǎng)足夠長的時間，才能使所有的菌落增至足以肉眼看見的大小，一般至少需要24-48小時，有些生長較緩慢的微生物甚至需要幾天至一星期；此外，要控制培養(yǎng)皿內(nèi)出現(xiàn)的菌落數(shù)不宜過多。12/6/202354（2）計算器法將待檢菌液充分混勻，注入改良紐氏血球計數(shù)板，計數(shù)一定量的菌液中所含菌數(shù)，計算出每毫升所含菌數(shù)。12/6/202355（3）比濁法

據(jù)細菌懸浮液的透光量間接測定細菌的數(shù)量。細菌懸浮液的濃度在一定范圍內(nèi)與光的穿透量成反比，與光密度成正比。對于絲狀真菌的生長率，可以根據(jù)菌絲的生長長度或菌絲增加的重量。12/6/202356六．微生物生長的控制

使工作者免受他們所研究的微生物傷害和所研究的微生物培養(yǎng)物不受環(huán)境中其他微生物污染的方法稱作無菌（滅菌）技術(shù)。

12/6/2023571．滅菌方法12/6/202358

方法有效性應(yīng)用濕熱滅菌法

煮沸/蒸氣處理殺死多數(shù)細菌、真菌的營養(yǎng)細胞和病毒——對芽孢無效碟子、盆，對熱抗性的器具高壓滅菌器15磅/英寸2121℃殺死所有的營養(yǎng)細菌和芽孢，滅菌時間長短取決于大存在的微生物數(shù)量培養(yǎng)基、溶液、器具，任何經(jīng)受熱和壓力的物品巴斯德消毒法71.7℃15秒液體熱處理但不能殺滅所有細菌。風(fēng)味改變最少牛奶、果汗等12/6/202359方法有效性應(yīng)用間隙滅菌法

三次用90～100℃煮沸10分鐘處理，每次處理間隔24小時第一天殺死營養(yǎng)細胞，在間隔期間任何孢芽萌發(fā)下一次加熱處理時再殺死不能被高壓滅菌的培養(yǎng)基，但對熱有相對的抗性干熱滅菌法灼燒法熱空氣滅菌法熾熱直接加熱200℃（160～170℃――譯者注）2小時，破壞細胞和芽孢接種環(huán)玻璃器具12/6/202360方法有效性應(yīng)用過濾除菌濾器――孔徑大小0.22～0.45μm不能除去病毒不能加熱處理的液體輻射UV線――非電離不能很好穿透材料物體表面和空氣滅菌γ射線――電離穿透能力好藥物、塑料制品12/6/202361自動高壓蒸汽滅菌鍋12/6/2023622．消毒劑與防腐劑消毒劑是用于非生命體殺菌的化學(xué)物質(zhì)防腐劑是能殺死微生物或抑制微生物生長的化學(xué)物質(zhì)，這類物質(zhì)對活組織是無毒性。12/6/202363防腐劑用于健康有關(guān)的方面作用模型防腐劑有機汞表皮與蛋白質(zhì)的SH基團結(jié)合硝酸銀防止新生兒感染淋病奈瑟氏菌引起的失明蛋白質(zhì)沉淀劑碘液表皮碘化蛋白質(zhì)中的酪氨酸殘基；氧化劑酒精（70﹪乙醇）表皮脂溶劑和蛋白變性劑雙酚類（六氯酚）肥皂、洗滌劑、除臭劑破壞細胞膜12/6/202364防腐劑用于健康有關(guān)的方面作用模型陽離子去污劑（四胺基化合物）肥皂、洗滌劑與細胞膜中的磷脂相作用過氧化氫表皮氧化劑消毒劑二氯化汞桌子、臺面、地板與巰基結(jié)合游泳池和生活用水的滅藻劑蛋白質(zhì)沉淀劑蛋白質(zhì)沉淀劑碘液醫(yī)療器械碘化酪氨酸殘基12/6/202365防腐劑用于健康有關(guān)的方面作用模型氯氣凈化生活用水氧化劑氯化物牛奶廠、食品工業(yè)設(shè)備、生活用水氧化劑陽離子去污劑（四胺基化合物）醫(yī)療器械、食品、制酪設(shè)備與磷脂作用環(huán)氧乙烷（氣體）實驗室中的熱敏感材料如塑料烷基化試劑臭氧飲用水強氧化劑12/6/202366七．微生物的觀察12/6/2023671．細菌的染色原理：細菌是無色透明的。在光學(xué)顯微鏡下，菌體與其背景相差很小，不易看清細菌的形態(tài)和結(jié)構(gòu)，故通常要對細菌用染料染色，以增加菌體與背景的反差，便于在光學(xué)顯微鏡下觀察。12/6/202368細菌染色所用的染料，按其所帶電荷狀態(tài)分，堿性染料和酸性染料。堿性染料：結(jié)晶紫、龍膽紫、堿性品紅（復(fù)紅）、蕃紅、美藍、甲基紫、中性紅、孔雀綠等。酸性染料：酸性品紅、剛果紅、曙紅等。在通常的培養(yǎng)條件下細菌帶負電，堿性染料帶正電荷，易與菌體的酸性物質(zhì)（帶負電荷的細胞成分有核酸和酸性多糖）牢固地結(jié)合。所以，多采用堿性染料染色。只有在分枝桿菌屬（Myoobaoterium）或諾卡氏菌屬(Macardia)中的一些菌才能用酸性染料（石碳酸品紅）染色（抗酸性染色）。12/6/202369方法簡單染色和復(fù)合染色法。簡單（單）染色法只用一種染料染菌體，目的僅為增加反差，便于觀察。復(fù)合（雜）染色法是用兩種染料染色，以區(qū)別不同細菌的革蘭氏染色反應(yīng)或抗酸性染色反應(yīng)；或?qū)⒕w和某一結(jié)構(gòu)染成不同顏色，便于觀察。12/6/202370革蘭氏染色法革蘭氏染色是最普通的細菌染色之一，根據(jù)它們細胞壁的結(jié)構(gòu)，把細菌分成兩類。革蘭氏陽性細菌細胞圍繞原生質(zhì)膜的外膜是由厚的肽聚糖層組成。革蘭氏陰性細菌只有一個薄的外部的肽聚糖層，但在其外面還有第二層胞壁外膜。革蘭氏陽性細菌用乙醇沖洗時保留了結(jié)晶紫和碘的復(fù)合物，因此光學(xué)顯微鏡下呈現(xiàn)紫色。革蘭氏陰性細菌由于它們失去了結(jié)晶紫和碘的復(fù)合物，并且吸收了較淺的石炭酸復(fù)紅，復(fù)染成粉紅色。12/6/202371革蘭氏染色法12/6/202372（1）用接種環(huán)取少量細菌在干凈的載玻片上涂布、固定。（2）用草酸銨結(jié)晶紫染色。（3）用弱酸性媒劑碘―碘化鉀溶液媒染。（4）用中性脫色劑，如乙醇或丙酮脫色，能被脫色的叫革蘭氏陰性菌，其菌體無色；不能被脫色的叫革蘭氏陽性菌，其菌體呈紫色。（5）以上四步已能區(qū)分兩大類細菌，為了使革蘭氏陰性菌易被觀察，還需用與草酸銨結(jié)晶紫顏色鮮明對比的品紅或蕃紅復(fù)染。經(jīng)脫色的革蘭氏陰性菌被染上紅色，沒有脫色的革蘭氏陽性菌染不上紅色，仍呈紫色。革蘭氏染色法步驟12/6/202373八．微生物的分離

