流式細(xì)胞儀分析技術(shù)及應(yīng)用

流式細(xì)胞術(shù)1精選ppt主要內(nèi)容數(shù)據(jù)的顯示與分析1流式細(xì)胞儀的原理2流式細(xì)胞儀免疫分析的技術(shù)要求

3流式細(xì)胞術(shù)在免疫檢查中的應(yīng)用

42精選ppt流式細(xì)胞術(shù)〔flowcytometry，F(xiàn)CM〕是以流式細(xì)胞儀作為檢測工具，結(jié)合激光光學(xué)、計算機(jī)、電子物理學(xué)、流體力學(xué)、細(xì)胞化學(xué)和免疫學(xué)等學(xué)科的理論與技術(shù)，對于處在快速直線流動狀態(tài)中的細(xì)胞或生物顆粒同時進(jìn)行多參數(shù)、快速定量分析和分選的高新技術(shù)研究對象為生物顆粒，如各種細(xì)胞、微生物及人工合成微球等3精選ppt第一節(jié)流式細(xì)胞術(shù)的分析及分選原理

光學(xué)系統(tǒng)測試原理流式細(xì)胞儀電子系統(tǒng)液流系統(tǒng)光學(xué)原理光電轉(zhuǎn)換原理4精選ppt激光光電倍增管放大電路流式細(xì)胞儀是集多種技術(shù)為一體的新型高科技儀器激光技術(shù)單克隆抗體技術(shù)細(xì)胞熒光化學(xué)技術(shù)光電測量技術(shù)電子物理技術(shù)電子計算機(jī)技術(shù)能對于處在快速直線流動狀態(tài)中的細(xì)胞或生物顆粒同時進(jìn)行多參數(shù)、快速定量分析和分選5精選ppt一、流式細(xì)胞儀分析的工作原理

熒光顯微鏡技術(shù)單克隆抗體與熒光染料技術(shù)計算機(jī)技術(shù)處理光信號激發(fā)光源改為激光提高檢測靈敏度和特異性

提高檢測速度和統(tǒng)計分析精確性

6精選ppt〔一〕流式細(xì)胞儀根本結(jié)構(gòu)包括流動室〔flowchamber〕和液流驅(qū)動系統(tǒng)作用：依次傳送待測樣本中的細(xì)胞到激光照射區(qū)理想狀態(tài)：細(xì)胞逐個傳送到激光束的中心，而且在特定的時間內(nèi)，應(yīng)該只有一個細(xì)胞或生物微粒通過激光束。1液流系統(tǒng)7精選ppt流動室和液流驅(qū)動系統(tǒng)

8精選ppt流動室——儀器的核心部件，待測樣品與激光在這里相交，通常由有機(jī)玻璃、光學(xué)玻璃或石英等制成。流動室內(nèi)充滿了鞘液，使細(xì)胞排成單列進(jìn)入流動室噴嘴口，形成細(xì)胞液柱。9精選pptFCM的液流系統(tǒng)〔如何形成單個細(xì)胞流〕樣本管鞘液管10精選ppt液流驅(qū)動系統(tǒng)：包括壓縮空氣泵、壓力傳感器、鞘液過濾器和樣本壓力調(diào)節(jié)器等。常用的液流系統(tǒng)中細(xì)胞流和鞘液流的驅(qū)動一般采用正壓的方法控制的，保證了鞘液的流速恒定。鞘液以勻速通過流動室，因此整個液流系統(tǒng)運(yùn)行流速是不變的。11精選ppt包括激發(fā)光源、分光鏡、光束成形器、透鏡組和光電倍增管。流式細(xì)胞儀的測定是基于對光信號的檢測來實現(xiàn)的，因此光學(xué)系統(tǒng)是流式細(xì)胞儀中最為重要的一個系統(tǒng)。2光學(xué)系統(tǒng)12精選ppt光學(xué)系統(tǒng)13精選ppt采用高壓汞燈，廉價、激發(fā)光譜廣泛，但在單一譜線上能量較弱，且功率不夠穩(wěn)定，應(yīng)用受到一定限制弧光燈

