細(xì)胞因子檢測的原理、特點(diǎn)及檢測方法-臨時分類-

細(xì)胞因子的檢測第一節(jié)

細(xì)胞因子檢測概述一、細(xì)胞因子的類型與作用特點(diǎn)二、細(xì)胞因子檢測的特點(diǎn)與方法由非神經(jīng)—內(nèi)分泌細(xì)胞產(chǎn)生的一大類與免疫應(yīng)答活動密切相關(guān)的低分子蛋白與多肽。細(xì)胞因子細(xì)胞因子的類型與作用特點(diǎn)1、細(xì)胞因子的分類2、細(xì)胞因子的作用特點(diǎn)以生物學(xué)作用進(jìn)行劃分的分類白細(xì)胞介素（Interleukin）——

IL-1、IL-2、……

IL-18干擾素（Interferon）——

IFN- 、IFN- 、IFN-腫瘤壞死因子（Tumor

necrosis

factor）——

TNF-

、

TNF-集落刺激因子（Colony-stimulating

factor）——

M-CSF、G-C轉(zhuǎn)化生長因子（Transforming

growth

factor）——

TGF-趨化因子（Chemokine）——IL-8、GROs、MCP-1生長因子（Growth

factor）——EGF、FGF、IGF、PDGFTNFsILsIFNsTGFsCSFsChemokines胞因子間關(guān)系1、旁分泌（paracrine）、自分泌（autocrine）性2、多源與同源性3、高效性4、多效性（pleiotropy）5、豐余性（redundancy）6、協(xié)同性7、拮抗性8、網(wǎng)絡(luò)性細(xì)胞因子細(xì)胞因子細(xì)胞因子受體細(xì)胞因子受體細(xì)胞因子的自分泌與旁分泌性I

L-2I

FN-

TNF-細(xì)胞因子的同源性與多源性I

FN-T細(xì)胞T細(xì)胞 NK細(xì)胞IL-4Th細(xì)胞肥大細(xì)胞Th細(xì)胞B細(xì)胞細(xì)胞因子的多Th細(xì)胞B細(xì)胞細(xì)胞因子的豐IL-2IL-4IL-5Th細(xì)胞B細(xì)胞細(xì)胞因子的協(xié)IL-4IL-5B細(xì)胞細(xì)胞因子的拮Th1細(xì)胞IL-4Th2細(xì)胞I

FN-細(xì)胞因子的IL-3、IL-5、IL-4、IL-6、GM-CSFTNF

TGFIL-1

IFNIL-1

IFNTNFIL-1TGFIFNIL2IL-4IFNIL2IL-4IL-5IL-6TNF

IFNIL-1

TGFTNF

IL-1IFN

IL-5GM-CSFG-CSFM-GSFTNFTNFIL-1TGFIL-1

IL-6GM-CSFG-CSFM-GSFIL-1

IL-6IL-1

IL-6GM-CSFG-CSFM-GSFIFN內(nèi)皮細(xì)胞成纖維細(xì)胞TB細(xì)胞因子檢測的特點(diǎn)與方法1、檢測的特點(diǎn)2、檢測的方法細(xì)胞因子檢測的特點(diǎn)免疫原性較弱樣品含量低樣品具有時效性生物效應(yīng)特異性差細(xì)胞因子檢測的方法免疫學(xué)檢測方法——抗原性檢測細(xì)胞生物學(xué)檢測方法——生物活性檢測分子生物學(xué)檢測方法——基因表達(dá)檢測第二節(jié)

