糖化血紅蛋白的基礎(chǔ)知識(shí)培訓(xùn)

糖化血紅蛋白的根底知識(shí)培訓(xùn)1c定義1c:葡萄糖與血紅蛋白β鏈氨基酸末端的6個(gè)氨基酸結(jié)合產(chǎn)生的一種特定的糖化血紅蛋白血紅蛋白被糖化后，氨基酸末端所帶負(fù)電荷會(huì)增加0：沒(méi)有結(jié)合葡萄糖的血紅蛋白β鏈氨基酸末端的6個(gè)氨基酸1c以百分比表示，即以和葡萄糖結(jié)合的血紅蛋白占全部血紅蛋白的比例正常參考范圍：46%〔標(biāo)化的方法〕糖化血紅蛋白-血紅蛋白的糖基化產(chǎn)物葡萄糖進(jìn)入紅細(xì)胞，在內(nèi)部與血紅蛋白發(fā)生反響血紅蛋白葡萄糖紅細(xì)胞糖化血紅蛋白的生物合成過(guò)程〔兩步〕血紅蛋白葡萄糖中間產(chǎn)物1c堿1c第一部：快速反響，生成不穩(wěn)定A1c〔1c〕第二步：緩慢反響，生成穩(wěn)定的A1c〔1c〕糖化和非糖化的血紅蛋白HbHbA0HbA1HbA1aHbA1bHbA1cHbA(

??)HbA2(

)HbF(

)95%<2%1-3.5%成人血紅蛋白分三種為主要成人非糖化糖化6-8%87-89%血紅蛋白1c是如何計(jì)算的？A1101離子交換色譜所別離的組分解釋

〔非糖尿病樣本〕的組成%與糖類的結(jié)合1a<1%1與1,6-二磷酸果糖結(jié)合而成1b<1%丙酮酸與β鏈氨基末端纈氨酸結(jié)合而成<1%胎兒血紅蛋白1c<1%血紅蛋白形成1c之前的中間產(chǎn)物1c4~6%鏈氨基酸端與葡萄糖結(jié)合的產(chǎn)物0<90%非糖化血紅蛋白

胎兒血紅蛋白在胎兒及出生6個(gè)月以內(nèi)的新生兒體內(nèi)為高濃度，6個(gè)月后根本降為成人水平婦產(chǎn)科1c主要用于糖尿病妊娠的篩查色譜圖舉例1a&1b

的次要組分1c(希夫堿)和氨甲基乙?；?/p>

1cA0總面積為100萬(wàn)-500萬(wàn)A1c結(jié)果小結(jié)什么是1c和0？A1c被糖化后什么電荷增加了？為什么糖化血紅蛋白在A0峰之前被洗脫下來(lái)？測(cè)量糖化血紅蛋白為什么要先對(duì)樣本溶血？1c是如何計(jì)算的？成人血紅蛋白包括哪幾種？是什么？濃度高時(shí)是否會(huì)對(duì)A1c造成干擾？為什么？伯樂(lè)的糖化試劑能報(bào)告嗎？為什么？糖化的血紅蛋白包括哪幾種？1c實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法常見(jiàn)的1c檢測(cè)方法

主要有三種檢測(cè)方法:

1.離子交換高壓液相色譜〔〕直接別離1c檢測(cè)產(chǎn)物為總糖化血紅蛋白3.免疫法檢測(cè)產(chǎn)物為1c各檢測(cè)方法的精密度 方法 精密度電泳+ 免疫法 低壓液相色譜〔〕 高壓液相色譜〔〕

各檢測(cè)方法的分析物HbA(a2b2)HbA1HbA0HbA1aHbA1bHbA1c非糖化成分糖化成分離子交換色譜和免疫法檢測(cè)物硼酸親和色譜檢測(cè)物離子交換檢測(cè)糖化血紅蛋白1c的金標(biāo)準(zhǔn)方法研究中唯一所采用的1c檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)化的參考方法