提供單波長、高能量、高穩(wěn)定性的光照，是快速、準(zhǔn)確分析細(xì)胞微弱光的理想光源?，F(xiàn)代流式細(xì)胞儀多采用激光激光

激發(fā)光源14精選ppt光學(xué)系統(tǒng)：主要由多組透鏡、濾光片和分光鏡等光學(xué)元件組成，將不同波長的光信號送入不同的探測器1〕長通濾片〔longpassfilter，LP)2〕短通濾片〔shortpassfilter，SP)3〕帶通濾片〔bandpassfilter，BP〕濾片15精選ppt長通濾片只允許特定波長以上的光通過，如LP500濾片，只允許500nm以上的光通過短通濾片與長通濾片正好相反，只允許特定波長以下的光通過，如SP500濾片，只允許500nm以下的光通過帶通濾片

只允許相當(dāng)窄波長范圍內(nèi)的光通過，濾片一般有兩個值，如BP500/50允許通過的波長范圍為475～525nm，中心值為500nm。

16精選ppt組成：光電轉(zhuǎn)換器、放大器和信號處理電路作用：將產(chǎn)生的各種光信號成比例的轉(zhuǎn)換成電信號，進(jìn)行數(shù)字化處理后轉(zhuǎn)入電子計算機(jī)進(jìn)行數(shù)據(jù)采集和分析。3電子系統(tǒng)17精選ppt高度聚焦激光束

〔二〕根本工作原理單細(xì)胞懸液

特異性熒光染料標(biāo)記抗體染色流動室檢測區(qū)

恒定氣壓鞘液噴出

高壓

細(xì)胞單行排列

特異性熒光

+散射光

18精選ppt入射光束與液柱垂直方向前向小角方向熒光信號

側(cè)向散射光信號

前向散射光信號

熒光檢測系統(tǒng)

散射光檢測系統(tǒng)

前向散射光感受器

光信號光信號電信號計算機(jī)系統(tǒng)轉(zhuǎn)換

放大

19精選ppt20精選ppt二、細(xì)胞分選原理

〔一〕分選的根本原理流式細(xì)胞儀的分選是指從細(xì)胞群體中別離出感興趣的細(xì)胞，檢測的任意參數(shù)都可作為分選時指定的細(xì)胞的依據(jù)。分選的方式有捕獲式分選和電荷式分選，目前應(yīng)用最多的是電荷式分選。21精選ppt當(dāng)單細(xì)胞懸液形成液柱通過流動室時，液柱被分割成一連串均勻的液滴。根據(jù)設(shè)定的被分選細(xì)胞的某個參數(shù)由邏輯電路判斷是否被分選。電荷式分選1

22精選ppt充電電路對選定細(xì)胞液滴充電，使其帶正電荷或負(fù)電荷，未被設(shè)定分選參數(shù)的細(xì)胞液滴那么不帶電荷。帶電細(xì)胞液滴通過靜電場而發(fā)生偏轉(zhuǎn)，落入收集器中，其他液體那么被當(dāng)作廢液抽吸掉，完成細(xì)胞分選的目的。電荷式分選2

23精選ppt〔二〕FCM分選技術(shù)要求細(xì)胞分選對儀器的性能要求較高分選是流式細(xì)胞儀的重要功能之一分選功能的裝置較為復(fù)雜

分選指標(biāo)分選速度

分選純度

分選收獲率

24精選ppt每秒可別離所要細(xì)胞的個數(shù)，一般要求分選速度至少達(dá)5000個/秒左右。分選純度2分選速度1分選收獲率3被分選出的細(xì)胞所占百分比，分選純度與儀器配置和細(xì)胞是否重疊有關(guān)。被分選出來的細(xì)胞占應(yīng)被分選的細(xì)胞的比例。通常情況下，分選純度和收獲率是相互矛盾。25精選ppt488nm激光+-前向散射光檢測器

