間接免疫熒光在免疫組化中的應用

免疫熒光技術(shù)在免疫組化

中的應用王曉旭11720710目錄免疫組化的基本概念免疫組化的分類免疫熒光法免疫熒光的分類常見熒光素及其特性熒光抗體的制備免疫組化的基本操作步驟免疫組化的基本概念免疫組化，是應用免疫學基本原理，即抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過化學反應使標記抗體的顯色劑顯色來確定組織細胞內(nèi)抗原，對其進行定位、定性及定量的研究。免疫組化的分類免疫組織化學技術(shù)按照標記物的種類可分：免疫熒光法免疫酶法免疫鐵蛋白法免疫金法放射免疫自顯影法免疫組化的分類免疫組化實驗常用的組織標本：組織標本石蠟切片冰凍切片組織印片細胞標本細胞爬片細胞涂片免疫熒光方法

是最早建立的免疫組織化學技術(shù)。

它利用抗原抗體特異性結(jié)合的原理，先將已知抗體標上熒光素，以此作為探針檢查細胞或組織內(nèi)的相應抗原，在熒光顯微鏡下觀察。

當抗原抗體復合物中的熒光素受激發(fā)光的照射后即會發(fā)出一定波長的熒光，從而可確定組織中某種抗原的定位，進而還可進行定量分析。免疫熒光方法

免疫熒光技術(shù)特異性強、靈敏度高、快速簡便，所以在臨床病理診斷、檢驗中應用較廣。免疫熒光方法的分類免疫熒光方法的分類免疫熒光方法的分類常見熒光素及其特性FITC：黃色結(jié)晶粉末狀，吸收光490~495nm，發(fā)射光520~530nm，明亮的黃綠色熒光RB200：橘紅色粉末，吸收光為570nm，發(fā)射光為595~600nm，橘紅色熒光TRITC：紫紅色粉末，吸收光為550nm，發(fā)射光620nm，橙紅色熒光PE：吸收光490~560nm，發(fā)射光595nm，紅色熒光。其他：鑭系（Eu、Tb），酶作用后產(chǎn)生熒光物質(zhì)常見熒光素及其特性熒光抗體的制備（一）.熒光素與抗體的結(jié)合（標記）透析法：1、將含10mg/ml的Ig溶液10ml裝入透析袋2、將透析袋放入100ml含有0.1㎎/mlFITC的碳酸鹽緩沖液（pH=9.4）燒杯中3、4℃磁力攪拌24小時4、取出透析袋，進行純化、鑒定熒光抗體的制備攪拌法1、將含40㎎/mlBP溶液5ml裝入反應瓶中2、加入pH=9.0、0.5mol/L碳酸鹽緩沖液4ml3、25℃磁力攪拌下，逐滴加入1ml含2㎎的FITC溶液4、25℃下攪拌1h，4℃下繼續(xù)攪拌4h，然后進行純化鑒定熒光抗體的制備（二）熒光抗體的純化：1、除去未結(jié)合熒光素將標記后的抗體溶液裝于透析袋，于流動的自來水中透析約10min，然后移入pH=7.4的磷酸鹽緩沖液中，在4℃才透析，直至透析外液在紫外燈下不呈現(xiàn)熒光為止熒光抗體的制備2、除去標記不適當?shù)目贵w采用DEAE纖維離子柱。將DEAE纖維素用pH=7.6的0.01mol/L磷酸鹽緩沖液平衡裝柱，加入標記抗體溶液，