復(fù)燃戒斷法評(píng)價(jià)嗎啡成癮模型大鼠的抑郁行為

復(fù)燃戒斷法評(píng)價(jià)嗎啡成癮模型大鼠的抑郁行為

藥物依賴是指在反復(fù)使用含糊劑的藥物的過(guò)程中，在身體和藥物之間相互作用形成的特定狀態(tài)。這種狀態(tài)包括心理狀態(tài)和生理狀態(tài)，其中特定的心理狀態(tài)也被稱為心理欲望和精神依賴。這是藥物依賴的主要表現(xiàn)。藥物依賴又稱藥物濫用(drugabuse)、藥物使用不當(dāng)(drugmisuse)、藥物成癮(drugaddiction),WHO在1964年正式命名為藥物依賴。藥物依賴形成的核心機(jī)制是中腦-邊緣-皮質(zhì)系統(tǒng)獎(jiǎng)賞環(huán)路的激活。在此環(huán)路中伏隔核(nucleusaccumbens,NAc)內(nèi)的多巴胺水平改變,是藥物依賴形成和反復(fù)發(fā)作的關(guān)鍵。而中腦腹側(cè)被蓋區(qū)(ventraltegmentalarea,VTA)的多巴胺神經(jīng)元與NAc區(qū)神經(jīng)元間突觸聯(lián)系的興奮程度將直接影響多巴胺在NAc區(qū)的釋放,進(jìn)一步影響藥物依賴形成的幾率。精神依賴指依賴者的心理覓藥渴求與通過(guò)重復(fù)用藥所達(dá)到的許多欣快或愉快的內(nèi)心體驗(yàn),主要表現(xiàn)為持續(xù)性覓藥行為,在成癮過(guò)程中表現(xiàn)為獎(jiǎng)賞作用,這能起到正性強(qiáng)化的作用。臨床上,阿片依賴患者容易出現(xiàn)后續(xù)的戒斷癥狀,包括自主的、軀體的以及情緒情感癥狀,如狂躁、抑郁、焦慮、高度激惹。這種負(fù)面不穩(wěn)定情緒是危害人類身心健康、社會(huì)穩(wěn)定的嚴(yán)重問(wèn)題。國(guó)外研究表明精神藥物濫用患者在藥物戒斷后可引起焦躁抑郁相關(guān)的情緒紊亂在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物上也得到了驗(yàn)證。同時(shí),精神抑郁癥都涉及到大腦獎(jiǎng)賞環(huán)路和獎(jiǎng)賞效應(yīng)的主要神經(jīng)遞質(zhì)-多巴胺(dopamine,DA),說(shuō)明抑郁和慢性藥物依賴的神經(jīng)解剖、神經(jīng)生物學(xué)基礎(chǔ)有著高度的關(guān)聯(lián)性;目前,國(guó)內(nèi)外對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物藥物依賴模型的建立,多數(shù)以腹腔注射或皮下注射為主,并不能很好的解決與人類自發(fā)覓藥相似性的問(wèn)題。本文采用自身給藥系統(tǒng)對(duì)大鼠建立自發(fā)性覓藥的成癮模型,更準(zhǔn)確地模擬人的自發(fā)性覓藥和復(fù)吸,評(píng)估小劑量復(fù)燃后的戒斷和焦慮抑郁樣行為表現(xiàn),為藥物依賴戒斷后抑郁模型的建立及其后續(xù)更深入的研究打下基礎(chǔ)。材料和方法一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及動(dòng)物健康清潔級(jí)雄性成年Sprague-Dawley(SD)大鼠(16只),體重230～250g,由第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組和模型組,每組各8只。行為學(xué)測(cè)試前,適應(yīng)性和蔗糖水飼養(yǎng)5d,自由攝食飲水。二、藥物和設(shè)備注射用鹽酸嗎啡(青海制藥廠)大鼠靜脈自身給藥系統(tǒng)(寧波安來(lái))。三、實(shí)驗(yàn)方法1.