熒光檢測器電磁場單個細(xì)胞被分類進(jìn)入檢測管流式細(xì)胞儀分選系統(tǒng)26精選ppt第二節(jié)數(shù)據(jù)的顯示與分析一、參數(shù)1、散射光信號：分為前向散射光〔forwardscatter，F(xiàn)SC〕和側(cè)向散射光〔sidescatter，SSC〕。散射光不依賴于任何細(xì)胞樣品的制備技術(shù)，被稱為細(xì)胞的物理參數(shù)，反映的是細(xì)胞的大小的內(nèi)部結(jié)構(gòu)。2、熒光信號27精選ppt二、散射光的測定前向散射光檢測器

側(cè)向散射光檢測器

在激光束的正前方，又稱小角散射FSC信號的強(qiáng)弱與細(xì)胞的體積大小成正比，檢測的是細(xì)胞或其他顆粒的外表屬性在激光束的垂直方向，又稱90°散射SSC信號的強(qiáng)弱與細(xì)胞內(nèi)顆粒結(jié)構(gòu)的質(zhì)量成正比，用于檢測細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)屬性28精選ppt前向散射光示意圖細(xì)胞大小29精選ppt側(cè)向散射光示意圖結(jié)構(gòu)復(fù)雜程度30精選ppt三、熒光測量當(dāng)熒光抗體或其他染料染色的顆粒通過激光束時，染料吸收光子躍遷到激發(fā)態(tài)，返回基態(tài)時，染料釋放出能量，大局部以光的形式釋放。特異性熒光探針與單克隆抗體結(jié)合后，與細(xì)胞膜或細(xì)胞內(nèi)的靶抗原結(jié)合，經(jīng)染色后的細(xì)胞在激光的照射下，熒光染料發(fā)出比激發(fā)光波長長的熒光，檢測熒光素信號的強(qiáng)弱就可以了解抗原表達(dá)量的多少。31精選ppt〔一〕熒光信號測量與放大器線性放大器：輸入與輸出放大倍數(shù)相同，用于信號強(qiáng)度變化較小或具有生物學(xué)線性的信號對數(shù)放大器：輸入放大10倍，輸出由1變?yōu)?，用于信號強(qiáng)度變化較大且其光譜信號較復(fù)雜的信號〔二〕熒光補(bǔ)償消除重疊信號32精選ppt四、數(shù)據(jù)顯示方式X軸代表一維參數(shù)〔熒光或散射光信號強(qiáng)度〕，以通道(channel)表示，其與光強(qiáng)度之間的關(guān)系〔線性或?qū)?shù)〕依放大器的性質(zhì)而定，通道右側(cè)信號的光強(qiáng)度明顯高于左側(cè)，越靠右側(cè)光亮度越強(qiáng)?！惨弧硢螀?shù)直方圖33精選pptY軸代表顆粒計數(shù)〔Count〕，反映相同熒光或散射光強(qiáng)度的顆粒相對數(shù)量的多少，可用于定性、定量資料的分析。單參數(shù)分析只能表達(dá)具有相同特性細(xì)胞數(shù)量與光信號強(qiáng)度的關(guān)系，對復(fù)雜表型分析時單參數(shù)分析結(jié)果的準(zhǔn)確性會受到諸多因素的干擾。34精選ppt雙參數(shù)直方圖是一種細(xì)胞與雙測量參數(shù)的圖形，X軸與Y軸分別代表一種參數(shù)。雙參數(shù)信號常采用對數(shù)信號，最常用的根本表示法是用點密圖來顯示。如果把一個散點圖分別投影到X軸和Y軸，可得到兩個單參數(shù)直方圖。臨床實踐中常以多個散點圖聯(lián)合分析?！捕畴p參數(shù)直方圖35精選ppt點圖由二維參數(shù)構(gòu)成，根據(jù)顆粒密度來反映相同光信號的顆粒數(shù)量的多少1、點圖

