血型鑒定的操作流程

ABO血型鑒定正定型原理：用已知特異性抗體（原則血清）檢查紅細(xì)胞上的未知抗原。試管法的操作過(guò)程取2支干凈小試管，編號(hào)分別為抗A和抗B 分別加入抗A和抗B原則血清各1滴取1支干凈試管，用標(biāo)簽紙注明病人姓名，科室、床號(hào).配成5%的紅細(xì)胞懸液。將配好的紅細(xì)胞懸液分別加入抗A和抗B的兩個(gè)試管中各1滴。混勻，將試管以3400轉(zhuǎn)/分鐘離心15秒。將試管從離心機(jī)中取出，再以推拉旋轉(zhuǎn)的對(duì)的手法輕輕搖動(dòng)試管，使細(xì)胞懸浮觀察有無(wú)凝集現(xiàn)象。登記成果、簽名。ABO血型鑒定正定型原理：用已知血型的原則紅細(xì)胞，檢查血清中的未知抗體。試管法的操作過(guò)程：取3支干凈的小試管，分別標(biāo)明A細(xì)胞，B細(xì)胞、O細(xì)胞；分別加入受檢者的血清各2滴；分別在3個(gè)試管中加入反定細(xì)胞A、B、O（既5%的A、B、O型原則紅細(xì)胞鹽水懸液）各1滴；混勻，將試管以3400轉(zhuǎn)/分鐘離心15秒；將試管從離心機(jī)中取出，在光照下觀查與否有溶血、脂血等，再以推拉旋轉(zhuǎn)的對(duì)的手法輕輕搖動(dòng)試管，使細(xì)胞懸浮觀察有無(wú)凝集現(xiàn)象并統(tǒng)計(jì)。ABO血型正反定型成果判斷正向定型（原則血型+初檢查紅細(xì)胞）抗A抗B反向定型（原則紅細(xì)胞+被檢查血清）A型紅細(xì)胞B型紅細(xì)胞O型紅細(xì)胞成果斷讀+——+—A型—++——B型++———AB型——++—O型Rh（D）血型鑒定試管法（鹽水法）操作過(guò)程：取干凈小試管3支，分別標(biāo)明陰、陽(yáng)對(duì)照管和實(shí)驗(yàn)管；在3支試管中各加入RhD定型血清1滴；在實(shí)驗(yàn)管中加入受檢者5%紅細(xì)胞鹽水懸液1滴，在陰、陽(yáng)對(duì)照管中各加入Rh陰性和陽(yáng)性5%紅細(xì)胞鹽水懸液1滴；混勻，以3400轉(zhuǎn)/分秒離心15秒；觀查成果:實(shí)驗(yàn)管凝集，即表達(dá)受檢紅細(xì)胞上有對(duì)應(yīng)抗原；實(shí)驗(yàn)管不凝集，即表達(dá)受檢紅細(xì)胞上沒(méi)有對(duì)應(yīng)抗原。不規(guī)則抗體篩檢實(shí)驗(yàn)?zāi)郯贩ú僮鬟^(guò)程：取3支干凈的小試管，分別標(biāo)上“Ⅰ”“Ⅱ”“Ⅲ”；分別在3支試管中加入兩滴受檢者血清2滴；分別在3支試管中加入3~5%的篩選Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ號(hào)細(xì)胞試劑各1滴，混勻以3400轉(zhuǎn)/分鐘，離心15S，看與否凝集；分別在3支試管中心0.65ml的Baso低離子溶液，放置室溫1分鐘；再分別在3支試管中心加入凝聚胺溶液兩滴搖勻，以3400轉(zhuǎn)/分鐘，離心15秒，倒去上清液，不要瀝干，讓管底留0.1ml液體；輕輕搖動(dòng)試管，且測(cè)紅細(xì)胞有無(wú)凝集，（必須凝集，不凝集要重新做實(shí)驗(yàn)）；分別在3支試管中加入2滴“懸浮液”輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)試管混合并同時(shí)觀察成果，30S肉眼看與否凝聚。1分內(nèi)、涂片，顯微鏡下看與否凝集。如果30S內(nèi)肉眼看凝集散開(kāi)，1分內(nèi)、涂片，顯微鏡下無(wú)凝集，抗體篩檢為陰性；如果凝集不散開(kāi)，顯微鏡1分內(nèi)可看到凝集，抗體篩檢為陽(yáng)性。產(chǎn)前篩查實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程：先將妻子和丈夫的血液標(biāo)本，配成5%的紅細(xì)胞懸液，做ABO血型鑒定正定型，RhD血型鑒定；把血標(biāo)本放入37°水浴箱中，水浴至血清能夠離出，做ABO血液鑒定反定型；當(dāng)妻子血型為O型，丈夫血型為A或B或AB型時(shí)做效價(jià)；如果丈夫?yàn)锳型或B型時(shí)，用丈夫的紅細(xì)胞作為抗原；如果丈夫?yàn)锳B型時(shí)，用買的A型和B型紅細(xì)胞做為抗原。