銀杏葉提取物egb761抗心律失常的機制研究

銀杏葉提取物egb761抗心律失常的機制研究

銀杏作為一種藥物使用于哮喘和支氣管炎的治療。EGB761是標(biāo)準(zhǔn)的銀杏葉提取物,主要活性成份為黃酮類和萜類,具有改善細胞代謝,清除自由基以及促進微循環(huán)等廣泛的藥理作用。實驗證實EGB761能顯著減少心肌缺血再灌注心律失常。本文旨在觀察EGB761對由烏頭堿、氯化鋇等誘發(fā)動物心律失常以及對乳頭肌動作電位各項電生理參數(shù)的影響,為臨床銀杏葉及其制劑防治心律失常提供實驗依據(jù)。一、材料和方法1.材料表面(1)sd大鼠與肝鼠的急性毒性實驗選用本校實驗動物中心提供的健康雄性SD大鼠與豚鼠。將250~300g大鼠隨機分為對照組,復(fù)方丹參組,銀杏葉提取物(EGB761)組(以下簡稱EGB組)。(2)銀杏葉提取物氯化鋇為上海化工實驗藥廠產(chǎn)品,烏頭堿為美國Sigma公司產(chǎn)品,銀杏葉提取物(EGB761)由浙江康恩貝藥業(yè)有限公司惠贈,復(fù)方丹參注射液為上海第九制藥廠生產(chǎn)。(3)u3000酸、堿和糖等混合氣體飽NaCl137.0,KCl5.4,CaCl21.8,MgCl20.5,NaHCO323.8,NaH2PO40.4,葡萄糖11,用95%O2和5%CO2混合氣體飽和,pH=7.4。2.銀杏葉提取物ebc761的誘導(dǎo)致血藥濃度測量(1)?銀杏葉提取物(EGB761)預(yù)防給藥抗烏頭堿誘發(fā)心律失常實驗:麻醉動物用20%烏拉坦按0.8ml/100g腹腔注射,仰臥固定,頸靜脈插管備用;對照組經(jīng)靜脈注射生理鹽水(0.1ml/100g),復(fù)方丹參組經(jīng)靜脈注射復(fù)方丹參注射液(100mg·0.1ml-1·100g-1);EGB組經(jīng)靜脈注射EGb761(100mg·0.1ml-1·100g-1),2min內(nèi)注射完,穩(wěn)定10min后由頸靜脈通過微量恒速注射泵恒速注入烏頭堿溶液(6μg·0.2ml-1·min-1),通過X-JⅡ型心電監(jiān)視儀(上海醫(yī)用電子儀器廠產(chǎn)品)密切觀察并記錄Ⅱ?qū)?lián)心電圖,并準(zhǔn)確計算誘發(fā)異常心電圖氯化鋇的用藥劑量。銀杏葉提取物(EGB761)為實驗前新鮮配置,加入灌流液中。(2)?銀杏葉提取物(EGB761)預(yù)防給藥抗氯化鋇誘發(fā)心律失常實驗:實驗步驟基本同前,不同處在于三組注射EGB761穩(wěn)定10min后由頸靜脈通過微量恒速泵恒速注射4%氯化鋇(0.2ml/min)。(3)?銀杏葉提取物(EGB761)對豚鼠乳頭肌動作電位的影響:取豚鼠體重250~350g,雌雄不拘,重擊后腦致昏,迅速開胸取出心臟,置于37℃,95%O2和5%CO2飽和的臺氏液中,解剖分離出右心室乳頭肌,用0號不銹鋼針將標(biāo)本固定于恒溫(36℃±0.5℃),恒流(5ml/min)的灌流槽底部。刺激電極的尖端直徑為0.5mm,以尖端裸露的雙極不銹鋼電極,作細胞外刺激。刺激器(NIHONHONDESEN7103)經(jīng)隔離器輸出波寬1ms、強度為閾值1.5倍的刺激波,刺激頻率為1Hz。記錄電極為充以3mol/LKCl的玻璃微電極,電極電阻10~15MΩ。用微操縱器(NARISHIGE)將電極插入心肌細胞內(nèi)引出正常形態(tài)的動作電位,信號經(jīng)微電極放大器(NIHONKOHDEN)放大后輸入雙線示波器中顯示,同時經(jīng)SMUP-PC型生物信號處理系統(tǒng),經(jīng)MCP2000軟件對其顯示、儲存及分析。(4)?統(tǒng)計處理:實驗結(jié)果以xˉ±sxˉ±s表示,組間資料用團體t檢驗。二、結(jié)果1.室顫及停工的劑量實驗結(jié)果顯示,對照組在靜脈給烏頭堿平均劑量達0.065mg/kg時出現(xiàn)室性早搏,劑量達0.085mg/kg時發(fā)生室速,劑量達0.115mg/kg時誘發(fā)室顫,當(dāng)劑量增加至0.142mg/kg時則導(dǎo)致心跳停搏。