2、二維等高圖

等高圖(contourplot)是一種可以同時表達(dá)兩個檢測參數(shù)和細(xì)胞頻度的方式，其本質(zhì)也是雙參數(shù)直方圖36精選pptX軸反映SSC的信號強(qiáng)弱Y軸反映FSC的信號強(qiáng)弱

X軸反映FITC熒光信號強(qiáng)弱Y軸反映PE熒光信號強(qiáng)弱

點圖37精選ppt把代表相同細(xì)胞數(shù)目的點依次連接起來形成密閉曲線，越在里面的曲線代表的細(xì)胞數(shù)目越多，越密集的區(qū)域也就是細(xì)胞數(shù)目變化最快的區(qū)間。等間距等高線適用于細(xì)胞數(shù)目變化不大的情況對數(shù)間距等高線適用于細(xì)胞數(shù)目變化較大的情況二維等高圖38精選ppt三維坐標(biāo)均為參數(shù)〔散射光或熒光〕而非細(xì)胞數(shù)對復(fù)雜的細(xì)胞亞群觀察更為直觀、準(zhǔn)確，但對其數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析較難〔三〕三參數(shù)直方圖39精選pptFCM常常需要分析三個以上的參數(shù)，但軟件技術(shù)能夠無法顯示四維空間結(jié)構(gòu)。隨著FCM多色熒光信號檢測的開展，所得到的熒光信號和散射光信號需根據(jù)需要進(jìn)行組合分析以獲得所需的信息。多參數(shù)分析能夠同時比較各種細(xì)胞的不同抗原表達(dá)水平，可以統(tǒng)計出多種數(shù)據(jù)?！菜摹扯鄥?shù)組合分析40精選ppt指同一張單參數(shù)或雙參數(shù)直方圖中根據(jù)信號的強(qiáng)弱來劃定分析區(qū)域，從而計算分析區(qū)域內(nèi)的細(xì)胞數(shù)量。Gate設(shè)置2Region設(shè)置

1指在某一張選定參數(shù)的直方圖上根據(jù)該圖的細(xì)胞群分布選定要分析的特定細(xì)胞群，并要求該樣本的所有其他參數(shù)組合的直方圖只表達(dá)該群細(xì)胞的分布情況。41精選pptRegion設(shè)置

