集約化養(yǎng)豬廠副豬嗜血桿菌的病原分離、鑒定及控制方法探討

PAGE14集約化養(yǎng)豬廠副豬嗜血桿菌的病原分離、鑒定及控制方法探討摘要養(yǎng)豬產(chǎn)業(yè)一直是我國農(nóng)業(yè)經(jīng)濟發(fā)展中的一個非常重要的組成部分并且持續(xù)非常長久，所以集約化養(yǎng)豬是在現(xiàn)在實施可持續(xù)發(fā)展養(yǎng)殖業(yè)的康莊大道，但針對于集約化養(yǎng)豬當中遇到了患有疾病的情況，比如副豬嗜血桿菌疾病成為影響豬廠快速發(fā)展的制約因素。本論文是現(xiàn)針對某集約化養(yǎng)豬廠中出現(xiàn)的較典型細菌性疾病——副豬嗜血桿菌病開展分離病原的相關實驗，并鑒定了病原所具有的基本形態(tài)與理化性質(zhì)等，通過培養(yǎng)和鑒定過程，并結(jié)合自己的認識和經(jīng)驗，參考了大量文獻，設想了對這一病毒在具體實踐生產(chǎn)當中的控制方法。關鍵詞：養(yǎng)豬廠；副豬嗜血桿菌；分離；鑒定

目錄235041前言 459901.1研究背景 4249931.2研究現(xiàn)狀 443301.3研究目的和意義 526402副豬嗜血桿菌基本概況 5135172.1細菌形態(tài) 5112582.2臨床癥狀 6293033副豬嗜血桿菌病的病原分離 6110383.1培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件的選擇 6277143.2副豬嗜血桿菌的病料采集 7310353.3分離株的純化及初步篩選 8276643.4結(jié)果和討論 8259914分離株及標準株的形態(tài)培養(yǎng)特性及理化特性鑒定 9260324.1形態(tài)培養(yǎng)特性 9143934.2生化特性 9157434.3結(jié)果和討論 1054325集約化養(yǎng)豬廠副豬嗜血桿菌的病原控制方法 11319655.1加強飼養(yǎng)管理 11187355.2免疫接種 11111145.3藥物預防 1231828結(jié)束語 1231540參考文獻 141前言1.1研究背景副豬嗜血桿菌病在流行病學上呈現(xiàn)散發(fā)性流行，通常也可以稱為革拉澤氏病或者關節(jié)炎等，是由副豬嗜血桿菌引發(fā)的一類疾病。由于養(yǎng)豬業(yè)正以一個相對較快的速度迅速發(fā)展，豬只的數(shù)量也呈現(xiàn)不斷上升的趨勢，而且隨著目前規(guī)?；曫B(yǎng)技術應用的推廣，豬只的飼養(yǎng)密度急速增加，根據(jù)流行病學研究，豬病的流行病也是日趨復雜化，包括多種流行病的并發(fā)、繼發(fā)還有混合感染等，各種復雜因素的疊加，使得該病極為流行，盡管各豬場對豬只免疫力做個各種提升方案，飼料中增加提高免疫力的營養(yǎng)素，抵抗疾病提升免疫的疫苗免疫方案，也不能夠阻斷副豬嗜血桿菌病對整個養(yǎng)豬行業(yè)的危害，而且還有逐漸嚴重的趨勢。多年以來，豬副嗜血桿菌病的相關報道越來越多，該病發(fā)作通常導致多發(fā)性漿膜炎和關節(jié)炎，不同程度的豬副嗜血桿菌病的病原也在各大大小小的豬場被檢出。尤其規(guī)模大點的、集約化的、具有相當數(shù)量的豬場，如果僅僅由于藍耳病病毒、圓環(huán)病病毒感染而導致了免疫功能低下，更加容易出現(xiàn)豬副嗜血桿菌病。