中藥配伍對(duì)黃連抑菌作用的影響

中藥配伍對(duì)黃連抑菌作用的影響

黃連是一種常見(jiàn)的中藥，具有清熱除濕、清火解毒的功效。據(jù)現(xiàn)代藥理研究表明,黃連具有抗微生物多種生理活性,小檗堿為其主要有效成分之一。體外實(shí)驗(yàn)證明:黃連和小檗堿的抗菌作用基本一致。為了進(jìn)一步探討中藥配伍與療效的關(guān)系,筆者研究黃連與甘草等中藥配伍的抗微生物作用,用以分析中藥配伍對(duì)黃連抑菌作用的影響。1實(shí)驗(yàn)菌株、培養(yǎng)基①53W紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(上海光學(xué)儀器廠);②凈化工作臺(tái)(蘇州凈化設(shè)備廠)、培養(yǎng)皿(Φ90mm)、游標(biāo)卡尺;③實(shí)驗(yàn)菌株:金黃色葡萄球菌、志賀氏痢疾桿菌(湖北中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科提供);④培養(yǎng)基:普通肉湯培養(yǎng)基(按中國(guó)藥典配制)、肉湯瓊脂培養(yǎng)基(杭州微生物試劑廠);⑤磷酸緩沖液:按中國(guó)藥典配制,PH=7.4;⑥鹽酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)品(購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所)。本實(shí)驗(yàn)所用藥材均購(gòu)自武昌區(qū)藥材公司,經(jīng)湖北中醫(yī)學(xué)院鑒定教研室鑒定均為中國(guó)藥典規(guī)定之正品,所用試劑均為分析純。2中藥湯劑中小堿的含量測(cè)定(1)樣品制備標(biāo)準(zhǔn)溶液配制精密稱取(105℃恒重)鹽酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)品1.6mg,置100ml容量瓶中,加水溶解,定溶至刻度,濃度為16ug/ml,搖勻備用。壓力稱取黃連100g,加水煎煮2次,第1次30min,第2次20min,濾過(guò),合并濾液,冷后加水稀釋至200ml;雙層濾紙濾過(guò),精密量取濾液1ml,置50ml容量瓶中,加水至刻度,搖勻即得。黃連和甘草的聯(lián)合劑稱取黃連與甘草各100g,加水煎煮,操作同黃連煎劑。3黃連和大黃的制備配方稱取黃連與大黃各100g,加水煎煮,操作同黃連煎劑。黃連和蜂蜜湯劑稱取黃連與金銀花各100g,加水煎煮,操作同黃連煎劑。黃連和黃鼠尾的制備配方稱取黃連與黃芩各100g,加水煎煮,操作同黃連煎劑。黃連和梔子湯劑稱取黃連與梔子各100g,加水煎煮,操作同黃連煎劑。(2)溴烷香草酚藍(lán)溶液精密量取配制的標(biāo)準(zhǔn)品溶液1、2、3、4、5ml,分別置60ml分液漏斗中,加水至5ml,加入磷酸緩沖液5ml,0.1%溴麝香草酚藍(lán)溶液1ml,精密加入氯仿10ml,振搖,放置使分層,分取氯仿層置離心管中離心;另取5ml水以同樣操作做空白對(duì)照。置53W紫外分光光度計(jì)于波長(zhǎng)420nm處進(jìn)行測(cè)定,根據(jù)測(cè)定結(jié)果求得回歸方程為:A=0.00365+0.06725C,r=0.9996(n=5),線性范圍16~80ug。