12/6/202374細菌的純培養(yǎng)實驗室中通常需要細菌的純培養(yǎng)，即所有的細胞都來自同一個最初的細菌。采用劃線平板法和傾注平板法接種細菌到瓊脂平板以獲得彼此分離的單個細菌細胞。經(jīng)合適溫度培養(yǎng)后，每一個細菌形成一個肉眼可見的菌落，含有相當(dāng)于109個細菌細胞。12/6/202375

劃線劃線燒接種環(huán)

燒接種環(huán)滅菌通過本生煤氣燈培養(yǎng)后的單個

菌落

燒接種環(huán)劃線

劃線分離細菌培養(yǎng)物為單菌落的示意圖

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轉(zhuǎn)移1ml轉(zhuǎn)移1ml轉(zhuǎn)移1ml加1ml菌液計數(shù)

10-110-210-310-40.1ml涂布平板計數(shù)太多62個菌落計數(shù)太少菌落數(shù)目×稀釋倍數(shù)＝細胞數(shù)（菌落形成單位，CFU）／ml原菌液62×103×10（吸取0.1ml到平板）＝6.2×105CFU/ml12/6/202377微生物檢驗的質(zhì)量控制

12/6/202378前言

在實際工作中存在許多復(fù)雜因素影響微生物學(xué)檢驗，可能給檢驗結(jié)果帶來偏差甚至錯誤，因此必須對影響檢驗結(jié)果的諸多因素采取控制手段保證檢驗結(jié)果的正確性，不斷完善微生物檢驗的質(zhì)量控制。

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主要內(nèi)容1檢驗人員

2儀器、設(shè)備

3檢驗培養(yǎng)基、試劑

4檢驗環(huán)境

5采樣

6樣品的接收和預(yù)處理

7檢驗質(zhì)量

8校驗的執(zhí)行

9參考菌株及其保存

10實驗室內(nèi)外部質(zhì)量控制11檢驗報告及結(jié)果質(zhì)量控制12/6/2023801檢驗人員

（1）微生物檢驗不能完全依賴全自動鑒定儀器，檢驗工作中每一步驟均需要有高度的主觀分析和判斷能力，與個人的經(jīng)驗、技能和微生物檢驗基礎(chǔ)知識水平密切相關(guān)。（2）除要求微生物檢驗人員必須具備嚴肅認真的工作態(tài)度、精密細致的觀察和操作習(xí)慣，注重個人衛(wèi)生外，還必須熟練掌握微生物學(xué)檢驗技術(shù)。

12/6/2023811檢驗人員

（3）檢驗人員應(yīng)執(zhí)行上崗前培訓(xùn)制度，上崗前培訓(xùn)合格方能上崗操作，還要主動參加學(xué)習(xí)、培訓(xùn)、講座，學(xué)習(xí)新技術(shù)，掌握微生物學(xué)檢驗方法、標(biāo)準(zhǔn)及相關(guān)法律法規(guī)；（4）參與編寫測試程序及儀器操作程序，學(xué)習(xí)質(zhì)量保證體系知識和計量學(xué)基本知識；

12/6/2023821檢驗人員

（5）參加各類水平測試和盲樣測試，提高檢測水平和分析問題、解決問題的能力；（6）微生物學(xué)檢驗室負責(zé)人應(yīng)定期對檢驗人員進行專業(yè)知識和操作熟練程度的考核，提高檢驗人員的素質(zhì)。

12/6/2023832儀器、設(shè)備

大型微生物檢驗室的主要儀器及設(shè)備包括：無菌室、微生物自動鑒定儀、微生物快速初篩儀、顯微鏡、菌落計數(shù)器、高壓滅菌器、干熱滅菌器、離心機、蒸餾設(shè)備、培養(yǎng)箱、厭氧箱、水浴箱、冰箱、超凈工作臺、酶標(biāo)儀、洗板機、PCR儀、電泳儀、凝膠成像系統(tǒng)等。

12/6/2023842儀器、設(shè)備

要求所有的儀器和設(shè)備均應(yīng)按照生產(chǎn)廠家提供的方法和有關(guān)規(guī)定正確使用。需要強制性定期檢定的儀器和設(shè)備，經(jīng)符合資歷的計量部門校準(zhǔn)合格后方可使用。對于常用的貴重儀器和設(shè)備，在使用前應(yīng)加以檢查，使用后要登記，要做到定期維護，以保證儀器處于良好的工作狀態(tài)。