而且副豬嗜血桿菌病同時也是“豬高熱病”的元兇之一。當然，國際上對于副豬嗜血桿菌病的認定，也劃歸到危害現(xiàn)代整個養(yǎng)豬行業(yè)的重要傳染病之列。1.2研究現(xiàn)狀通常在健康的豬的上呼吸道等部位能夠分理處HPs，這表明該病菌在鼻腔、扁桃體以及氣管前段等部位均能夠繁殖生存。而豬只并沒有表現(xiàn)出任何與副豬嗜血桿菌病相關的臨床癥狀。理論上豬只上呼吸道的具有很強的防衛(wèi)機制，但有些菌株仍然能夠破壞這種強大的防衛(wèi)機制，尤其是在敏感豬群里，甚至會導致豬出現(xiàn)全身感染的情況。通常來說，該病菌首先會在鼻竇以及氣管等部位大量繁殖生長，從而導致黏膜損失，使機體更容易受到細菌的侵襲。從呼吸道等部位分離出的HPs菌株，也會引起上呼吸道的黏膜表面纖毛運動能力顯著下降，從而引起纖毛上皮損傷，繼而引發(fā)鼻腔膿性鼻炎。鼻腔炎癥病灶處由于纖毛大量丟失，鼻腔黏膜和支氣管黏膜可能會出現(xiàn)急性腫脹等情況，使黏膜受到更加嚴重的損傷，從今提高了細菌浸入的可能性。仔豬在5到6周年齡大小時，對于HPs的母源抵抗力會顯著降低，同時保育舍內(nèi)的仔豬也是在同一時期發(fā)生肺部病變，因此不具有母源抵抗力的仔豬抵抗力相對較差，容易干擾各種疾病，如果與攜帶致病菌的豬接觸便會出現(xiàn)病癥。許多學者，以CarlosPijoan為代表的則提出：幼豬身體內(nèi)部的HPs的定居模式將會直接對HPs的流行病學產(chǎn)生影響，而定居模式則一般是由管理方法決定的。副豬嗜血桿菌HPs內(nèi)部共有兩類不同抗原，分別是：莢膜多糖抗磨、菌體結(jié)構抗原；前者是由多糖、磷壁酸等組成構成的，多糖的結(jié)構是莢膜抗原表現(xiàn)出特異性的主要原因；菌體結(jié)構抗原又包括兩種，一種是外膜蛋白(outermembraneprotein,OMP)主要成分是一種脂多糖(LPS)。研究發(fā)現(xiàn)LPS有可能是毒力因子最主要的一個因素，血清當中含有的LPS與血栓產(chǎn)生與血管凝集物的擴散存在聯(lián)系。LPS產(chǎn)生的過程中會產(chǎn)生一些酶類，如超氧化物歧化酶，這種酶可以抵抗巨噬細胞的吞噬能力。研究人員RuizA等經(jīng)過深入研究發(fā)現(xiàn)：外膜蛋白OMP會對HPs的毒性產(chǎn)生一定的影響，對健康仔豬進行分離獲取的HPs的OMP和對發(fā)病豬進行分離獲取的HPs的OMP存在差異，然而從多發(fā)性漿膜炎以及關節(jié)炎癥狀的患病豬等進行分離獲取的HPs的OMP幾乎是完全一致的。OMP的蛋白質(zhì)主要分為八種不同的類型，八種類型的蛋白質(zhì)大小分別是：92kDa,80kDa,53kDa,60kDa,46kDa,37kDa和15kDa。副豬嗜血桿菌HPs強毒株更多的表現(xiàn)出外膜蛋白的基本特征，莢膜抗原決定簇會在一定程度上影響保護力。Miniat等經(jīng)過試驗發(fā)現(xiàn)：菌株的血清的類型將會對抗原性產(chǎn)生影響，而獨立與免疫保護之間為正相關關系。研究結(jié)果表明：免疫動物體內(nèi)產(chǎn)生的抗體對OMP的免疫原性相對更強，但是并沒有表現(xiàn)出對LPS與CPS的免疫原性，另外還發(fā)現(xiàn)OMP也可以表現(xiàn)出較強的免疫原性，接下來的主要研究問題是：OMP是否為主要的免疫原。