(3)損失率的測(cè)定精密吸取樣品溶液1ml,按標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)操作,測(cè)定個(gè)樣品中黃連總生物堿的含量(以鹽酸小檗堿計(jì)算),并求算出損失率。結(jié)果見(jiàn)表1、表2。3黃連、黃連、甘草等合用中藥抗菌作用(1)試驗(yàn)溶液的制備黃連試液精密量取上述制備的黃連煎劑1ml,置10ml容量瓶中,加磷酸緩沖液至刻度,搖勻即得。黃連和甘草試驗(yàn)溶液精密量取上述制備的黃連與甘草煎劑1ml,置10ml容量中,加磷酸緩沖液至刻度,搖勻即得。試驗(yàn)溶液為黃連和大黃精密量取上述制備的黃連與大黃煎劑1ml,置10ml容量中,加磷酸緩沖液至刻度,搖勻即得。黃連和蜂蜜試液精密量取上述制備的黃連與金銀花煎劑1ml,置10ml容量中,加磷酸緩沖液至刻度,搖勻即得。黃連和黃鼠尾試驗(yàn)溶液精密量取上述制備的黃連與黃芩煎劑1ml,置10ml容量中,加磷酸緩沖液至刻度,搖勻即得。黃連和梔子測(cè)試溶液精密量取上述制備的黃連與梔子煎劑1ml,置10ml容量中,加磷酸緩沖液至刻度,搖勻即得。(2)菌懸液的制備取檢驗(yàn)菌(金黃色葡萄球菌、痢疾桿菌),接種于普通肉湯瓊脂斜面,37℃培養(yǎng)18h,用10ml肉湯培養(yǎng)基洗下菌苔,稀釋成0.1倍的均勻懸液備用。(3)膜加菌抑菌圈為度按《中國(guó)藥典》95版二部附錄方法制備雙碟,菌層加菌是以獲得清晰的抑菌圈為度。在不銹鋼管中加上述供試液10ml后,37℃培養(yǎng)16~18h,測(cè)定抑菌圈直徑,統(tǒng)計(jì)結(jié)果見(jiàn)表1、表2。4不同配伍藥物的配伍對(duì)抑菌作用影響黃連為常用中藥,大量出現(xiàn)在中藥復(fù)方中,也常與其它藥物組成配伍藥對(duì)。近年來(lái),對(duì)黃連與甘草等中藥配伍后的沉淀反應(yīng)研究較多,但大多是從定性方面進(jìn)行研究,本研究對(duì)其進(jìn)一步的定量研究表明,黃連與甘草等不同中藥配伍因發(fā)生沉淀反應(yīng),其有效成分小檗堿的損失是不同的;并進(jìn)一步對(duì)其配伍藥效學(xué)研究表明,黃連與甘草等不同中藥配伍,其抗微生物作用變化與小檗堿的損失具有一定的相關(guān)性,但也存在一定的差異。對(duì)金黃色葡萄球菌作用表明:黃連與甘草、梔子配伍后,因小檗堿的損失,抑菌作用降低較多;黃連與金銀花、黃芩配伍,雖小檗堿損失分別達(dá)51.85%和61.20%,但其抑菌作用降低反而較與甘草、梔子配伍時(shí)少;而與大黃配伍時(shí)僅略有降低。對(duì)痢疾桿菌作用表明:黃連與甘草、梔子配伍后,抑菌作用降低較大;與金銀花、大黃配伍時(shí),抑菌作用降低較前兩者低;與黃芩配伍時(shí)抑菌作用降低不大。分析以上作用的原因:其一,因配伍后,小檗堿沉淀?yè)p失致使各種配伍藥對(duì)抑菌效應(yīng)均有不同程度降低。其二,在配伍藥物中,因甘草、梔子對(duì)金黃色葡萄球菌和痢疾桿菌均無(wú)作用,致使因小檗堿的損失,兩者與黃連配伍后,對(duì)兩種細(xì)菌的抑菌作用均降低較多;因金銀花、大黃、黃芩對(duì)金黃色葡萄球菌和痢疾桿菌均有一定的作用,彌補(bǔ)了因小檗堿的損失而出現(xiàn)的抑菌作用的下降,其中因黃芩對(duì)痢疾桿菌作用強(qiáng)于對(duì)金黃色葡萄球菌的作用,雖配伍后小檗堿的損失達(dá)61.20%,而抑菌作用降低不多;大黃因?qū)α〖矖U菌作用弱于金黃色葡萄球菌,致使配伍后對(duì)痢疾桿菌的作用降低較大。分析結(jié)果表明:黃連與甘草等配伍后,小檗堿的損失與抑菌作用的減弱