12/6/2023852.1高壓滅菌器（1）操作人員應(yīng)了解蒸氣滅菌的原理并遵守操作規(guī)則。（2）放入的滅菌物品不宜放得過擠。（3）使用時，放入必要的監(jiān)視指標(biāo)，可選用121℃、15min或121℃、30min監(jiān)視指標(biāo)。（4）生物指標(biāo)為嗜熱脂肪芽胞桿菌的耐受性（121℃，15min）。（5）滅菌后，再培養(yǎng)觀察有無細菌生長。（6）也可采用水銀留點溫度計進行校準(zhǔn)。12/6/2023862.2干熱滅菌器（1）應(yīng)遵守操作規(guī)則，放入箱內(nèi)滅菌的器皿不宜放得過擠，器皿與內(nèi)層底板不能直接接觸。（2）滅菌完畢，不能立即開門取物，須關(guān)閉電源，待溫度自動下降至50℃以下再開門取物。（3）帶有紙包裝的物品滅菌溫度不能超過160℃。12/6/2023872.3培養(yǎng)箱（1）箱內(nèi)不應(yīng)放入過熱或過冷的物品，取放物品時，應(yīng)隨手關(guān)閉箱門，以維持恒溫。（2）如培養(yǎng)物不慎潑灑到箱內(nèi)，馬上清潔，需消毒的馬上消毒。（3）培養(yǎng)物不宜與培養(yǎng)箱最底層直接接觸。（4）必要時，可放入裝水容器以維持箱內(nèi)的濕度。（5）每天記錄溫度及濕度的變化，觀察培養(yǎng)箱內(nèi)溫度與設(shè)定溫度是否一致。在兩次計量周期之間要進行內(nèi)部校準(zhǔn)。12/6/2023882.5顯微鏡按說明進行操作。使用油鏡后先用擦鏡紙擦去鏡頭上的油，再用沾上二甲苯的擦鏡紙擦拭，最后用干凈擦鏡紙擦干。注意防塵，保持清潔、干燥。12/6/2023892儀器、設(shè)備

實驗室需要使用的無菌器具應(yīng)能正確實施滅菌，無菌器具和器皿有明顯標(biāo)識，以便與非無菌器具和器皿加以區(qū)別。

12/6/2023903檢驗培養(yǎng)基、試劑

3.1培養(yǎng)基微生物學(xué)檢驗所用干粉培養(yǎng)基，必須由專業(yè)廠家生產(chǎn)，產(chǎn)品質(zhì)量必須符合有關(guān)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，保存也應(yīng)符合要求，防止潮解、結(jié)塊等。干粉培養(yǎng)基易受潮變性，需要重視。

12/6/2023913.1培養(yǎng)基

為保證干粉培養(yǎng)基質(zhì)量指標(biāo)，在實際工作中應(yīng)注意：（1）加強包裝的密封性能；（2）使用時盡量縮短開蓋時間；（3）一般干性培養(yǎng)基放在低溫干燥的環(huán)境中保存，對于易受潮的品種，啟用后宜放入干燥器中保存；（4）由于配制水分不同、啟用次數(shù)或時間增加，干粉培養(yǎng)基的pH值可能會有所變化，應(yīng)隨時略加調(diào)整。12/6/2023923.1培養(yǎng)基

干粉培養(yǎng)基所要求的理化指標(biāo)，可以從下面幾個方面進行初步檢查：（1）干粉培養(yǎng)基應(yīng)為疏松顆粒狀或粉末狀，顏色正常、一致；（2）溶解后清徹透明，無沉淀；（3）45℃時pH值為7.2士0.2；熔化溫度70℃左右，凝固溫度為35-40℃；（4）水分含量符合標(biāo)準(zhǔn)。12/6/2023933.1培養(yǎng)基

商品化帶培養(yǎng)基的平皿應(yīng)對所用培養(yǎng)基作外觀檢查，如培養(yǎng)基是否開裂、平皿有無破碎、血平板有否溶血、有否冰凍、灌注是否均勻、有否過多的氣泡，清晰度和有無污染也需要檢查。培養(yǎng)基平皿的制備商必須按照標(biāo)準(zhǔn)隨產(chǎn)品附上書面鑒定資料，實驗室應(yīng)將此鑒定書保存一定時期。12/6/2023943.1培養(yǎng)基

實驗室自制培養(yǎng)基應(yīng)有質(zhì)量控制，包括：制備數(shù)量制備日期有效日期制備者姓名還必須檢查：培養(yǎng)基顏色均勻度厚度光潔度溶血與否有否過多氣泡是否污染

12/6/2023953.1培養(yǎng)基

培養(yǎng)基的配制應(yīng)嚴格按照標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的方法進行操作，并做好原始記錄。為保證培養(yǎng)基質(zhì)量，在配制時應(yīng)注意：制備培養(yǎng)基必須在玻璃容器、搪瓷缸或鋁鍋中進行，如用銅、鐵器皿，會對微生物生長有毒害作用；配制培養(yǎng)基時應(yīng)按檢驗項目規(guī)定的配方添加，不得隨意增減或更改培養(yǎng)基成分。

12/6/2023963.1培養(yǎng)基

此外，要用專用的角匙取藥品，避免交叉污染而影響檢驗結(jié)果；培養(yǎng)基配制最好用蒸餾水或去離子水，避免使用自來水，因其中含有氯等抗菌物質(zhì)；不同類型的微生物對pH值的要求不同，配制培養(yǎng)基時應(yīng)測調(diào)pH值，如測定結(jié)果與所要求的pH值不符，則用lMNaOH或lMHCl溶液進行調(diào)節(jié)。