Charland等人經(jīng)過試驗發(fā)現(xiàn)豬血清內(nèi)確實存在兩種轉(zhuǎn)鐵蛋白受體，通過進一步的試驗對這兩種轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的多肽結(jié)構進行了深入的分析。TbpA與TbpB等都可以完成轉(zhuǎn)鐵蛋白特異的抓捕工作，并完成鐵轉(zhuǎn)運輸?shù)郊毎麧{的過程，從而為細菌生長供給了所需要的物質(zhì)。Tbp在HPs浸入宿主動物并導致其最終發(fā)病中有著十分重要的影響。Lichtensteiger等經(jīng)過研究發(fā)現(xiàn)：細菌生長階段，尤其是對數(shù)生長的末期，某種神經(jīng)氨酸酶能夠提供游離的鈣給細菌，使得細菌在生長期末仍能保持強的活力。所以這種酶也與細菌在宿主細胞的生長活性有一定的關聯(lián)。LichtensteigerCA等分離出了該物質(zhì)，并發(fā)現(xiàn)該酶表現(xiàn)出一定的潛在毒性，而且是在HPs的分泌液中提取的。這一研究結(jié)果將進一步推動HPs致病因子的研究方向。1.3研究目的和意義隨著養(yǎng)豬行業(yè)的持續(xù)發(fā)展，副豬嗜血桿菌病這種傳染病是非常典型的細菌性疾病，而且已經(jīng)是全球范圍內(nèi)影響?zhàn)B豬業(yè)并持續(xù)時間很久的疾病。由于豬容易受到各種應激反應加之呼吸道綜合征的急發(fā)，使得該疾病大量發(fā)生于各個豬場，同時還有加重的趨勢。我國養(yǎng)豬水平正以一個相對較快的速度迅速發(fā)展，然而較多豬場都出現(xiàn)了多發(fā)性漿膜炎以及關節(jié)炎等疾病，特別是河北、山東、河南等地區(qū)的豬場當中已經(jīng)在豬體內(nèi)分離獲取了HPs，這一菌種使各地養(yǎng)殖場都遭受了十分嚴重的損失。因此研究和討論討副豬嗜血桿菌病的病原情況，找出解決控制該病菌的方法，對實際生產(chǎn)養(yǎng)殖具有非常重要的意義和價值。2副豬嗜血桿菌基本概況2.1細菌形態(tài)副豬嗜血桿菌HPs從分類上看屬于非運動性革蘭氏陰性菌，該菌種能夠表現(xiàn)出不同形態(tài)的菌體，主要有：雙球狀、球桿狀等，基本是由病灶當中分離得到的，同時也可以生成短鏈；在陳舊的培養(yǎng)物中能夠表現(xiàn)出長桿、絲狀等不同形態(tài)。大多數(shù)病菌不存在芽孢，而主要是莢膜。Morozumi和Nicolet在相關報道中指出：分離出的健康豬的上呼吸道中的HPs，也顯示大多數(shù)HPs有莢膜存在，而從其它部位分離出的菌株以無莢膜的為主。但是，一個有趣的實驗顯示，通過活體內(nèi)傳代的方法也可篩選出有莢膜的HPs，而在培養(yǎng)基上經(jīng)數(shù)次培養(yǎng)后發(fā)現(xiàn)有莢膜的細菌的數(shù)量逐漸減少。2.2臨床癥狀隱性感染豬在豬場中不容易被發(fā)現(xiàn)，由于隱性感染的豬不具有相對明顯的特征，所以其具有更大的感染威脅，豬場通常表現(xiàn)出的是慢性感染的特征。