而EGB761組與復(fù)方丹參注射液組則明顯提高了烏頭堿誘發(fā)的室早、室速、室顫及停搏的劑量。經(jīng)t檢驗,EGB761組與復(fù)方丹參組同對照組比差異均具有顯著性意義(P<0.05~0.01),尤其EGB761組與對照組比較差異有顯著性意義(室早,室顫和停搏的劑量P<0.01),詳見表1。2.復(fù)方丹參組、ebc71組與對照組比較EGB761組和復(fù)方丹參組均使氯化鋇誘發(fā)的大鼠室早,室速,室顫及致死劑量增加,而復(fù)方丹參組與EGB761組兩者比較差異無顯著性意義(P>0.05),但乃可看出出現(xiàn)各種室性心律失常的劑量相比EGB761組大于復(fù)方丹參組。詳見表2。3.無藥物作用30min時動作電位以刺激頻率為1Hz及正常臺氏液灌流標(biāo)本60min后,記錄心肌細胞動作電位,待其波形穩(wěn)定30min后開始實驗并記錄動作電位各項電生理參數(shù),此數(shù)值作為對照值(n=8)。實驗時換用含不同濃度EGB761的臺氏液灌流標(biāo)本30min(因為藥物效應(yīng)較緩慢,需30min才可達穩(wěn)態(tài)),此時記錄的動作電位各項參數(shù)與用藥灌流前對照值比較,并以無藥物的正常臺氏液洗回驗證藥物的效應(yīng)(每一種濃度n=8)。結(jié)果顯示:當(dāng)劑量低于25mg/L時,藥物作用60min對動作電位形態(tài)變化甚微;當(dāng)劑量在25~75mg/L范圍內(nèi),藥物作用10min時動作電位時程開始逐漸縮短,并在30min內(nèi)達到相對穩(wěn)定;與對照值相比,本實驗選用的25mg/L,50mg/L和75mg/L分別使APD50縮短5.8%,9.4%和13.6%;APD90則分別縮短4.4%,8.4%和12.0%,且呈劑量依賴性;這一效應(yīng)可被無EGb761的正常臺氏液洗回(n=8)。劑量繼續(xù)增大至100mg/L,30min內(nèi)動作電位形態(tài)變化與75mg/L效應(yīng)無顯著性差異(n=8,P>0.05)。詳見表3。三、抗心律失常機制EGB761是銀杏葉的一種標(biāo)準(zhǔn)提取物,含24%黃酮類(銀杏黃酮甙A、B、C)和6%萜類(銀杏內(nèi)酯和白果內(nèi)酯)。有資料表明銀杏內(nèi)酯可抑制PAF引起的心律失常,提高G毒毛旋花子甙引起心律失常的閾值劑量。EGB761能減少心肌缺血再灌注大鼠心臟各種室性心律失常發(fā)生率、室早的發(fā)生數(shù)目以及室速和室顫的發(fā)生時間。而本實驗通過大鼠整體實驗表明EGB761有明顯的抗心律失常的作用。烏頭堿和氯化鋇引起的心律失常機制與心肌細胞膜對Na+、K+、Ca2+離子通透性有關(guān),烏頭堿使心肌興奮性增高,心率加快,收縮加強,繼而出現(xiàn)心律失常。電生理實驗也證明烏頭堿能促進Na+內(nèi)流,加速心肌細胞0相去極化速率,誘發(fā)心律失常。Ba2+通過慢通道過量進入心肌細胞,導(dǎo)致異位節(jié)律而產(chǎn)生心律失常。EGB761中的黃酮類化合物有擴張冠狀血管,改善血管末梢,抑制PAF等作用,促進循環(huán)作用,抑制心臟缺血性損害和血栓形成及清除氧自由基的作用。萜類化合物尤其是銀杏內(nèi)酯B(BN-52021)亦有清除氧自由基、拮抗PAF的作用。有實驗表明EGB761能通過清除NO,減少OFR的生成。實驗研究還表明EGB761能顯著減少離體大鼠心臟缺血再灌注后心肌組織MDA含量并與離體大鼠心臟心律失常改善程度密切相關(guān)。本項實驗乳頭肌動作電位各參數(shù)顯示EGB761可縮短動作電位時程,其中APD50縮短較APD90明顯,就APD50縮短效應(yīng)機制分析,期間所涉及的主要離子成分為Ca2+與K+,這可能與Ca2+內(nèi)流減少以及(或)K+外流增加所致,具體細節(jié)尚待今后跨膜離子流水平研究進一步闡明。心律失常的機制比較復(fù)雜,影