12/6/2023973.1培養(yǎng)基

制備好的培養(yǎng)基應(yīng)及時使用，使用不完的，如無特殊需求，可室溫或低溫2-8℃保存。

如用塑料袋密封，保存期可延長，有產(chǎn)酸、產(chǎn)氣等被污染跡象或干裂現(xiàn)象的則不能再使用。

12/6/202398表1培養(yǎng)基在2-8℃條件下保存的有效期培養(yǎng)基種類保存條件有效期平板培養(yǎng)基不裝塑料袋2周塑料袋密封8周試管（棉塞）培養(yǎng)基不裝塑料袋2周-1個月塑料袋密封2個月試管（螺旋蓋）培養(yǎng)基不裝塑料袋2個月塑料袋密封4個月12/6/2023993.1培養(yǎng)基

每批自制培養(yǎng)基必須做無菌試驗和規(guī)定的質(zhì)控菌株測試，對各種不同培養(yǎng)基規(guī)定了專門的質(zhì)控測試菌株。無菌培養(yǎng)試驗可將無菌的培養(yǎng)基放入37℃的培養(yǎng)箱培養(yǎng)24～48小時(對于細菌培養(yǎng)基)或放入28℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5-7天(對于細菌培養(yǎng)基以外的其它培養(yǎng)基)，以檢查滅菌是否徹底。12/6/20231003.1培養(yǎng)基

效果試驗是指按不同的培養(yǎng)基接種相應(yīng)的菌株，觀察細菌的發(fā)育、菌落形態(tài)、色素、溶血等特征，據(jù)此判斷培養(yǎng)基是否符合要求。

12/6/2023101表2常見培養(yǎng)基的質(zhì)量控制注：+發(fā)育良好;—發(fā)育差或不生長培養(yǎng)基質(zhì)控菌株細菌發(fā)育情況觀察指標(biāo)普通瓊脂大腸埃希氏菌+典型菌落

表皮葡萄球菌+典型菌落SS瓊脂大腸埃希氏菌—不分解乳糖

鼠傷寒沙門氏菌+不分解乳糖，菌落無色，中心黑色

福氏痢疾桿菌+不分解乳糖，菌落無色透明12/6/2023102表2常見培養(yǎng)基的質(zhì)量控制注：+發(fā)育良好；—發(fā)育差或不生長培養(yǎng)基質(zhì)控菌株細菌發(fā)育情況觀察指標(biāo)

福氏痢疾桿菌+腸球菌—

甘露醇高鹽瓊脂金黃色葡萄球菌+不分解乳糖，菌落無色透明分解甘露醇，菌落黃色

表皮葡萄球菌+不分解甘露醇，菌落藍色普通變形桿菌—麥康凱培養(yǎng)基大腸埃希氏菌+分解乳糖，菌落紅色12/6/2023103表2常見培養(yǎng)基的質(zhì)量控制注：+發(fā)育良好；—發(fā)育差或不生長培養(yǎng)基質(zhì)控菌株細菌發(fā)育情況觀察指標(biāo)

綠色鏈球菌+

明顯的甲型溶血環(huán)肉浸湯表皮葡萄球菌+

兔血肉湯溶血性鏈球菌

+GN肉湯大腸桿菌:福氏志賀氏菌=1:1，6小時后轉(zhuǎn)種

大腸桿菌被抑制，福氏志賀氏菌生長良好羊血瓊脂溶血性鏈球菌明顯的乙型溶血環(huán)+12/6/2023104表2常見培養(yǎng)基的質(zhì)量控制注：+發(fā)育良好；—發(fā)育差或不生長培養(yǎng)基質(zhì)控菌株細菌發(fā)育情況觀察指標(biāo)

中國藍瓊脂大腸埃希氏菌+分解乳糖，菌落藍色

福氏痢疾桿菌+不分解乳糖，菌落淡紅、透明西蒙氏枸櫞酸鹽培養(yǎng)基產(chǎn)氣腸桿菌+

大腸埃希氏菌—

Christensen枸櫞酸鹽培養(yǎng)基產(chǎn)氣腸桿菌+

宋內(nèi)氏痢疾桿菌—

12/6/20231053.2檢驗試劑及藥品檢驗藥品、試劑須在分析純(AR)級以上。在利用藥品、試劑配制標(biāo)準(zhǔn)溶液、染色液、緩沖液及其他試劑時應(yīng)注意：(1)按要求選取溶劑；(2)用帶塞的試劑瓶盛裝；(3)易分解的試劑宜用棕色瓶；(4)揮發(fā)性的試劑其瓶口應(yīng)予密封；(5)如發(fā)現(xiàn)溶液有變質(zhì)現(xiàn)象，應(yīng)停止使用；(6)標(biāo)準(zhǔn)溶液應(yīng)定時標(biāo)定。12/6/20231063.2檢驗試劑及藥品實驗室內(nèi)保存的試劑應(yīng)定期進行清點，陳舊或損壞的試劑應(yīng)棄去；注意保存試劑的使用有效期以及最佳保存方式。12/6/20231073.3染色液染色液配制后，必須選用適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)菌株作陽性及陰性對照來鑒定染色液的性能，如革蘭氏染色選用枯草桿菌、葡萄球菌和大腸桿菌作為對照，鞭毛染色液采用普通變形桿菌和福氏志賀氏菌作為對照。對經(jīng)驗不足者，每次染色時均應(yīng)作對照染色。12/6/20231083.4診斷血清沙門氏菌屬、志賀氏菌屬、致病性大腸埃希氏菌等診斷血清，使用時應(yīng)注意有效期及效價。每月用相應(yīng)的菌株檢查其有效性，過期血清和變混濁的血清不應(yīng)繼續(xù)使用。診斷血清一般放普通冰箱內(nèi)保存，使用時應(yīng)以最短的時間暴露于空氣中。最好備有兩個生物制品研究所生產(chǎn)的診斷血清，以便互相對照，檢查其可靠性。12/6/20231094檢驗環(huán)境