根據(jù)特殊情況將此病分為兩種臨床癥狀：急性型癥狀：豬只呈現(xiàn)同圈或不同圈的多只豬突然一起發(fā)病，尤其以膘情健康的豬先發(fā)，體溫一般在40.5-420C，精神萎靡，食欲下降甚至廢絕，呼吸則一般為腹式呼吸，關節(jié)部位等會出現(xiàn)腫脹的情況，肢體也相對不夠協(xié)調(diào)，皮膚呈現(xiàn)出發(fā)紅等情況，耳邊緣會有略微紫色的特征，眼結(jié)膜發(fā)紺，咳嗦一般是在2到3聲，不喜歡經(jīng)常站立，也可能出現(xiàn)急性死亡的情況，經(jīng)常是因為膿毒血癥而最終死亡，臨死前一般是以側(cè)臥等姿態(tài)。部分豬是在1到4天內(nèi)死亡，部分豬會表現(xiàn)出亞急性或者慢性感染特征。如果豬處于孕育狀態(tài)，則會出現(xiàn)流產(chǎn)的情況，公豬則一般是會出現(xiàn)跛行的特征。處于感染狀態(tài)的母豬需要通過注射抗菌素的方法進行治療，分娩時也可能引發(fā)重度疾病。慢性型癥狀：一般為耐過豬，后期經(jīng)常發(fā)展為慢性，多見保育豬。癥狀可見被毛異常凌亂、出現(xiàn)反復發(fā)燒咳嗽，使用藥物的時候就稍微緩和，一旦停藥就會復發(fā)，生長速度也逐漸變慢、耳朵周邊出現(xiàn)發(fā)紫現(xiàn)象，部分豬的四肢或者腹部下端的皮膚表現(xiàn)出紅紫色，眼瞼或者耳翼會出現(xiàn)浮腫，經(jīng)常保持犬坐的姿態(tài)，關節(jié)部位經(jīng)常疼痛，四肢不協(xié)調(diào)，肌肉僵硬顫抖，可能會出現(xiàn)突然死亡的情況。慢性型癥狀的豬生長不僅緩慢，而且消瘦。免疫力差，特別容易受其他病原微生物等外界病原侵入甚至外界物理應激的干擾，比較典型的有多殺性巴氏桿菌等，同時還可能出現(xiàn)繼發(fā)性疾病等并發(fā)癥。若豬群當中出現(xiàn)了類似：支原體肺炎、豬流感以及豬圓環(huán)病毒等其他呼吸道疾病病原體，將會擴大HPs的威脅，特別是保育舍內(nèi)的仔豬將會在斷奶后表現(xiàn)出多系統(tǒng)衰竭綜合征。部分被感染的豬也可能不會表現(xiàn)出：咳嗽、發(fā)熱等特征。如果豬群處于高度健康狀態(tài)，HPs的發(fā)病速度將會大大加快，豬只接觸病原后的幾天內(nèi)就可以有癥狀，非常迅速。在普通的豬群中，對于哺乳母豬的影響也頗為嚴重，長期的慢性跛行會引起母豬的哺乳行為發(fā)生改變，甚至極端弱化。所以副豬嗜血桿菌病的基本特征有：咳嗽、呼吸苦難以及被毛粗亂等。3副豬嗜血桿菌病的病原分離3.1培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件的選擇(1)配置巧克力瓊脂平板培養(yǎng)基本次試驗進行以下配方：酵母浸出粉為1.0g胰蛋白胨為0.6g可溶性淀粉為0.25g枸椽酸鈉為0.15g普通營養(yǎng)瓊脂為4.5g添加蒸餾水到體積為100毫升，等到溶解過程結(jié)束后，將溶液pH調(diào)至7.2～7.4，然后高壓滅菌所配置混合物，120℃，保持15min。在水浴鍋內(nèi)完成冷卻過程，待溫度降低到80℃，將10毫升的無菌脫纖綿羊血加入其中，在80℃的水浴鍋當中進行漩搖，該過程共需要進行10到15分鐘。待溫度下降到50℃時，在其中添加無菌輔酶I，使其濃度到15μg/ml，然后添加萬古霉素至溶液濃度為50μg/ml。再進行4mm左右的平皿的傾倒操作，冷卻完成后在4℃的環(huán)境下儲存。