檢測(cè)原理：基于1c與其它血紅蛋白組分所帶電荷不同，在一定的緩沖液離子強(qiáng)度下可與分析柱樹(shù)脂外表偶聯(lián)的離子基團(tuán)有不同程度的結(jié)合，從而將1c與其它組分(1b,10)區(qū)分開(kāi)而得到別離。離子交換檢測(cè)原理色譜圖的橫坐標(biāo)是時(shí)間，縱坐標(biāo)是信號(hào)強(qiáng)度，反映各分析峰濃度的上下被校準(zhǔn)的峰被陰影化被校準(zhǔn)的峰被陰影化離子交換的特點(diǎn)采用離子交換原理基于的平臺(tái)方法的試劑組成包括：分析柱、緩沖液、校準(zhǔn)品采用分析柱內(nèi)填充的離子交換樹(shù)脂作為固定相，樹(shù)脂上面偶聯(lián)了帶電荷基團(tuán)以可形成不同離子強(qiáng)度洗脫梯度的緩沖試劑作為流動(dòng)相。溯源性由試劑盒配套的校準(zhǔn)品保證別離效果的影響因素分析柱內(nèi)的填充物〔顆粒越小，別離效果越好，速度越慢〕分析柱柱長(zhǎng)〔越長(zhǎng)，別離效果越好，速度越慢〕離子交換的優(yōu)缺點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)：2.結(jié)果準(zhǔn)確，可靠分析物為1c。高分辨率方法可同時(shí)區(qū)分常見(jiàn)血紅蛋白變異體，給臨床醫(yī)生已額外的醫(yī)療提示3.精密度好<3%缺點(diǎn)：需要單獨(dú)的檢測(cè)設(shè)備試劑本錢(qián)較高〔操作人員對(duì)異常色譜圖的區(qū)分有一定的要求〕硼酸親和色譜法血紅蛋白被糖化后，會(huì)產(chǎn)生一個(gè)特殊的順式二糖醇基團(tuán)，該基團(tuán)可與分析柱上的硼酸基團(tuán)之間特異和可逆的結(jié)合；而非糖化血紅蛋白〔A0〕不與分析柱結(jié)合，最先被洗脫出來(lái)從而實(shí)現(xiàn)糖化成分與非糖化成分別離，檢測(cè)物為總糖化血紅蛋白1c的結(jié)果是計(jì)算出來(lái)的硼酸親和的優(yōu)缺點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)：僅區(qū)分糖化和非糖化，不受變異體的檢測(cè)干擾缺點(diǎn)：非直接檢測(cè)1c，1c存在計(jì)算錯(cuò)誤的可能胎兒血紅蛋白高的病人結(jié)果偏低血紅蛋白變異體純合子〔如〕的病人仍然報(bào)告1c不能區(qū)分血紅蛋白變異體，無(wú)法給臨床以額外的信息