微生物學(xué)檢驗均在檢驗室進行，既不能讓微生物散布出去，又必須使樣品不再受污染，更不能允許病原菌感染檢驗人員，為此，檢驗室的環(huán)境要求和衛(wèi)生管理制度非常重要。實驗室總體布局和各部位的安排應(yīng)減少潛在的對樣本的污染和對人員的危害。12/6/20231104檢驗環(huán)境微生物學(xué)檢驗室要求內(nèi)外環(huán)境整潔，布局合理，操作區(qū)域與辦公區(qū)域分開。洗滌室、培養(yǎng)室、消毒間、無菌室應(yīng)分開，設(shè)有專室。無菌室要設(shè)有套間或緩沖間，最好設(shè)推拉門，以防空氣振蕩過大。微生物檢驗室應(yīng)備有自動或腳踩式洗手池和固定的消毒設(shè)施。12/6/20231114檢驗環(huán)境微生物檢驗室應(yīng)制定合理、完善的衛(wèi)生管理制度，工作人員必須每天堅持做好環(huán)境衛(wèi)生工作，防止灰塵飛揚，定期對操作環(huán)境進行消毒。對經(jīng)培養(yǎng)后的培養(yǎng)基、培養(yǎng)液、用過的檢樣及其他廢棄物，應(yīng)投入指定的容器內(nèi)，經(jīng)無害化處理后方可排放，禁止亂扔亂放，以防某些病原微生物散布。12/6/20231124檢驗環(huán)境對需在無菌條件下工作的區(qū)域應(yīng)以明確標(biāo)識并能有效地控制、監(jiān)測和記錄。檢驗人員應(yīng)待無菌室過濾凈化裝置開機0.5－1h后，再進入無菌室工作；每天記錄環(huán)境檢測報告，并經(jīng)常進行空氣落菌實驗：空氣落菌以營養(yǎng)瓊脂開上皿15min后蓋上蓋子，36±1℃培養(yǎng)48h計數(shù)；定期對無菌室進行室內(nèi)環(huán)境消毒，空氣消毒可采用甲醛熏蒸法，甲醛與高錳酸鉀比例2:1。12/6/20231135采樣

（1）采樣工具和容器宜選用耐消毒滅菌的材料，如玻璃、陶瓷、搪瓷、鋁、不銹鋼、牛皮紙等，使用之前應(yīng)進行認真清洗、干燥和相應(yīng)的滅菌處理。采樣工具和容器不能用消毒劑消毒，樣品中也不得加入防腐劑，以免影響檢驗結(jié)果的正確性。（2）在嚴格無菌操作的條件下，按國家規(guī)定的樣品采集標(biāo)準(zhǔn)均勻而準(zhǔn)確地取樣，并及時封口，使樣品具有準(zhǔn)確性和代表性。

12/6/20231145采樣

（3）每件樣品封口后，貼上標(biāo)簽，做好記錄(如樣品名稱、采樣地點、時間、數(shù)量、儲藏情況、采集或送檢單位及姓名、采樣現(xiàn)場溫度、濕度及衛(wèi)生狀況等)。采集后的樣品，一般可保存在0-5℃的環(huán)境中，如果樣品是冷凍食品，應(yīng)保持在冷凍狀態(tài)，并及時送檢。（4）采樣數(shù)量不能少于全部檢驗需要量的3倍，以供檢驗、復(fù)檢、備查。

12/6/20231156樣品的接收和預(yù)處理

樣品送達實驗室時，應(yīng)檢查樣品標(biāo)記是否與樣品相符，樣品包裝狀況是否正常。若存在下述情況，應(yīng)考慮拒收樣品：（1）抽樣后樣品送達實驗室的時間太遲，使其不能在規(guī)定的時間內(nèi)進行檢驗；（2）樣品溫度太高；（3）在轉(zhuǎn)運中樣品遭到破損或受到污染。

12/6/20231166樣品的接收和預(yù)處理

若對這些樣品進行分析，應(yīng)將情況記錄并在分析報告中加以說明。檢驗前，冷凍食品應(yīng)在最高溫度為4℃下解凍，不超過18h；較小、易解凍的樣品可放置于最高溫度為37℃的恒溫箱內(nèi)最長達15min。

12/6/20231176樣品的接收和預(yù)處理

微生物學(xué)檢驗室在收到樣品后，必須及時準(zhǔn)備條件、組織力量進行檢驗。送檢的樣品，一般需保持在0～5℃的環(huán)境中，對于冷凍食品應(yīng)保持在冷凍狀態(tài)，直到檢驗為止。

12/6/20231186樣品的接收和預(yù)處理

凍藏的樣品應(yīng)盡快放在冷藏的溫度下解凍，亦可放在適宜溫度(37℃)下短時間(15min)使其解凍，但溫度必須較低，以防止病原菌死亡。凍結(jié)樣品化凍時，必須小心放置于細菌生長溫度之下以免使細菌數(shù)量增加。從容器中取出樣品、稱取樣品應(yīng)注意無菌操作。12/6/20231197檢驗質(zhì)量

除按國家標(biāo)準(zhǔn)方法對所需檢驗項目進行檢測外，在實際工作中還應(yīng)注意以下幾個方面，否則會影響檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確性：12/6/20231207檢驗質(zhì)量

（1）在定量檢驗時用重量法還是用體積法，檢驗結(jié)果會有誤差，因為比重不等于1的樣品，1ml和1g的化驗結(jié)果絕不會相等。一般固態(tài)的樣品宜用重量法，液體樣品宜用體積法。但對于粘性液體(如酸牛奶)，如用體積法，會粘附一定量的樣品在吸管上，因此此類樣品最好用重量法。

12/6/20231217檢驗質(zhì)量（2）如檢樣需用無菌水或無菌生理鹽水稀釋，則最好用勻質(zhì)器或組織搗碎機，以8000～10000轉(zhuǎn)/min的轉(zhuǎn)速處理1min，制成均勻的菌懸液。