甲基麻醉管理右側(cè)頸外靜脈置管術(shù)(16只全部手術(shù))大鼠經(jīng)8%水合氯醛(4mg/kg)腹腔麻醉,頸靜脈置管,經(jīng)皮下隧道穿出,給大鼠穿上馬甲用于連接給藥箱。術(shù)后大鼠單籠飼養(yǎng),每日給予10萬(wàn)U頭孢呋辛(0.75g×1)抗感染;管道注入肝素,保持通暢;給藥期間大鼠限食(15g/d),飲水不限。術(shù)后恢復(fù)7d。2.次有效注射第8d(d8)開(kāi)始自身給藥訓(xùn)練(3h/d),保持室內(nèi)安靜,暗光。采用固定模式為1的程序FR1(固定比率,fixedradio,FR=1),即大鼠觸碰一次有效觸鼻,給藥箱自動(dòng)給予一次藥物注射。對(duì)照組給予生理鹽水,模型組給予鹽酸嗎啡(1mg/ml);設(shè)定給藥程序,一次有效注射后20s為不應(yīng)期。在此程序下,進(jìn)行7d自身給藥訓(xùn)練(d8～d14)。主要觀察d11～d14,當(dāng)大鼠連續(xù)3d觸鼻率最高與最低差值小于均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差的1/4并且觸鼻數(shù)趨于穩(wěn)定后,可認(rèn)為FR1模式大鼠給身給藥訓(xùn)練成功。四、復(fù)燃后戒斷癥狀評(píng)分d15～d21為戒斷期,模型組給藥箱給予生理鹽水,自然戒斷。復(fù)燃期d22～d24,模型組給藥箱給予嗎啡溶液,誘導(dǎo)復(fù)燃。于d27觀察大鼠復(fù)燃后戒斷癥狀,用改良Gellert-Holtzman法進(jìn)行戒斷癥狀的評(píng)分。戒斷癥狀評(píng)分:①濕狗樣抖動(dòng)、跳躍、直立,直接計(jì)算次數(shù),每2次計(jì)1分,計(jì)算30min內(nèi)各項(xiàng)癥狀總得分;②呼吸急促、振齒、上瞼下垂、豎毛、異常姿勢(shì)、激惹、舔陰,每種癥狀記1分,每3min評(píng)1次,共評(píng)5次;③流淚、流涕、流涎、腹瀉,每種癥狀記5分,30min內(nèi)評(píng)1次。五、觀察體重和食物量分組前應(yīng)測(cè)量基礎(chǔ)體重,記錄d15和d27的體重和飲食量。六、大鼠一般情況測(cè)試復(fù)燃后第3d(d27)用常見(jiàn)的抑郁模型評(píng)價(jià)方法進(jìn)行評(píng)估1.曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)(open-fieldtest):曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)記錄大鼠水平運(yùn)動(dòng)總路程和垂直運(yùn)動(dòng)。每次測(cè)定3min,記錄大鼠水平活動(dòng),大鼠穿越1格為1分;以直立次數(shù)為垂直運(yùn)動(dòng)得分,每只大鼠進(jìn)行1次。大鼠在規(guī)定時(shí)間內(nèi)水平、垂直得分減少,說(shuō)明動(dòng)物表現(xiàn)出抑郁狀態(tài),興趣喪失和快感缺乏。2.1%蔗糖水偏愛(ài)測(cè)試:實(shí)驗(yàn)前禁水24h;每只大鼠給予1瓶1%蔗糖水和1瓶水,計(jì)算大鼠24h后2h內(nèi)飲用1%蔗糖水和水的量以及蔗糖水偏愛(ài)百分比[偏愛(ài)百分比=(糖水消耗/總液體消耗)×100%]。大鼠糖水消耗量與糖水偏愛(ài)百分比較對(duì)照組下降。說(shuō)明動(dòng)物對(duì)幸福事件反應(yīng)能力下降,快樂(lè)體驗(yàn)?zāi)芰θ狈Α?.取腦對(duì)比大腦系數(shù):實(shí)驗(yàn)d27稱重后隨即處死大鼠,迅速摘取大腦,計(jì)算大腦系數(shù)(大腦系數(shù)=[大腦濕重(g)/體重(g)]×100%)觀察大腦變化。七、統(tǒng)計(jì)處理數(shù)據(jù)均以xˉ±SDxˉ±SD表示,每一項(xiàng)行為學(xué)測(cè)試結(jié)果單獨(dú)用t檢驗(yàn),采用SPSS18軟件。