(2)培養(yǎng)的條件保持37℃恒溫培養(yǎng)24h至48h。3.2副豬嗜血桿菌的病料采集(1)臨床病例的挑選在上海市大型養(yǎng)殖場里獲得疑似副豬嗜血桿菌病侵襲的發(fā)病仔豬，再結(jié)合副豬嗜血桿菌病的病變以及流行病學特征，取其豬場發(fā)病的一百頭仔豬。表面臨床特征表現(xiàn)為體溫上升，被毛雜亂，呼吸困難，皮膚出現(xiàn)紅紫，消瘦，關節(jié)出現(xiàn)腫大。將其剖解之后，發(fā)現(xiàn)在死豬及病豬均存在著不同程度的胸腹腔積液現(xiàn)象，其肺臟有粘連或者是出血，在關節(jié)部位有腫脹現(xiàn)象，而在表面上則存在一些纖維素性質(zhì)的滲出物體，在其全身范圍內(nèi)均有淋巴結(jié)的水腫，在關節(jié)腔中存在著大量的粘液。在該養(yǎng)豬場中，出現(xiàn)該類感染的豬主要是處于保育期的仔豬或者是處在斷奶期附近的豬，而在種豬以及育肥豬中則不多見，此外，還有少量的母豬存在流產(chǎn)現(xiàn)象。在當前的工作中，所選的實驗對象為2頭存在較為明顯的疑似癥狀而且尚未進行抗生素注射的病死仔豬。在其上進行分離副豬嗜血桿菌試驗。(2)病料的采集解剖過程是在無菌的環(huán)境下開展，將其腹腔及胸腔暴露出來，第一步是吸出積液，通過棉簽來進行腹膜和胸膜上的有關粘附物的拭取，進而將一些內(nèi)臟（例如脾臟、淋巴結(jié)、肺臟以及扁桃體等）取出來。由于在體外的條件下副豬嗜血桿菌有相對較斷的存活時間，所以當已經(jīng)采集了病料之后，需盡快地進行分離以開展培養(yǎng)。需在無菌環(huán)境下進行內(nèi)臟器官的實驗室操作，需先灼燒手術刀再進行使用，其剖面要被適當?shù)貭C烙，得到深層的組織以開展相關的涂板培養(yǎng)工作。3.3分離株的純化及初步篩選菌落的挑選：首先進行病料的分離以及培養(yǎng)，然后進行涂板，再于37攝氏度的條件下進行24小時到36小時的培養(yǎng)，通過無菌環(huán)來進行菌落的合理選取（露珠狀、透明或者是灰白色）。菌落的培養(yǎng)：在巧克力瓊脂平板上進行48小時的菌落培養(yǎng)，進而進行細菌的涂片，再開展革蘭氏染色鏡檢工作。若結(jié)果表明為多形性小桿菌或者是陰性小桿狀，則有必要再開展1次巧克力瓊脂亞克隆的相關菌落培養(yǎng)工作，此外還需進行普通以及鮮血瓊脂平板的接種。如果巧克力瓊脂平板已經(jīng)有較好的生長形態(tài)，而后面兩類菌落卻未生成，就需保存菌株以供后續(xù)的鑒定所用。該菌株將被確定為JZ株（初選分離株）。3.4結(jié)果和討論1.結(jié)果通過化驗分析，掌握該養(yǎng)殖場中的疑似副豬嗜血桿菌病的主要情況，并將病死仔豬（共計二頭）選出出來以分離病菌，從而將JZ株分離株病原初選出來。2.討論①由于嗜血桿菌的一個重要特征是其較為嬌嫩，所以比標本里的其它菌落需要更高的生長條件。美國學者通過回歸分析的方法分析發(fā)現(xiàn)，與報道的結(jié)果相比，實際的發(fā)病率顯著更高（高于報道值的10倍以上），主要原因是無法對采集標本里有無該類病菌進行科學的確認。②接種培養(yǎng)過程是在選擇培養(yǎng)基上進行（之前已經(jīng)添加了抗生素），通過特殊的稀釋手段來提升分離該類桿菌的成功率。