Gate設(shè)置

42精選ppt五、流式細(xì)胞術(shù)的特點

①速度快

對單個細(xì)胞或生物顆粒進(jìn)行快速、逐個檢測，測量速度可以到達(dá)每秒數(shù)千個甚至上萬個細(xì)胞②靈敏度高

每個細(xì)胞上只需帶有1000～3000個熒光分子即能檢測出來③多參數(shù)多色熒光染色同時分析單個細(xì)胞或生物顆粒的多種特征

④精度高

在細(xì)胞懸液中檢測細(xì)胞，比其他技術(shù)的變異系數(shù)更小，分辨率更高

⑤純度高

可以把指定特征的細(xì)胞分選出來，分選細(xì)胞的純度可到達(dá)99%以上⑥無害性

能保持細(xì)胞不被破壞，進(jìn)行無害性定性或定量分析和分選

43精選ppt六、流式細(xì)胞術(shù)定量分析的本卷須知流式細(xì)胞儀的應(yīng)用已從科研進(jìn)入了臨床，在進(jìn)行科研和臨床檢驗定量分析過程中，應(yīng)明確各項工作環(huán)節(jié)的影響因素并對儀器性能進(jìn)行嚴(yán)格的質(zhì)量控制，以保證檢測數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和可靠性。44精選ppt確保標(biāo)本上機(jī)檢測前細(xì)胞濃度滿足儀器檢測要求。熒光抗體染色后需充分洗滌，注意混勻、低速離心，減少重疊細(xì)胞和細(xì)胞碎片。避光染色，保證細(xì)胞免疫熒光的穩(wěn)定。必須根據(jù)具體實驗?zāi)康脑O(shè)置必要的對照，確保實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性和客觀性，消除非特異性熒光的影響。判定結(jié)果時，應(yīng)注意減去本底熒光，可應(yīng)用計算機(jī)程序軟件，使定量分析更精確。本卷須知45精選ppt能否制備出合格的單細(xì)胞懸液是關(guān)系最終分析結(jié)果準(zhǔn)確與否的關(guān)鍵。單細(xì)胞懸液大多來自生物樣品，不同組織來源的樣本制備方法也不同。第三節(jié)流式細(xì)胞儀免疫分析的技術(shù)要求一、FCM單細(xì)胞標(biāo)本的制備

46精選ppt流式細(xì)胞術(shù)主要是以某一類細(xì)胞群為檢測對象，減少檢測時的干擾因素。新鮮的外周血是天然的單細(xì)胞懸液。單次密度梯度離心法是最常用于別離制備單個核細(xì)胞懸液，采用淋巴細(xì)胞別離液別離外周血中的單個核細(xì)胞?！惨弧惩庵苎獑渭?xì)胞懸液制備47精選ppt〔二〕培養(yǎng)細(xì)胞的單細(xì)胞懸液制備懸浮生長

貼壁生長

反復(fù)吹打

分散細(xì)胞

常規(guī)洗滌

低速離心

蛋白酶消化

機(jī)械吹打

細(xì)胞脫落

低速離心

漂洗重懸

單細(xì)胞懸液

培養(yǎng)細(xì)胞一般是以懸浮或貼壁的方式生長。48精選ppt將新鮮實體組織進(jìn)行單細(xì)胞懸液的制備是一項困難而復(fù)雜的技術(shù)。理想的狀態(tài)是既要到達(dá)別離細(xì)胞的目的又要不損傷細(xì)胞。最常用的方法是酶消化法、機(jī)械法、化學(xué)處理法和外表活性劑處理法等。不管是哪種方法都不可防止的會對細(xì)胞外表膜結(jié)構(gòu)、細(xì)胞活性和功能等造成不同程度的損傷?！踩承迈r實體組織單細(xì)胞懸液制備49精選ppt該制備方法的建立擴(kuò)大了流式細(xì)胞術(shù)的應(yīng)用范圍，有利于進(jìn)行臨床回憶性研究和利用。常用的方法有二甲苯脫蠟法、組織清潔劑脫蠟法和甲氧-雙氧水處理法。對石蠟切片的要求較嚴(yán)格。〔四〕石蠟包埋組織單細(xì)胞懸液制備50精選ppt活檢標(biāo)本及各種內(nèi)鏡取材標(biāo)本也克制備成單細(xì)胞懸液。一般要求鏡檢取材標(biāo)本至少取3塊以上。制備方法與新鮮實體組織根本相同。〔五〕活檢標(biāo)本單細(xì)胞懸液制備51精選ppt脫落細(xì)胞應(yīng)去除取材伴隨的雜質(zhì)后，再制備單細(xì)胞懸液。脫落細(xì)胞用流式細(xì)胞術(shù)檢測，是一種更為客觀的檢測手段，對臨床診斷和治療很有意義?！擦趁撀浼?xì)胞的單細(xì)胞懸液制備52精選pptFCM主要的信號參數(shù)包括散射光信號和熒光信號，熒光染色是保證熒光信號產(chǎn)生的關(guān)鍵步驟。目前間接免疫熒光染色已較少用；直接免疫熒光染色以雙色以上分析較為常用。單色免疫熒光多用于單克隆抗體特異性較高、單一細(xì)胞群的抗原檢測，多色免疫表型分析宜采用同一品牌的試劑。二、FCM樣品的熒光染色