抗原抗體反響試劑有一種特有的凝集物導(dǎo)致抗體-乳膠的凝集，濁度增加1c與抗體-乳膠的結(jié)合對(duì)凝集物的凝集有抑制作用，濁度降低免疫分析法

免疫分析法的特點(diǎn)基于生化分析儀的平臺(tái)〔需要手工預(yù)處理樣品〕精密度一般較差〔>5%〕只報(bào)1c一個(gè)數(shù)值，不能檢測(cè)血紅蛋白變異體高血紅蛋白F樣本的1c檢測(cè)結(jié)果偏低嚴(yán)重的黃疸和高脂血影響比色結(jié)果國(guó)產(chǎn)糖化試劑的非標(biāo)準(zhǔn)化問(wèn)題小結(jié)糖化血紅蛋白的主要檢測(cè)方法有什么？檢測(cè)產(chǎn)物分別是什么？的中文全稱是什么？1c檢測(cè)的金標(biāo)準(zhǔn)方法是？為什么？離子交換的檢測(cè)原理是基于什么的不同？檢測(cè)試劑應(yīng)該包括哪些主要的組分？分析柱中填充的是什么？上面偶聯(lián)了什么？不同緩沖液的區(qū)別是什么？不同離子交換方法的分辨率一樣嗎？分辨率的關(guān)鍵影響因素是什么？糖化血紅蛋白檢測(cè)結(jié)果的溯源性由哪種試劑保證？伯樂(lè)糖化產(chǎn)品的色譜圖橫坐標(biāo)是什么？縱坐標(biāo)是什么？硼酸親和色譜法的檢測(cè)原理是基于什么？色譜圖有幾個(gè)峰？分別是什么？硼酸親和色譜法是怎么檢測(cè)1c的？免疫法檢測(cè)糖化血紅蛋白的原理是基于什么反響？國(guó)產(chǎn)免疫法試劑的缺點(diǎn)有哪些？1c實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)干擾因素常見(jiàn)檢測(cè)干擾因素非方法學(xué)特異的干擾因素改變紅細(xì)胞壽命的生理?xiàng)l件可影響1c結(jié)果導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果假性偏低鐮刀細(xì)胞性貧血和溶血性貧血維他命C和E〔抑制糖化作用〕導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果假性偏高鐵缺乏性貧血，脾切除術(shù)后真性紅細(xì)胞增多癥〔高原地區(qū)〕妊娠期濃度偏低，1c比正常人偏低方法學(xué)特異的干擾因素血紅蛋白變異體(如,，,)血紅蛋白衍生物(乙酰化、甲?；苌锏?長(zhǎng)期服用阿斯匹林的病人，體內(nèi)乙?；?，結(jié)果偏高腎衰病人的氨甲?；瑢?dǎo)致結(jié)果偏高堿〔A1c中間產(chǎn)物〕某些血糖濃度急劇變化的1型糖尿病人，堿升高，胎兒血紅蛋白嚴(yán)重的黃疸、高血脂血紅蛋白變異體的發(fā)生率全世界已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了超過(guò)一千種血紅蛋白變異體全球的血紅蛋白變異體發(fā)生率的最新數(shù)據(jù)是7%*非洲裔美國(guó)人：7.8%；2.3%1988年,2.5‰,河南**2001年,3.2‰,絲綢之路***云南：4%云南省的阿昌族的發(fā)病率為41.2%*E.:,,.1..2021;108(31-32):532-540.**河南省異常血紅蛋白的調(diào)查與化學(xué)結(jié)構(gòu)的分析研究,新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),1988,(02)9-12***中國(guó)絲綢之路地區(qū)血紅蛋白病的遺傳流行病學(xué)的特點(diǎn)，人類學(xué)學(xué)報(bào)，2001，V20變異體對(duì)1c準(zhǔn)確性的影響1.,2021,血紅蛋白變異體對(duì)1c結(jié)果準(zhǔn)確性的影響對(duì)局部方法的檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性有影響例：A0后有變異體的糖尿病人樣本，正常G8標(biāo)準(zhǔn)模式試劑的檢測(cè)結(jié)果偏低1%G8模式試劑〔1.6分鐘〕G8標(biāo)準(zhǔn)模式試劑〔1.0分鐘〕血紅蛋白變異體與血糖監(jiān)控血紅蛋白變異體會(huì)影響紅細(xì)胞的壽命，紅細(xì)胞的壽命會(huì)影響糖化血紅蛋白的生成這些病人或許應(yīng)該有不同的糖化血紅蛋白的監(jiān)控時(shí)間或者改用其他指標(biāo)來(lái)評(píng)估血糖小結(jié)影響1c檢測(cè)結(jié)果的非方法學(xué)特異的干擾因素影響1c檢測(cè)的方法學(xué)特異的干擾因素有哪些？變異體與A0沒(méi)有別離開(kāi)的情況下會(huì)導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果偏高還是偏低？為什么？變異體與A1c沒(méi)有別離開(kāi)的情況下會(huì)導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果偏高還是偏低？為什么？血紅蛋白變異體會(huì)通過(guò)兩個(gè)方面影響糖化血紅蛋白，請(qǐng)?jiān)斒觥ＥR床上對(duì)于有血紅蛋白變異體的病人有什么建議？實(shí)驗(yàn)室應(yīng)該怎么滿足臨床的這一需求？糖化血紅蛋白實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)指南的要求2021年中國(guó)糖尿病雜志8月刊分析系統(tǒng)的要求測(cè)定方法要求溯源到參考方法，如認(rèn)證方法〔認(rèn)證的有效期是1年〕2.實(shí)驗(yàn)室要知曉所選分析系統(tǒng)可能存在的干擾因素3.方法的精確性不能滿足臨床要求，目前不能用于糖尿病的診斷中國(guó)三級(jí)醫(yī)院的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)情況數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)于歷年室間質(zhì)評(píng)數(shù)據(jù)采用標(biāo)準(zhǔn)化方法的實(shí)驗(yàn)室占比81%1c1在和結(jié)果發(fā)表之前，美國(guó)有800個(gè)試驗(yàn)室在做A1c檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)調(diào)查顯示在不同的實(shí)驗(yàn)室，用不同的檢測(cè)方法得出的A1c結(jié)果存有巨大的差異。1c檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)化美國(guó)從1996年起開(kāi)展國(guó)家糖化血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)化方案〔〕，在1c的檢測(cè)值一致性方面取得了巨大成功在的中心實(shí)驗(yàn)室所采用的參考方法是離子交換由指導(dǎo)委員會(huì)和實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)組成。實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)包括一級(jí)中心參考實(shí)驗(yàn)室〔〕、一級(jí)參考實(shí)驗(yàn)室〔〕和二級(jí)參考實(shí)驗(yàn)室〔〕目的:

1.糖化血紅蛋白檢測(cè)工程實(shí)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)化

2.以使各臨床試驗(yàn)室的檢測(cè)結(jié)果與的報(bào)告結(jié)果具有可比性

(該試驗(yàn)建立了平均血糖與糖尿病并發(fā)癥的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)之間的關(guān)系)臨床實(shí)驗(yàn)室NGSP網(wǎng)絡(luò)廠商校準(zhǔn)品1新鮮血程序(精密度與偏差)認(rèn)證2新鮮血能力比對(duì)測(cè)試3新鮮血標(biāo)準(zhǔn)化對(duì)A1c檢測(cè)的奉獻(xiàn)從無(wú)序到有序2021年調(diào)查顯示2000多家實(shí)驗(yàn)室間使用不同的檢測(cè)方法的在1.3-7.1%之間，基于A1c檢測(cè)結(jié)果已經(jīng)能夠有效的標(biāo)準(zhǔn)化標(biāo)準(zhǔn)化2002年發(fā)表文件，正式推薦1c檢測(cè)的參考方法為(質(zhì)譜)或(毛細(xì)管電泳)校準(zhǔn)品為純化的和1c混合物，共6個(gè)濃度室內(nèi)0.47～2.07%；室間1.35～2.27%但是，和方法檢測(cè)1c值存在12%的差異IFCC%HbA1c2.13.2

4.3

5.4

6.4

7.5

8.6

9.710.7

NGSP%HbA1c456789101112偏差

1.9

1.8

1.7

1.6

1.6

1.5

1.4

1.3

1.3非糖尿病范圍控制目標(biāo)需采取治療措施各個(gè)標(biāo)準(zhǔn)與之間的轉(zhuǎn)換1c1c2.03.64.35.66.47.68.69.610.811.61c46810121c的檢測(cè)必須在世界范圍內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)化，包括參考系統(tǒng)和數(shù)值報(bào)告的參考系統(tǒng)是唯一的標(biāo)準(zhǔn)化參考系統(tǒng)1c以單位()以及轉(zhuǎn)換的(%)報(bào)告，使用換算公式需要確保基層糖尿病容易獲得和轉(zhuǎn)換公式雜志編輯和出版物建議采用()和雙重單位報(bào)告1c糖化血紅蛋白的標(biāo)準(zhǔn)化稱謂為1c，在指南或教育材料中也可以簡(jiǎn)寫(xiě)為A1C2021年1c標(biāo)準(zhǔn)化第二次全球共識(shí)

(、、、和)2021,,,,,,.=[0.09148*]+2.152和之間的轉(zhuǎn)換=[0.09148*]+2.152糖化血紅蛋白1c

1c的臨床應(yīng)用

與實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)相符相承實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)化血糖監(jiān)控指標(biāo)糖尿病篩查與診斷19932021分析系統(tǒng)性能指標(biāo)要求報(bào)告結(jié)果：以1c相當(dāng)于1c報(bào)告結(jié)果，因?yàn)橹挥羞@一個(gè)分析工程才有評(píng)估并發(fā)癥發(fā)生的優(yōu)良數(shù)據(jù)庫(kù)。精密度：室內(nèi)<3%,以小于2%為宜；測(cè)定質(zhì)量目標(biāo)：<0.5%1c準(zhǔn)確度驗(yàn)證方法：1〕參加室間質(zhì)評(píng)活動(dòng)2〕檢測(cè)有證參考物質(zhì)；3〕與運(yùn)行經(jīng)過(guò)認(rèn)證系統(tǒng)的有資質(zhì)實(shí)驗(yàn)室的測(cè)定結(jié)果進(jìn)行比對(duì)注意：沒(méi)有直接的證據(jù)顯示其它檢查的數(shù)據(jù)與糖尿病長(zhǎng)期并發(fā)癥風(fēng)險(xiǎn)有關(guān)(例如：總糖化血紅蛋白、果糖胺或糖化血清蛋白)實(shí)驗(yàn)室不精密度對(duì)檢測(cè)結(jié)果變異性的影響6.5%的1c在不同分析不精密度水平下的95.5%離散程度不同室內(nèi)對(duì)A1C分析的影響

〔95%的可信區(qū)間〕%6.0%A1C6.5%A1C7.0%A1C25.76-6.246.24-6.766.72-7.2835.64-6.366.11-6.896.58-7.4255.4-6.65.85–7.156.3–7.7正常人和病人無(wú)法區(qū)分