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課前自主預(yù)習(xí)案2微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用素能目標(biāo)★考向?qū)Ш交A(chǔ)梳理——系統(tǒng)化知識(shí)點(diǎn)一微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)1.培養(yǎng)基2.無(wú)菌技術(shù)3.微生物的純培養(yǎng)(1)概念:由繁殖所獲得的微生物群體是純培養(yǎng)物,獲得的過(guò)程就是純培養(yǎng)。(2)過(guò)程:包括、滅菌、接種、分離和培養(yǎng)等步驟。(3)常用方法:法和法。(4)實(shí)例——酵母菌的純培養(yǎng)知識(shí)點(diǎn)二微生物的選擇培養(yǎng)和計(jì)數(shù)一、微生物的選擇培養(yǎng)1.實(shí)驗(yàn)室中微生物篩選的原理人為提供有利于生長(zhǎng)的條件(包括營(yíng)養(yǎng)、溫度、pH等),同時(shí)其他微生物的生長(zhǎng)。2.稀釋涂布平板法將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋后,將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基表面,進(jìn)行培養(yǎng)。(1)系列稀釋操作(2)涂布平板操作序號(hào)圖示操作①取0.1mL菌液,滴加到②將涂布器浸在盛有的燒杯中③將涂布器放在火焰上灼燒,待酒精燃盡、涂布器冷卻后,再進(jìn)行涂布④用涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面。涂布時(shí)可轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿,使涂布(3)培養(yǎng):待涂布的菌液被培養(yǎng)基吸收后,將平板,放入30~37℃的中培養(yǎng)1~2d。二、微生物的數(shù)量測(cè)定1.稀釋涂布平板法(1)計(jì)數(shù)原理:當(dāng)樣品的時(shí),培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè),來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的,就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。(2)計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn):為了保證結(jié)果準(zhǔn)確,一般選擇菌落數(shù)為的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。(3)計(jì)數(shù)方法:通常選用一定稀釋范圍的樣品液進(jìn)行培養(yǎng),以保證獲得菌落數(shù)為、適于計(jì)數(shù)的平板。在下,應(yīng)至少對(duì)3個(gè)平板進(jìn)行重復(fù)計(jì)數(shù),然后求出。(4)當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí),平板上觀(guān)察到的只是一個(gè)菌落,統(tǒng)計(jì)結(jié)果一般用來(lái)表示。2.顯微鏡直接計(jì)數(shù)法(1)計(jì)數(shù)原理:利用特定的或,在顯微鏡下觀(guān)察、計(jì)數(shù),然后再計(jì)算一定體積的樣品中微生物的數(shù)量。(2)優(yōu)點(diǎn):是一種常用的、的測(cè)定微生物數(shù)量的方法。(3)缺點(diǎn):統(tǒng)計(jì)的結(jié)果一般是死菌數(shù)和活菌數(shù)的總和。三、土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)基能過(guò)關(guān)——問(wèn)題化一、判一判(判斷正誤并找到課本原話(huà))(一)微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)1.微生物在瓊脂固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部生長(zhǎng),可以形成肉眼可見(jiàn)的菌落。(選擇性必修3P9正文)()2.在培養(yǎng)霉菌時(shí),需要將培養(yǎng)基調(diào)至中性或弱堿性。(選擇性必修3P10正文)()3.獲得純凈的微生物培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止雜菌污染。(選擇性必修3P10正文)()4.為了避免周?chē)h(huán)境中微生物的污染,接種過(guò)程中許多操作都應(yīng)在超凈工作臺(tái)并在酒精燈火焰附近進(jìn)行。(選擇性必修3P10正文)()5.由單一個(gè)體繁殖所獲得的微生物群體稱(chēng)為純培養(yǎng)物。獲得純培養(yǎng)物的過(guò)程就是純培養(yǎng)。(選擇性必修3P11正文)()6.倒平板過(guò)程中,將培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿并蓋上皿蓋后,立即將培養(yǎng)皿倒置。(選擇性必修3P12探究·實(shí)踐)()7.培養(yǎng)酵母菌時(shí),可將接種后的平板和一個(gè)未接種的平板倒置,放入適宜溫度的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24~48h。(選擇性必修3P12探究·實(shí)踐)()(二)微生物的選擇培養(yǎng)和計(jì)數(shù)1.菌液的稀釋度足夠高時(shí),培養(yǎng)基表面會(huì)獲得單菌落。(選擇性必修3P18正文)()2.適于平板計(jì)數(shù)的菌落數(shù)范圍為40~300。(選擇性必修3P18正文)()3.稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)時(shí),統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目少。