如果培養(yǎng)采用了蠟罐或者是5%的二氧化碳，則該類桿菌所具有的生長速率并不會相應地提高，但是如果采用的是胰蛋白胨血液瓊脂基質(zhì)或者是已經(jīng)脫纖維蛋白的血，則會有較好的效果。③在出現(xiàn)疾病時，養(yǎng)殖人員通常會選擇各類消炎藥來進行治療，然而卻未取得良好的效果，究其原因，是由于該類桿菌已經(jīng)具有了一定的耐藥性，此外各類病原發(fā)生了混合性的感染，而且也存在著不同程度的毒素作用。使用抗生素也將顯著地影響該類嗜血桿菌分離的過程，由此不能確認是否在標本里存在著該類細菌。④對于豬關節(jié)炎以及多發(fā)性漿膜炎來說，副豬嗜血桿菌是其原發(fā)性的病原，在健康畜群與SPF動物或者是和其他各類病原發(fā)生了混合性的感染時，才會引發(fā)死亡率及發(fā)病率較高的全身性的相關疾病，這對于生豬養(yǎng)殖的各階段都會產(chǎn)生影響。當該類桿菌結(jié)合了支原體之后，在患PRRS的豬中，其肺臟有高達51.2%的檢出率（具體見Kobayashi；1996）；對于偽狂犬病病毒以及4型該類桿菌而言，同樣存在著較為顯著的協(xié)同關系（具體見Narita，1994）。對于該類該類桿菌病的實驗病例來說，同樣存在著混合性的感染情況，這包括豬肺炎支原體、HPV、PRRSV以及豬圓環(huán)病毒等。它將會對在有關的疾病中副豬嗜血桿菌所起的作用產(chǎn)生一定程度的影響。⑤除了要解剖已受損傷及臨床癥狀嚴重的豬之外，也需于采用抗生素前開展剖解。以滲透出來的心臟血液、關節(jié)液以及漿膜面物質(zhì)來分離及培養(yǎng)細菌，如果損傷現(xiàn)象較為輕微，同樣需實施上述處理。4分離株及標準株的形態(tài)培養(yǎng)特性及理化特性鑒定4.1形態(tài)培養(yǎng)特性(1)細菌的形態(tài)為多形性的革蘭氏陰性菌，為絲狀、細長且獨立小球狀的桿菌。(2)培養(yǎng)特性在37攝氏度環(huán)境下，于已經(jīng)進行了改良的巧克力瓊脂平板上，開展24小時到48小時的副嗜血桿菌培養(yǎng)，可肉眼來進行實驗觀察，發(fā)現(xiàn)其表面形態(tài)為隆起狀，具有露珠狀，有較為整齊的邊緣，半透明狀，呈灰色。4.2生化特性(1)V因子需要試驗在細菌的呼吸過程中，V因子起到了非常重要的遞氫作用，它為輔酶Ⅰ，也就是NADP+以及NAD+的一類脫氫輔酶。將副豬嗜血桿菌的相關標準株菌落以及被檢分離株挑取出來，在兔鮮血瓊脂平板上近些年接種，其培養(yǎng)過程是在2%胨瓊脂平板上進行，然后通過金黃色葡萄球菌來開展垂直劃線樣或者是點種，在37攝氏度的溫度條件下進行48小時的培養(yǎng)，再觀察其附近菌落的具體生長形態(tài)，和該菌落越接近，則產(chǎn)生的菌落（呈半透明狀）將有越大的尺寸，反之則越小，有時候?qū)o法觀察到菌落生長的現(xiàn)象，也就是所謂的“衛(wèi)星現(xiàn)象”。(2)X因子需要試驗該因子含有鐵卟啉，為存在于血紅蛋白之中的一類衍生物及血紅素，如果置入121攝氏度的溫度條件下保持30分鐘，也將不受到損壞，對于過氧化物酶、細胞色素氧化酶、觸酶以及細菌合成細胞色素等而言，它作為輔基。將副豬嗜血桿菌標準株菌落以及被檢分離株都挑選出來，并且在2%胨瓊脂平板上進行接種。若發(fā)現(xiàn)僅是含有X+V因子的相關紙片附近區(qū)域存在著菌落生長的現(xiàn)象，那么就意味著這一菌株對X以及V等兩類因子均有依賴性。