12/6/20231227檢驗質(zhì)量（3）樣品稀釋時，常會滯留少量樣品在吸管內(nèi)外，應(yīng)多加注意。吸管插入樣品或稀釋液中應(yīng)深淺一致，否則會影響檢驗結(jié)果；吸入液體后，應(yīng)沿管壁慢慢注入遞增的稀釋液中，特別注意此時吸管尖端切不可碰到稀釋液中。

12/6/20231237檢驗質(zhì)量（4）在培養(yǎng)基傾注入檢樣、菌懸液時，注意培養(yǎng)基溫度宜在45-50℃之間，并使培養(yǎng)基與檢樣、菌懸液充分混合。（5）微生物培養(yǎng)時，應(yīng)根據(jù)要求選擇正確的培養(yǎng)溫度和時間。

12/6/20231247檢驗質(zhì)量

（6）應(yīng)用無菌水或無菌生理鹽水作空白對照，如果在空白對照中檢出細菌，則可認為培養(yǎng)基質(zhì)量存在問題或在操作過程中存在污染情況。另外，采用標(biāo)準(zhǔn)菌種作陽性對照，觀察培養(yǎng)基的質(zhì)量情況。12/6/20231257檢驗質(zhì)量（7）整個檢驗過程應(yīng)嚴格遵守?zé)o菌操作。（8）及時檢查結(jié)果，做好原始數(shù)據(jù)記錄。

12/6/20231268校驗的執(zhí)行

儀器設(shè)備檔案應(yīng)包含以下內(nèi)容:（1）儀器名稱、編號、啟用日期。（2）常規(guī)校驗的方法和校驗周期。（3）可以接受的操作范圍。（4）儀器功能上的缺陷，如有克服缺陷的步驟應(yīng)詳細列出。（5）常規(guī)維修的日期(按制造商的推薦意見)

。12/6/20231278校驗的執(zhí)行

儀器只要不報廢，維修記錄均應(yīng)保存。實驗室應(yīng)預(yù)先制定儀器校驗計劃，并按計劃對需要強制性定期檢定的儀器和設(shè)備經(jīng)符合資歷計量部門校驗，根據(jù)校驗結(jié)果決定對儀器設(shè)備繼續(xù)使用、降級使用或停止使用。12/6/20231288校驗的執(zhí)行

實驗室可根據(jù)需要對部分儀器進行自校以節(jié)約成本，但用于自校的計量工具必須經(jīng)過計量部門校準(zhǔn)方可使用。

12/6/20231299參考菌株及其保存

參考菌株可以從國際菌種保藏中心如ATCC、國內(nèi)具資質(zhì)菌種保藏中心或室間質(zhì)控活動中獲得，準(zhǔn)確鑒定過的分離株也可使用。實驗室要準(zhǔn)備好足夠種類和數(shù)量的參考菌株，滿足培養(yǎng)基、試劑盒和試劑質(zhì)量測試的需要。

12/6/2023130表3食品微生物檢驗常用標(biāo)準(zhǔn)菌株

菌種名稱ATCC編號弗勞地枸櫞酸桿菌ATCC8090產(chǎn)氣腸桿菌ATCC13048陰溝腸桿菌ATCC23355大腸埃希氏菌ATCC25922肺炎克雷伯氏菌ATCC13883，ATCC27736普通變形桿菌ATCC13315，ATCC6380銅綠假單胞菌ATCC27853化膿性鏈球菌ATCC19615，ATCC1038012/6/2023131表3食品微生物檢驗常用標(biāo)準(zhǔn)菌株

菌種名稱ATCC編號宋內(nèi)氏志賀氏菌ATCC25931，ATCC11060福氏志賀氏菌ATCC12022金黃色葡萄球菌ATCC25923表皮葡萄球菌ATCC12228，ATCC14990鼠傷寒沙門氏菌ATCC14028，ATCC13311糞腸球菌ATCC19433溶血性鏈球菌ATCC19615粘質(zhì)沙雷氏菌ATCC810012/6/2023132表4食品微生物檢驗用于生化試驗的質(zhì)控菌株

生化試驗陽性對照菌株陰性對照菌株靛基質(zhì)試驗大腸埃希氏菌產(chǎn)氣腸桿菌甲基紅試驗大腸埃希氏菌產(chǎn)氣腸桿菌VP試驗陰溝腸桿菌大腸埃希氏菌尿素酶分解試驗奇異變形桿菌大腸埃希氏菌硫化氫產(chǎn)生試驗普通變形桿菌宋內(nèi)氏痢疾桿菌苯丙氨酸脫氨酶奇異變形桿菌大腸埃希氏菌丙二酸鹽利用試驗肺炎克雷伯菌或亞利桑那沙門氏菌大腸埃希氏菌12/6/2023133表4食品微生物檢驗用于生化試驗的質(zhì)控菌株生化試驗陽性對照菌株陰性對照菌株賴氨酸脫羧酶鼠傷寒沙門氏菌或粘質(zhì)沙雷氏菌普通變形桿菌鳥氨酸脫羧酶鼠傷寒沙門氏菌或奇異變形桿菌普通變形桿菌精氨酸雙水解酶鼠傷寒沙門氏菌或陰溝腸桿菌普通變形桿菌鄰位硝基苯β-D半乳糖苷大腸埃希氏菌奇異變形桿菌12/6/2023134表4食品微生物檢驗用于生化試驗的質(zhì)控菌株

生化試驗陽性對照菌株陰性對照菌株明膠液化試驗銅綠假單胞菌硝酸鹽陰性桿菌硝酸鹽還原試驗銅綠假單胞菌硝酸鹽陰性桿菌凝固酶試驗（兔血漿）金黃色葡萄球菌表皮葡萄球菌觸酶試驗金黃色葡萄球菌肺炎鏈球菌膽鹽溶菌試驗肺炎鏈球菌綠色鏈球菌七葉苷分解試驗?zāi)c球菌溶血性鏈球菌6.5%氯化鈉肉湯腸球菌溶血性鏈球菌12/6/2023135表4食品微生物檢驗用于生化試驗的質(zhì)控菌株