P<0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)果一、自己的藥物模型的構(gòu)建大鼠自身給藥訓(xùn)練中,模型組觸鼻頻率與對(duì)照組相比顯著增加(P<0.05)并趨于穩(wěn)定,建模成功(表1)。二、模型組體重和體重增加量的比較兩組在分組前體重?zé)o明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。戒斷復(fù)燃期d15-d27,模型組體重下降明顯,而對(duì)照組體重增加明顯。模型組大腦系數(shù)降低明顯。飲食方面,模型組飲食量明顯下降,戒斷復(fù)燃后平均飲食為21g/d,而對(duì)照組平均飲食量為36g/d。三、兩組大鼠濕狗樣癥狀比較在復(fù)吸后戒斷第3d,測(cè)試30min內(nèi)模型組大鼠與對(duì)照組大鼠相比,出現(xiàn)濕狗樣抖動(dòng)、振齒、激惹、舔陰、毛發(fā)直立、跳躍、流涕等癥狀,戒斷癥狀明顯(P<0.05)(圖1)。四、組大鼠活動(dòng)情況復(fù)燃后戒斷第3d,相對(duì)于對(duì)照組,戒斷模型組水平運(yùn)動(dòng)明顯減少,垂直運(yùn)動(dòng)明顯減少(P<0.05),表明戒斷組大鼠活動(dòng)度降低,探究行為減少(圖2)。復(fù)燃后戒斷第3d,蔗糖水飲用百分比存在顯著差異(P<0.05)。模型組大鼠蔗糖水飲用量較少(圖3)。3.所有行為測(cè)試完成后，立即開(kāi)始大腦測(cè)試，并計(jì)算大腦系數(shù)表2藥物依賴模型及其在復(fù)吸行為中的應(yīng)用藥物依賴患者在撤除藥物時(shí),焦慮、抑郁和失眠是主要特征,尤其在戒斷后期,焦慮、抑郁等精神情緒逐漸占主導(dǎo)地位。藥物戒斷后的精神情緒癥狀是目前成癮藥物相關(guān)神經(jīng)心理缺陷研究的一個(gè)重要方面,也是導(dǎo)致復(fù)吸的重要原因之一。對(duì)于已完成藥物戒毒的藥物依賴患者,復(fù)吸率仍高達(dá)90%以上,其中一個(gè)重要原因是他們存在情緒情感障礙,即對(duì)毒品強(qiáng)烈的心理渴求難以抑制并且容易受生活中負(fù)性事件(包括社會(huì)歧視、就業(yè)困難、家庭厭棄、戀愛(ài)婚姻失敗等)的應(yīng)激影響產(chǎn)生焦慮抑郁情緒從而誘發(fā)復(fù)吸行為。藥物依賴模型的建立是研究藥物依賴戒斷后抑郁樣行為的前提,而自身給藥以及復(fù)吸模型的建立很好的解決了過(guò)去的動(dòng)物模型比較單一的問(wèn)題,雖然無(wú)法模擬人類社會(huì)環(huán)境、家庭環(huán)境多種因素的綜合影響,但是能夠很好的觀察大鼠自發(fā)性覓藥行為和復(fù)吸后的行為學(xué)特征,反應(yīng)了成癮藥物的激發(fā)作用,可以廣泛應(yīng)用于成癮后腦區(qū)功能以及情緒變化機(jī)制的研究。自身給藥模型對(duì)實(shí)驗(yàn)技術(shù)和系統(tǒng)準(zhǔn)確性有著較高的要求,由于小劑量嗎啡使成癮模型的建立更加穩(wěn)定,給藥系統(tǒng)要很精確地把小劑量藥物泵入實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi),所以在模型建立的過(guò)程中存在的問(wèn)題也很多,這樣就對(duì)大鼠的手術(shù)細(xì)節(jié)、術(shù)后維護(hù)以及給藥裝置的維護(hù)與設(shè)定提出了較高的要求。自身給藥復(fù)吸模型的建立,模擬人類藥物成癮后復(fù)吸行為并自然戒斷誘導(dǎo)內(nèi)源性核心癥狀-快感缺失。行為學(xué)評(píng)估顯示,復(fù)吸后戒斷期的藥物依賴大鼠出現(xiàn)體重飲食量下降、蔗糖