若僅是在含有X+V以及V因子的相關紙片附近區(qū)域存在著菌落生成的現(xiàn)象，那么就意味著這個菌株進對V因子存在著依賴性。(3)生化實驗主要包括過氧化氫酶、甘露糖發(fā)酵、蜜三糖發(fā)酵、樹膠醛糖發(fā)酵、乳糖發(fā)酵、葡萄糖發(fā)酵以及脲酶等，具體所用的反應試劑以及培養(yǎng)基如下所示。TM/SNplatesugar配方BiosatePeptone（BBL）10mgNacl10mg酚紅0.04mg高級瓊脂15mg蒸餾水900ml首先將其進行適當?shù)幕旌?，然后進行加熱以促進溶解，保持到室溫之后，再對PH值進行調(diào)節(jié)，使之達到7.5，再進行相應的分裝，置入密封狀態(tài)的瓶中，在121攝氏度的溫度條件下進行15的保留。對于微量或是大量的實驗工作而言，該法均有良好的適用性。具體見下述內(nèi)容（注：在每90毫升里添加下述物品）：20%的葡萄糖10ml小牛的血清1ml1%NADH0.25mlO-A混合物5ml4.3結(jié)果和討論(1)細菌形態(tài)JZ株與標準株NR4以及SW124都為多形性小桿菌或者革蘭氏陰性小桿狀，相似度較高，與副豬嗜血桿菌的基本形態(tài)一致。(2)分離株生化特性鑒別結(jié)果如下（見表2-1）表2-1分離株生化特性鑒別的結(jié)果測定項目/分離株JZ溶血現(xiàn)象-衛(wèi)星現(xiàn)象+需X因子-尿酶實驗-葡萄糖-樹膠醛糖-乳糖-甘露糖-過氧化氫酶+需氧+CO2增菌培養(yǎng)-菌株污染-(3)討論①酵母菌和產(chǎn)色素的細菌(比如金黃色葡萄球菌)在發(fā)育的過程中可以生成V因子，并在固定場合不斷擴散，可以實現(xiàn)V因子附著性細菌的生長需求，因此會造成衛(wèi)星的情況。衛(wèi)星是判斷V因子是否具有一定的依賴性的重要依據(jù)。②X因子對于培育副豬嗜血桿菌的作用不大，但是嗜血桿菌屬對于X因子的生長作用很大。如果僅含X+V、V因子的紙片附近長有菌落，那么就說明該菌株對V因子的依賴性較強，而對X因子的依賴性較差。此次實驗中出現(xiàn)V因子依賴性的條件下，X因子依賴陽性的能夠鑒別得出并不是副豬嗜血桿菌。③因為培養(yǎng)副豬嗜血桿菌的條件要求極高，挑選特殊的基質(zhì)進行培育或進一步對生化反應管進行完善在生化實驗過程中至關重要。加入一些有效成份有利于提高副豬嗜血桿菌的成功機率(血清、NAD等)，但是一定要保證該成份不能對生化試劑的酸堿值等特性產(chǎn)生作用。5集約化養(yǎng)豬廠副豬嗜血桿菌的病原控制方法真正在養(yǎng)豬生產(chǎn)實踐中，傳染病不能夠被消滅，但是能夠有效控制副豬嗜血桿菌病對于豬場來說也是非常重要的。下面詳細從幾個方面介紹控制副豬嗜血桿菌病的方案集約化養(yǎng)豬場的實施。比如提高飼養(yǎng)水平和質(zhì)量、建立健全免疫制度以及預防疫病等。5.1加強飼養(yǎng)管理改良飼養(yǎng)環(huán)境，提升飼養(yǎng)水平。第一，不允許將不同生產(chǎn)階段的豬放在一起養(yǎng)殖，并且減少豬群經(jīng)常流動；其次營養(yǎng)上要確保飼料良好，配方科學，營養(yǎng)充足，不宜過剩和缺乏；再次，豬舍環(huán)境需要重視，既要做好豬舍通風也要做好保溫措施；最后，值得注意的是引進和混群飼養(yǎng)需要重視的事項，隔離之后才能引進種豬，使用敏感藥物、接種預防免疫接種才能進行混養(yǎng)。