生化試驗陽性對照菌株陰性對照菌株氧化酶試驗銅綠假單胞菌大腸埃希氏菌氰化鉀抑制試驗產(chǎn)氣腸桿菌大腸埃希氏菌Dnase試驗粘質(zhì)沙雷氏菌陰溝腸桿菌桿菌肽試驗A群鏈球菌B群鏈球菌12/6/2023136參考菌株的保存

保存菌株要定期傳代，注意無菌操作，使菌株不污染、不死亡、不丟失；應(yīng)設(shè)專人妥善保管，菌株保存箱應(yīng)加鎖放置適宜環(huán)境，取出使用應(yīng)登記；12/6/2023137參考菌株的保存

保存菌株應(yīng)建冊登記，基本項目應(yīng)包括菌種名稱、分離來源、分離日期、傳代日期、保存方法、主要性狀、保管者、領(lǐng)用者等；對保存菌種，經(jīng)傳代數(shù)次后應(yīng)進行一次系統(tǒng)生化反應(yīng)、血清學(xué)特性等生物學(xué)性狀觀察，檢查其是否發(fā)生變異。12/6/2023138參考菌株的保存常見的參考菌株保存方法如下：12/6/2023139

細菌(1)營養(yǎng)要求不高的需氧細菌在胰胨大豆瓊脂斜面上能存活1年。(2)需氧或厭氧菌的長期儲存需冷凍干燥，或存放在-70℃。(3)營養(yǎng)要求不高的凍干菌種每隔5年要解凍分離重新凍干，苛氧菌每隔3年重新凍干。(4)細菌低溫冰凍保存時可懸浮于消毒去脂牛奶、含15%甘油的胰胨大豆肉湯或無菌馬血中。12/6/2023140

真菌(1)酵母菌按營養(yǎng)要求不高的細菌同樣處理。(2)霉菌在馬鈴薯葡萄糖瓊脂斜面上4℃儲存6個月-1年，斜面上覆蓋消毒石蠟油可在室溫下長期存放。12/6/202314110實驗室內(nèi)外部質(zhì)量控制

10.1內(nèi)部質(zhì)量控制為保證實驗室連續(xù)評價結(jié)果的可靠性和精密度，必須對所用方法的重復(fù)性及再現(xiàn)性定期測定。對于不同的控制系統(tǒng)，實驗室必須建立限值，超過限值應(yīng)采取糾偏措施。12/6/202314210.1內(nèi)部質(zhì)量控制實踐中內(nèi)部質(zhì)量控制可包括：（1）系統(tǒng)地使用一式雙份的菌落計數(shù)測定；（2）由同一檢驗人員和幾個檢驗人員作平行樣；（3）定期或不定期進行盲樣測試。

12/6/202314310.2外部質(zhì)量控制

實驗室應(yīng)參加外部的質(zhì)量控制活動，對其開展的每一項檢測均應(yīng)參加相應(yīng)的室間質(zhì)量控制。對有關(guān)實驗室或管理機構(gòu)發(fā)出的測試樣品應(yīng)嚴格地當(dāng)作普通樣品一樣處理，這樣一種方法有助于實驗室每天測試的準(zhǔn)確性和重復(fù)性，是對實驗室所用的方法、試劑、設(shè)備和人員能力的測試。

12/6/202314410實驗室內(nèi)外部質(zhì)量控制

從室間樣品測試中的錯誤可以發(fā)現(xiàn)實驗室的不足之處，對工作人員的教育改進可以提高實驗室的檢測質(zhì)量。對返回的室間測定評級中存在的問題應(yīng)當(dāng)召集全體員工討論，改進措施(包括方法的改變、員工的改變、員工的再訓(xùn)練、培養(yǎng)基和試劑購買來源的更換等)應(yīng)當(dāng)記錄在案。12/6/202314510實驗室內(nèi)外部質(zhì)量控制

某些項目缺少室間質(zhì)量控制，實驗室可以設(shè)置室內(nèi)質(zhì)量控制，每半年自行評估一次。經(jīng)常參加微生物實驗室室間質(zhì)控活動，有助于加強檢測人員的基本功訓(xùn)練，增強樣品檢測過程中“量”的概念。實驗室間的質(zhì)控可在國內(nèi)外范圍進行，有能力的實驗室應(yīng)力爭參加國際間質(zhì)控活動，樹立良好的檢驗信譽。

12/6/202314611檢驗報告及結(jié)果質(zhì)量控制

對原始數(shù)據(jù)進行整理，用回歸分析法和方差分析法進行處理，去除不必要的誤差，獲得準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)，編制微生物學(xué)檢驗報告考慮引入不確定度概念。

12/6/202314711檢驗報告及結(jié)果質(zhì)量控制原始數(shù)據(jù)要求：主題明確——符合檢樣要求和分析目的；內(nèi)容準(zhǔn)確——定性判斷和定量計算應(yīng)準(zhǔn)確無誤；文字簡明——文字、表格簡潔明了，表達適當(dāng)；書寫清楚——菌類名稱(學(xué)名)、有關(guān)數(shù)字及其它文字說明必須書寫清楚。12/6/202314811檢驗報告及結(jié)果質(zhì)量控制

應(yīng)注意檢驗結(jié)果應(yīng)與衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的表示方法一致，定量檢測以N×10n表示，不宜用基數(shù)字表示，N為兩位有效數(shù)字；對定性檢測的報告，一定要用漢字“陽性”或“陰性”表示。

