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文檔簡介

實驗2別離以尿素為氮源的微生物1.一.實驗原理

尿素NH3

中性堿性

酚紅顏色：

(酸性)黃色

紅色(變色范圍

pH6.4-8.2)2.二.實驗目的使用以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基別離細菌(有脲酶)通過指示劑〔酚紅〕顏色的變化檢知培養(yǎng)基pH的變化(脲酶催化的化學反響)3.三.實驗步驟２.倒平板３.制備一定濃度梯度的細菌懸液１g土壤＋９９ml無菌水，振蕩，為１０-2稀釋液，依次制備１０-3、１０-4、１０-5的土壤稀釋液。４.稀釋涂布別離法別離細菌１.制備無菌的ＬＢ固體培養(yǎng)基和尿素固體培養(yǎng)基P26５.培養(yǎng)觀察〔倒置，37℃24-48h〕〔無菌，0.1ml，玻璃刮刀〕4.配制培養(yǎng)基尿素培養(yǎng)基葡萄糖0.025gNaCl0.12gK2HPO40.12g

瓊脂糖0.5g

酚紅0.25g

尿素

10mlLB培養(yǎng)基蛋白胨：0.25g酵母提取液：0.12gNaCl：0.25g

瓊脂糖：0.5g

對照組選擇培養(yǎng)基實驗組為什么用瓊脂糖代替瓊脂？怎么獲得無菌的尿素溶液？5.接種取0.1ml菌懸液6.涂布別離7.涂布別離8.37℃倒置培養(yǎng)按濃度捆成一摞恒溫37℃培養(yǎng)9.1、為什么要用瓊脂糖代替瓊脂配置固體培養(yǎng)基因為瓊脂是未被純化的混合物，內(nèi)含一定量的含氮化合物。如果用瓊脂固化培養(yǎng)基，會為細菌提供一定量的非尿素類氮源，這樣會在尿素固體培養(yǎng)上產(chǎn)生大量以非尿素為氮源的細菌，不利于以尿素為氮源的細菌的篩選，故用純化的瓊脂糖而不用瓊脂做固化劑思考題：10.2、有脲酶的細菌在生態(tài)穩(wěn)態(tài)上起什么作用土壤中的尿素在較高溫度下會被水解成氨，氨使土壤堿化，氨還與SO42-等離子形成化合物，使土壤板結(jié)。而脲酶的細菌不僅使動植物尸體降解，而且利用了所形成的氨，有利于自然界中氮的循環(huán)。11.3、有脲酶的細菌菌落周圍為什么有著色的環(huán)帶出現(xiàn)。細菌向胞外分泌脲酶，使培養(yǎng)基中尿素水解，水解后產(chǎn)生氨，氨為堿性，酚酞在酸性環(huán)境里呈黃色，堿性里呈紅色。培養(yǎng)基中酸堿指示劑產(chǎn)生顏色變化〔變紅〕，標志著存在脲酶水解尿素的作用，從而證明這一菌株以尿素為氮源。12.4、與全營養(yǎng)培養(yǎng)基上的菌落數(shù)比較，為什么尿素培養(yǎng)基上只有少數(shù)菌落說明能利用尿素的細菌在土壤菌落中只占

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