嚴格執(zhí)行豬場衛(wèi)生條例，建立健全應急制度。一旦豬群發(fā)生應激時，可預先用預防量的阿莫西林等一些抗生素與飼料混合，這樣有利于起到的預防作用。5.2免疫接種按時接種疫苗有利于有效預防疾病。自家的疫苗和商品疫苗都能夠很好地防控豬群感染副豬嗜血桿菌。多價疫苗是防控副豬嗜血桿菌病的不二之選。依據(jù)Takahashi等臨床和實驗室研究，副豬嗜血桿菌血清2型和5型制備的單價疫苗預防力度總體不如二價疫苗，二價疫苗對臨時發(fā)作的副豬嗜血桿菌病具有較強的預防作用，二次免疫后的70多天都是安全期，這更加有力地說明了不同的血清型交叉會減弱保護強度，相比之下，多價苗作用更加顯著。所以，研制多價苗將是副豬嗜血桿菌疫苗未來一段時間的關鍵任務。新型改進疫苗也有一定的預防交叉感染的能力。AmbleEvans等報道中根據(jù)丹麥、SPF的一系列實驗經(jīng)驗研制出改進型抗Glasser氏病疫苗:Porcilis(r)Glasser。其已在2004年第四季度開始推廣使用，推廣范圍是歐洲境內(nèi)，直到2005年初，該疫苗的佐劑是DiluvacFort、血清5型菌株，而且其能夠提供抗血清1,5,12,13和15型的交叉保護力。滅活苗的使用是我國比較常用的方法之一。鄭明球等建議用副豬嗜血桿菌滅活苗在首次生產(chǎn)的母豬產(chǎn)崽前第四十天和二十天分別進行一次，非首次生產(chǎn)的母豬在產(chǎn)前一個月左右免疫一次，母豬體內(nèi)的抗體可以較好的保護不超過二十八天哺乳仔豬。仔豬在落地后七至十日、三周齡時分別進行免疫一次，或者斷奶時進行一次免疫。自家滅活苗在我國養(yǎng)豬場的應用成果也不少。洪志良等報道環(huán)境條件較為優(yōu)質(zhì)的養(yǎng)豬場，自家的疫苗是由本場未經(jīng)抗生素治療癥狀顯著的發(fā)病豬組織分離病菌制成，由于自家的苗從自身的病豬采出，針對性較好，血清型一致度較高，有利于保護，是當下一種較為有效的預防方法，可以達到極好的防制效果。由生產(chǎn)實踐可知，免疫失敗的情況也會小概率出現(xiàn)，這可能與病程中出現(xiàn)的菌株血清型不一致，所以導致交叉減弱保護強度。副豬嗜血桿菌的化學特性以及特點過于突出，交叉保護力較小。因此，在本質(zhì)上對流行性最高的血清型進行分析了解有利于切實控制病情。除此之外，其他疫病的免疫接種也工作非常關鍵。副豬嗜血桿菌病與其他疾病的繼發(fā)或混合感染，也會將豬群的疾病癥狀加重，機體的免疫力會更差。豬場要依據(jù)科學的免疫流程要重視預防豬喘氣病等一系列豬群容易感染的疫病，使豬群長時間具有良好的免疫力，能夠切實預防豬場的豬副豬嗜血桿菌病發(fā)生繼發(fā)或混合感染的情況出現(xiàn)。5.3藥物預防培養(yǎng)并藥敏副豬嗜血桿菌的試驗表明，其對于阿米卡星、頭孢類等諸多藥物的反應較激烈。種豬在隔離過程中、配種前二十天分別要進行預防。每噸飼糧與200克、300克的阿莫西林和克氟苯尼考摻雜飼喂兩周。將要生產(chǎn)的母豬每噸飼糧摻入1000克利高霉素，200克阿莫西林，分娩前喂7天，分娩后喂7天。哺乳仔豬舊齡、7日齡、21日齡各肌肉分別注射一次“速解靈”(頭抱唾吠500毫克/毫升)，舊齡、滿七日每頭0.2毫