53精選ppt直接免疫熒光染色法是熒光抗體技術(shù)最根本、最簡單的方法，多用于細(xì)胞外表標(biāo)志的染色分析。〔一〕直接免疫熒光染色法優(yōu)點

操作簡單，方法簡便、快速特異性強(qiáng)，與其他抗原交叉染色較少反響中只有兩種因素〔細(xì)胞與抗體〕參與，結(jié)果判斷較簡單54精選ppt〔二〕間接免疫熒光染色法未標(biāo)記的特異性抗體〔一抗〕與待測抗原反響，再用熒光素標(biāo)記的抗免疫球蛋白抗體〔二抗〕進(jìn)行標(biāo)記染色，通過對熒光素標(biāo)記的二抗所發(fā)射的熒光信號進(jìn)行檢測，對標(biāo)本中待測抗原進(jìn)行鑒定。一抗二抗55精選ppt優(yōu)點

敏感性高具有更廣的通用性缺點

操作步驟繁瑣，干擾因素較多易產(chǎn)生非特異性染色，結(jié)果判斷有時比較困難56精選ppt多色流式細(xì)胞儀的開發(fā)促進(jìn)了新的熒光染料的合成及抗體標(biāo)記物的開展。多色標(biāo)記簡便、省時、節(jié)約本錢，但對操作人員的要求較高。試劑的選擇還需結(jié)合儀器的配置考慮?！踩扯鄥?shù)分析時熒光抗體的組合標(biāo)記57精選ppt自發(fā)熒光：未經(jīng)熒光標(biāo)記的細(xì)胞受到激光照射后所發(fā)出的熒光。每種細(xì)胞群都有不同水平的自發(fā)熒光，如淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞等。自發(fā)熒光易引起信號干擾，出現(xiàn)假陽性結(jié)果，在實際臨床檢驗工作中應(yīng)注意區(qū)別?！菜摹匙园l(fā)熒光58精選ppt〔五〕FCM常見熒光染料的種類和特性盡可能高的光子產(chǎn)量，以提高信號強(qiáng)度對激發(fā)光有較強(qiáng)的吸收，以降低背景噪音激發(fā)光譜與發(fā)射光譜之間要有盡可能大的間隔，以減少背景信號對熒光信號的干擾

易于與被標(biāo)記的抗原、抗體或其他生物物質(zhì)結(jié)合，而不會影響被標(biāo)記物的特性理想熒光染料59精選ppt常用的染料有以下幾種：異硫氰基熒光素〔FITC〕藻紅蛋白〔PE〕別藻青蛋白〔APC〕藻紅蛋白偶聯(lián)物PE-Cy5

得州紅〔Texasred〕藻紅蛋白偶聯(lián)物PE-Cy7

60精選ppt常用熒光染料的特性和應(yīng)用熒光染料激發(fā)光(nm)發(fā)射光(nm)顏色應(yīng)用FITC488525綠色免疫熒光PE（RDI）488575橙色免疫熒光PE-Cy5488670紅色

免疫熒光PE-Cy7488755深紅色免疫熒光ECD488620橙紅色免疫熒光PI488620橙紅色DNA染色APC633670紅色61精選ppt三、免疫膠乳顆粒技術(shù)的應(yīng)用液相芯片技術(shù)：利用膠乳顆粒的載體特性，結(jié)合熒光標(biāo)記和FCM，實現(xiàn)對多種可溶性物質(zhì)的分析。