12/6/202314911檢驗報告及結(jié)果質(zhì)量控制

上述的微生物學(xué)檢驗報告，必須經(jīng)過規(guī)定的手續(xù)進行復(fù)查，并對照各類標(biāo)準(zhǔn)對微生物學(xué)質(zhì)量進行全面準(zhǔn)確的評價和作出合理的解釋。有關(guān)人員簽字后，加蓋檢驗單位印章，以示生效。這樣，才能使檢驗結(jié)果既有法律依據(jù)又有學(xué)術(shù)依據(jù)。12/6/2023150結(jié)語

微生物檢驗的質(zhì)量控制比較復(fù)雜，目前尚無統(tǒng)一規(guī)范，國內(nèi)各實驗室條件參差不齊，開展此項工作任重道遠。要使微生物檢驗的質(zhì)量控制日臻完善，仍需廣大微生物檢驗人員共同努力。

12/6/2023151殺菌和抑菌試驗制作人：質(zhì)量人12/6/2023152一、總則適用范圍：本方法適用于醫(yī)療、衛(wèi)生、食品等行業(yè)的殺菌和抑菌試驗。引用標(biāo)準(zhǔn)：消毒技術(shù)規(guī)范200212/6/2023153二、術(shù)語消毒disinfection

殺滅或清除傳播媒介上病原微生物,使其達到無害化的處理。滅菌sterilization

殺滅或清除傳播媒介上一切微生物的處理。消毒劑disinfectant

用于殺滅傳播媒介上的微生物使其達消毒或滅菌要求的制劑。

滅菌劑sterilant

可殺滅一切微生物(包括細菌芽孢)使其達到滅菌要求的制劑。12/6/2023154二、術(shù)語殺滅時間killingtime,KT用于生物指示物抗力鑒定時,指受試指示物樣本，經(jīng)殺菌因子作用不同時間后,培養(yǎng)后的全部樣本均無菌生長的最短作用時間(min)殺滅率killingrate,KR

在微生物殺滅試驗中，用百分率表示微生物數(shù)量減少的值，以其表達殺滅效果。滅對數(shù)值killinglogvalue微生物數(shù)量以對數(shù)表示時，消毒后與消毒前比較,以其減少的對數(shù)值來表達殺滅效果。12/6/2023155

三、菌懸液與菌片的制備

（一）、試驗前應(yīng)選擇合適的細菌，在下述規(guī)定中表中‘+’為必做試驗的微生物，根據(jù)消毒劑特定用途或試驗特殊需要，還可增選其他菌株。金黃色葡萄球菌綠膿桿菌大腸桿菌白色念珠菌枯草桿菌黑色變種芽孢手皮膚和粘膜

++++空氣+醫(yī)療器械和用品++++一般物品表面和織物+食(飲)具++飲水和游泳池水

+12/6/2023156三、菌懸液菌片的制備（二）、試驗器械A(chǔ).無菌蒸餾水B.細菌培養(yǎng)基：胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基（TSA），胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基（TSB）和營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基等C.刻度吸管（1.0ml、5.0ml、10.0ml），毛細吸管。D.數(shù)字可調(diào)移液器（10μl~200μl）及配套用一次性塑料吸頭。E.濁度計。F.游標(biāo)卡尺。12/6/2023157三、菌懸液菌片的制備（三）、細菌繁殖體懸液的制備1）取凍干菌種管，在無菌操作下打開，以毛細吸管加入適量營養(yǎng)肉湯，輕柔吹吸數(shù)次，使菌種融化分散。取含5.0ml～10.0ml營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基試管，滴入少許菌種懸液，置37℃培養(yǎng)18h～24h。用接種環(huán)取第1代培養(yǎng)的菌懸液，劃線接種于營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板上，于37℃培養(yǎng)18h～24h。挑取上述第2代培養(yǎng)物中典型菌落，接種于營養(yǎng)瓊脂斜面，于37℃培養(yǎng)18h～24h，即為第3代培養(yǎng)物。2）取菌種第3代～14代的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基斜面新鮮培養(yǎng)物（18h～24h），用5.0ml吸管吸取3.0ml～5.0ml稀釋液加入斜面試管內(nèi)，反復(fù)吹吸，洗下菌苔。隨后，用12/6/2023158三、菌懸液菌片的制備5.0ml吸管將洗液移至另一無菌試管中，用電動混合器混合（振蕩）20s，或在手掌上振敲80次，以使細菌懸浮均勻。3）初步制成的菌懸液，先用細菌濃度比濁測定法粗測其含菌濃度，然后以稀釋液稀釋至所需使用的濃度。4）細菌繁殖體懸液應(yīng)保存在4℃冰箱內(nèi)備用。應(yīng)當(dāng)天使用不得過夜。5）懷疑有污染時，應(yīng)以菌落形態(tài)、革蘭染色與生化試驗等法進行鑒定。12/6/2023159四、菌片的制備程序1）滴染法染菌時，先用濁度計測定的菌懸液濃度，調(diào)至含菌量為1～5×108cfu/ml將經(jīng)滅菌的載體片平鋪于無菌平皿內(nèi)，菌液滴加量每片為10μl。用10μl移液器接滅菌塑料吸頭，滴染菌液，并用接種環(huán)涂勻整個載體表面。滴染菌液后，染菌載體可置37℃溫箱內(nèi)烤干（約20min～30min），或置室溫下自然陰干后再使用。2）每個菌片的染菌量，即回收菌數(shù)，按活菌培養(yǎng)計數(shù)所得結(jié)果，應(yīng)為5×105cfu/片～5×106cfu/片。3）配制菌懸液和制備菌片時，保持環(huán)境的潔凈和安靜，嚴格按無菌要求操作，以防污染雜菌，影響隨后殺菌試驗的結(jié)果。12/6/2023160五、活菌培養(yǎng)計數(shù)技術(shù)

1）取含5.0ml稀釋液無菌試管，對菌片或小型固體樣本直接投入即可，對棉拭則將其采樣端剪入管內(nèi)，每管一份樣本。而后，用手掌上用力振敲80次，形成菌懸液。2）將