(選擇性必修3P18正文)()4.稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)時(shí),平板上的一個(gè)菌落就是一個(gè)細(xì)菌。(選擇性必修3P20練習(xí)與應(yīng)用2)()二、連一連1.無(wú)菌技術(shù)的主要方法及適用對(duì)象2.以下幾種選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基及其應(yīng)用三、議一議【教材易漏拾遺】1.[選擇性必修3P10正文拓展]消毒和滅菌都能殺死所有的微生物嗎?2.[選擇性必修3P12“探究·實(shí)踐”]延伸思考:(1)無(wú)菌技術(shù)除了用來(lái)防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來(lái)微生物污染外,還有什么作用?(2)為什么需要使錐形瓶的瓶口通過(guò)火焰?平板冷凝后,為什么要將平板倒置?(3)在倒平板的過(guò)程中,如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位,這個(gè)平板還能用來(lái)培養(yǎng)微生物嗎?為什么?(4)平板劃線(xiàn)法在做第二次以及其后的劃線(xiàn)操作時(shí),為什么總是從上一次劃線(xiàn)的末端開(kāi)始劃線(xiàn)?目的是什么?3.[選擇性必修3P17圖1-7發(fā)掘](1)涂布平板的所有操作為什么都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行?(2)如圖是采用純化微生物培養(yǎng)的兩種接種方法接種后培養(yǎng)的效果圖,請(qǐng)分析:①獲得圖A效果和圖B效果的接種方法分別是什么?②某同學(xué)在純化土壤中的細(xì)菌時(shí),發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上的菌落連成了一片,最可能的原因是什么?應(yīng)當(dāng)怎樣操作才可避免此種現(xiàn)象?4.[選擇性必修3P18探究·實(shí)踐拓展](1)分離分解尿素的細(xì)菌的選擇培養(yǎng)基配方中,為微生物的生長(zhǎng)提供碳源和氮源的分別是什么物質(zhì)?(2)為什么只有能分解尿素的微生物才能在該培養(yǎng)基上生長(zhǎng)?5.[選擇性必修3P18正文發(fā)掘](1)為什么測(cè)定活菌的數(shù)量不能用平板劃線(xiàn)法?(2)利用稀釋涂布平板法純化分解尿素的細(xì)菌時(shí),經(jīng)培養(yǎng)后發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上出現(xiàn)多種菌落,可能的原因有哪些?課前自主預(yù)習(xí)案2基礎(chǔ)梳理——系統(tǒng)化【知識(shí)點(diǎn)一】1.氮源無(wú)機(jī)鹽液體培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基pH氧氣2.化學(xué)藥劑消毒法干熱滅菌濕熱滅菌外來(lái)雜菌3.(1)單一個(gè)體純培養(yǎng)物(2)配制培養(yǎng)基(3)平板劃線(xiàn)稀釋涂布平板(4)高壓蒸汽滅菌平板劃線(xiàn)倒置未接種【知識(shí)點(diǎn)二】一、1.目的菌抑制或阻止2.(2)培養(yǎng)基表面酒精均勻(3)倒置恒溫培養(yǎng)箱二、1.(1)稀釋度足夠高單菌落菌落數(shù)(2)30~300(3)30~300同一稀釋度平均值(4)菌落數(shù)2.(1)細(xì)菌計(jì)數(shù)板血細(xì)胞計(jì)數(shù)板(2)快速直觀(guān)三、脲酶尿素基能過(guò)關(guān)——問(wèn)題化一、判一判(一)微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)1.√2.×3.√4.√5.√6.×7.√(二)微生物的選擇培養(yǎng)和計(jì)數(shù)1.√2.×3.√4.×二、連一連1.2.三、議一議1.提示:滅菌可殺死處理材料中的全部微生物(包括芽孢和孢子),而消毒僅殺死部分微生物(一般不包括芽孢和孢子)。2.提示:(1)還能有效避免操作者自身被微生物感染。(2)通過(guò)灼燒滅菌,可以防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。平板冷凝后,皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠,凝固后的培養(yǎng)基表面濕度也比較高,將平板倒置,既可以防止培養(yǎng)基表面的水分過(guò)快地?fù)]發(fā),又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基,造成污染。(3)不能。因?yàn)榭諝庵械奈⑸锟赡茉诿笊w和皿底之間的培養(yǎng)基上滋生,可能會(huì)造成污染。(4)劃線(xiàn)后,線(xiàn)條末端細(xì)菌的數(shù)目比線(xiàn)條起始處要少,每次從上一次劃線(xiàn)的末端開(kāi)始,能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線(xiàn)次數(shù)的增加而逐步減少,最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)的菌落。這樣做的目的是將聚集的菌種逐步稀釋分散以便獲得單個(gè)菌落。3.提示:(1)在酒精燈火焰旁操作可以保證無(wú)菌,防止雜菌污染。(2)①獲得圖A效果的接種方法為稀釋涂布平板法,獲得圖B效果的接種方法為平板劃線(xiàn)法。②最可能的原因是菌液濃度過(guò)高或劃線(xiàn)時(shí)在劃下一區(qū)域前未將接種環(huán)灼燒滅菌;采取的措施是增大稀釋倍數(shù)或每次劃新區(qū)域前先將接種環(huán)灼燒滅菌。4.提示:(1)碳源是葡萄糖,氮源是尿素。(2)分解尿素的微生物能合成脲酶,而脲酶可將尿素分解成氨,從而為微生物提供氮源。5.提示:(1)由于在所劃的線(xiàn)中,一般只有最后一次劃線(xiàn)的末端才會(huì)形
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