低樣本量、多參數(shù)、更高檢測效率62精選ppt四、流式細(xì)胞儀的質(zhì)量控制〔一〕單細(xì)胞懸液制備的質(zhì)量控制材料新鮮、防止細(xì)胞膜損傷溶血劑由于低滲液，嚴(yán)格掌握低滲時間機(jī)械法優(yōu)于化學(xué)法或酶法，控制力度溫度：25-37℃，PH7.0-7.263精選ppt〔二〕免疫熒光染色的質(zhì)量控制高溫?zé)晒獯銣绲目赡苄栽龃髮晒馊旧Y(jié)果影響顯著，一般要求溫度在20℃以下溫度

pH值改變那么會造成熒光光譜改變，影響熒光強(qiáng)度pH值

非特異性熒光強(qiáng)弱代表非特異性結(jié)合水平，不消除將使檢測結(jié)果假性升高非特異熒光細(xì)胞濃度低、溶劑的性質(zhì)等其他固定劑與細(xì)胞的某些物質(zhì)結(jié)合后，干擾了熒光染料與細(xì)胞成分的結(jié)合，造成熒光強(qiáng)度改變固定劑64精選ppt〔三〕儀器操作技術(shù)的質(zhì)量控制光路與流路校正PMT校準(zhǔn)絕對計數(shù)的校準(zhǔn)65精選ppt〔四〕免疫檢驗的質(zhì)量控制在流式細(xì)胞術(shù)實驗過程中，實驗的每一個環(huán)節(jié)都會存在很多不穩(wěn)定的因素，因此必須嚴(yán)格做好質(zhì)量控制工作，從而保證實驗的科學(xué)性和可靠性。66精選ppt環(huán)境要求

一般要求環(huán)境溫度在20～25℃之間，實驗室內(nèi)盡量減少灰塵和煙塵，光源要有良好的屏蔽作用。儀器校正

每天校正，定期進(jìn)行光路和流路校準(zhǔn)，還需進(jìn)行不同儀器間和不同實驗室間的比對。

樣本要求

合格的單細(xì)胞懸液是分析成功的關(guān)鍵，保證待測標(biāo)本新鮮，防止細(xì)胞損傷等。12367精選ppt設(shè)置對照

最重要的是設(shè)置同型對照和全程質(zhì)控，將質(zhì)控品與待測標(biāo)本一起操作，以保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性數(shù)據(jù)的獲取和分析獲取實驗數(shù)據(jù)前，應(yīng)先調(diào)節(jié)儀器；分析實驗數(shù)據(jù)時，要根據(jù)實驗?zāi)康膩頉Q定分析模型。4568精選ppt淋巴細(xì)胞亞群的檢測已成為某些疾病診斷、療效評價和免疫功能檢測的常規(guī)手段。不同淋巴細(xì)胞亞群用普通光學(xué)顯微鏡、血細(xì)胞分析儀無法鑒別，其在分化成熟過程中表達(dá)的CD抗原特性也不同，利用流式細(xì)胞儀結(jié)合單克隆抗體技術(shù)能夠準(zhǔn)確分類計數(shù)淋巴細(xì)胞亞群。第四節(jié)流式細(xì)胞術(shù)在免疫學(xué)檢查中的應(yīng)用