細(xì)胞因子檢測的方法與原理一、細(xì)胞因子的細(xì)胞生物學(xué)檢測二、細(xì)胞因子的免疫學(xué)檢測三、細(xì)胞因子的分子生物學(xué)檢測細(xì)胞因子的細(xì)胞生物學(xué)檢測1、檢測方法與原理2、檢測中的操作注意要點(diǎn)檢測方法與原理細(xì)胞增殖或增殖抑制試驗(yàn)細(xì)胞病變抑制試驗(yàn)細(xì)胞毒試驗(yàn)細(xì)胞趨化試驗(yàn)濾膜：計(jì)數(shù)受趨化細(xì)胞趨化因子細(xì)胞趨化試驗(yàn)原理示意檢測中的操作注意要點(diǎn)靶細(xì)胞的選擇與培養(yǎng)檢測標(biāo)本的制備顯示檢測結(jié)果靶細(xì)胞的選擇與培養(yǎng)1、對所測的細(xì)胞因子有特異的敏感性2、易培養(yǎng)、保存、生物學(xué)特性穩(wěn)定3、有良好的生長狀態(tài)4、種屬適配各類細(xì)胞因子檢測的常用靶細(xì)胞細(xì)胞因子實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)干擾因素IL-1D10（M）增殖法IL-2、IL-4EL-4（M）增殖法IL-4A352（H）增殖抑制法IL-2CTLL（M）增殖法IL-4IL-3KG-1（H）增殖法TF-1（H）增殖法GN-CSF、IL-5IL-6、EPOIL-4CTLL（M）增殖法IL-2IL-5BCL-1（M）增殖法IL-4各類細(xì)胞因子檢測的常用靶細(xì)胞細(xì)胞因子IL-6干擾因素IL-4、IL-11實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)B9（M）增殖法BM60（H）增殖法Clone-IXN/2b（M）增殖法中性粒細(xì)胞（M、H）趨化法IL-7IL-8GM-CSFTF-1（H）增殖法IL-3、IL-5IL-6、IL-5TNF

/IFNL929

（M、H）細(xì)胞毒法wish（H）病變保護(hù)法L929（M）病變保護(hù)法IFN-IFN-、IFN-、IFN-檢測標(biāo)本的準(zhǔn)備1、分離特定的產(chǎn)生細(xì)胞2、對產(chǎn)生細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)、激活3、選擇適當(dāng)?shù)氖占瘯r間顯示檢測結(jié)果1、細(xì)胞增殖狀態(tài)的顯示：放射性核素?fù)饺敕ā麅?nèi)酶活性顯示法活細(xì)胞染色法細(xì)胞熒光測定法2、細(xì)胞毒或細(xì)胞病變狀態(tài)的顯示活細(xì)胞染色法胞內(nèi)酶活性顯示法DNA斷片測定法細(xì)胞因子的免疫學(xué)檢測分泌型細(xì)胞因子的檢測細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子的檢測ELISPOT細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子檢測技術(shù)激活膜抗原標(biāo)記細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子標(biāo)記細(xì)胞因子的分子生物學(xué)檢測原位雜交技術(shù)Rt-PCR技術(shù)第三節(jié)

常用細(xì)胞因子的檢測方法一、IL-2的檢測二、IFN-γ的檢測三、TNF的檢測待檢樣品（細(xì)胞上清）指示細(xì)胞（CTLL-2）按不同稀釋度加入37oC，1白6-2細(xì)0小胞時介素-2的測定加入3HTdR（1-5

Ci）37oC，4-6小時收集細(xì)胞測定待檢樣品（細(xì)胞上清）指示細(xì)胞（L929）按不同稀釋度加入37oC，4小時棄取上清，加入VSV37oC，24-48小時觀察細(xì)胞病變（鏡檢或比色）干擾素的測定示意待檢樣品（細(xì)胞上清）指示細(xì)胞（L929）按不同稀釋度加入37oC，腫2腫4小瘤時壞死因子的測定棄取上清，洗滌加入結(jié)晶紫染液，洗滌加入細(xì)胞裂解液，比色第四節(jié)

細(xì)胞因子受體的檢測一、細(xì)胞因子受體的類型二、細(xì)胞因子受體的檢測細(xì)胞因子受體的類型膜