一、淋巴細(xì)胞亞群分析69精選ppt采用三色標(biāo)記的單克隆熒光抗體，可對T細(xì)胞亞群進(jìn)行分類。Th細(xì)胞表達(dá)CD3+CD4+CD8-Tc細(xì)胞表達(dá)CD3+CD4-CD8+〔一〕T淋巴細(xì)胞及亞群分析70精選ppt成熟B細(xì)胞主要表達(dá)CD19、CD20、CD21、CD22分子，同時檢測CD25分子，可進(jìn)一步觀察B細(xì)胞活化狀態(tài)?！捕矪淋巴細(xì)胞及亞群分析〔三〕NK細(xì)胞分析目前臨床上常采用三色熒光抗體標(biāo)記將CD3-CDl6+CD56+淋巴細(xì)胞定為自然殺傷細(xì)胞〔Natutalkillercell，NK細(xì)胞〕。71精選ppt項目百分率(%)絕對數(shù)(個/μl)比值總T淋巴細(xì)胞(CD3+CD19-)50～84955～2860總B淋巴細(xì)胞(CD3-CD19+)5～1890～560輔助/誘導(dǎo)性T淋巴細(xì)胞(CD3+CD4+)27～51550～1440抑制/細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CD3+CD8+)15～44320～1250輔助/抑制性T淋巴細(xì)胞比值(CD3+CD4+/CD3+CD8+)0.71～2.78NK細(xì)胞(CD3-CD16+CD56+)7～40150～1100T淋巴細(xì)胞+B淋巴細(xì)胞+NK細(xì)胞95～1001530～3700注：每個實驗室宜建立本室的參考范圍，不同人群、不同試劑、不同地區(qū)可能有差異健康成年人外周血淋巴細(xì)胞亞群分析的參考區(qū)間72精選ppt細(xì)胞介導(dǎo)細(xì)胞毒實驗：淋巴細(xì)胞與靶細(xì)胞共培養(yǎng)，參加碘化丙啶〔PI，滲透到死亡細(xì)胞致其染紅色〕，細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子測定：同時測定多種CK二、淋巴細(xì)胞功能分析

73精選pptFCM在血液病診斷、治療和預(yù)后判斷方面，具有非常重要的價值。三、白血病免疫表型分析

正確區(qū)別急性髓細(xì)胞性白血病〔AML〕和急性淋巴細(xì)胞性白血病〔ALL〕。正確鑒別AML中的M0、M6、M7型。正確診斷雙系列型或雙表型白血病。正確診斷少見、疑難白血病。發(fā)現(xiàn)僅表達(dá)個別次要非本系列相關(guān)抗原的白血病。74精選ppt正常血細(xì)胞在分化發(fā)育成熟過程中，某些抗原的表達(dá)與否可作為鑒別和分類血細(xì)胞的標(biāo)記。白血病細(xì)胞可用造血細(xì)胞分化抗原類標(biāo)記檢測。FCM結(jié)合單克隆抗體的應(yīng)用可以提高白血病分類診斷的符合率，是一種客觀的檢測手段。FCM對白血病復(fù)發(fā)的主要根源，微小殘留病灶〔MRD〕的檢測具有高敏感性和特異性，早期檢出MRD防止疾病復(fù)發(fā)。75精選pptFAB分類CD13CD33CD11bCD14HLA-DRCD34CD117MPOM0++/---++++M1++-/+-++++M2++--++/-++M3++----++M4+++++/-+/-++M5a+++/-+/-+/-+-/+M5b++++++-/+M6+/-+/-+或--+/--+M7-+/---++?-典型AML的免疫表型特點76精選ppt獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)的特征是CD4+T淋巴細(xì)胞數(shù)量和功能的進(jìn)行性破壞,從而引起全身繼發(fā)嚴(yán)重感染和癌變。FCM可以快速檢測外周血CD4+T和CD8+T淋巴細(xì)胞相對數(shù)和絕對數(shù)的變化，同時也可以檢測CD4+T細(xì)胞的功能變化。四、艾滋病的診斷與治療

77精選pptFCM是當(dāng)前血小板研究中不可缺少的檢測工具，可用于檢測血小板的多項指標(biāo)。對血小板相關(guān)的多種疾病診斷、治療和預(yù)防，以及抗血小板活化藥物的研究、評價及治療監(jiān)測等方面具有重要意義和研究價值。血小板分析一般通過SSC和FSC散射光對數(shù)取樣設(shè)門。五、血小板分析78精選ppt根本原理：用某種熒光染料與網(wǎng)織紅細(xì)胞內(nèi)的RNA結(jié)合，再通過流式細(xì)胞術(shù)檢測被染色的網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)目。噻唑橙(thiazoleorange，TO)是目前用于FCM法分析網(wǎng)織紅細(xì)胞最理想的一種染料。六、網(wǎng)織紅細(xì)胞分析

79精選ppt陣發(fā)性睡眠性血紅蛋