效價(jià)的操作過(guò)程：用已配的丈夫的紅細(xì)胞懸液，洗3次細(xì)胞，制成2%濃度的紅細(xì)胞懸液。取1支干凈小試管加入妻子的血清2滴，在加入2滴2-Me試劑，快速用棉球堵住試管口，放37°C水浴箱中水浴2個(gè)小時(shí)。取10支干凈小試管分別編號(hào)1~10，各放入2滴生理鹽水。在1號(hào)試管中加入水浴2h的被2-Me破壞的血清2滴。從1號(hào)試管到10號(hào)試管，逐加2滴倍比稀釋（均勻的用吸管在試管內(nèi)吸放3~4下）最后兩滴棄去。10支試管各加2滴2%的丈夫紅細(xì)胞懸液，混勻，放入37°C水浴箱30分鐘、離心試管，細(xì)胞扣朝向自己，以推拉旋轉(zhuǎn)的對(duì)的手法，輕搖試管，看哪幾管凝集。從沒(méi)有凝集的那管開(kāi)始到10號(hào)管洗3遍，要把上清液甩干。各加1滴“抗人球試劑”離心，看第幾管凝集，以“士”凝集的那1管為效價(jià)成果。第一管1:4第二管1:8第三管1:16第四管1:32第五管1:64第六管1:128第七管1：256第八管1:512第九管1:1024第十管1:2048新生兒溶血新生兒溶血?。ê?jiǎn)稱HDN）是指母嬰血型不合，胎兒和新生兒的紅細(xì)胞被母親的IgG血型抗體包被，并在嬰兒的網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)內(nèi)受到破壞的免疫性溶血性疾病。一、發(fā)病機(jī)制本病的病原是母嬰血型不合，胎兒的血型基因二分之一來(lái)自母親，另二分之一來(lái)自父親，來(lái)自父親的基因敲好是母親所缺少的，胎兒在紅細(xì)胞就有可能刺激母親產(chǎn)生抗體，這種抗體的性質(zhì)為免疫性抗體，并且能夠通過(guò)胎盤，一旦這種抗體通過(guò)胎盤進(jìn)入血液循環(huán)，就可能與胎兒紅細(xì)胞向結(jié)合并破壞紅細(xì)胞而發(fā)生溶血現(xiàn)象，嚴(yán)重者可能引發(fā)胎兒貧血。水腫。流產(chǎn)、死胎、早產(chǎn)及HDN。二、新生兒溶血病血型血清學(xué)檢查（一）標(biāo)本的留取采集新生兒血液4~5ml，分為大概相等的兩份，一份不抗凝，另一份用 ACD保存液或EDTA抗凝。必要時(shí)采集母親的血液4~5ml，其中分出0.5ml加抗凝劑。必要時(shí)采集父親的血液0.5ml加抗凝劑保有備用。（二）母嬰標(biāo)本的ABO血型檢測(cè)取母嬰的洗滌紅細(xì)胞按常規(guī)辦法測(cè)定ABO血型，如母親是O型，新生兒是A型或B型，則可能是母嬰ABO血型不合引發(fā)的新生兒溶血病。（三）新生兒溶血病檢查的三項(xiàng)實(shí)驗(yàn)1、直接抗球蛋白實(shí)驗(yàn)用以擬定嬰兒紅細(xì)胞與否被IgG抗體包被。ABO新生兒溶血病時(shí)直接抗球蛋白實(shí)驗(yàn)反映經(jīng)常較弱或陽(yáng)性需要用顯微鏡觀察成果。在ABO新生兒溶血病檢查中，直接抗球蛋白實(shí)驗(yàn)的成果只起參考作用。改良直接人球蛋白實(shí)驗(yàn)辦法（1）將患兒紅lell用鹽水洗滌3~4次，配成2%紅lell鹽水懸液。（2）取小試管2只，各加患兒紅lell懸液1滴，然后1管加入 IgG（或廣譜）最適稀釋度抗球蛋白血清1滴，另1管加鹽水1滴混合后即以1000轉(zhuǎn)/分離心1分鐘或以3400轉(zhuǎn)/分鐘離心15s.（3）輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)試管，將混懸液倒在玻璃片上，在顯微鏡下觀察成果，凡在3~4個(gè)細(xì)胞的凝集，均勻分布在游離紅lell之間為陽(yáng)性，無(wú)凝者為陰性。2、游離 IgG抗體測(cè)定用間接抗球蛋白實(shí)驗(yàn)或其它辦法檢測(cè)嬰兒血清中與否有游離的IgG血型抗體；辦法：（1）取小試管3只，每管加患兒血清2滴。(2)分別加入洗滌過(guò)三次配備好的5%，A、B、O型紅細(xì)胞，鹽水懸液1滴，37°C致敏60分鐘，取出觀查若已發(fā)生凝集，證明存在對(duì)應(yīng)的抗體，則不必繼續(xù)往下做。（3）若不凝集，用鹽水洗3次后加入抗IgG（或廣譜）最適稀釋度抗體球蛋白血清1滴，1000轉(zhuǎn)/分離心1分鐘或3400轉(zhuǎn)/15秒，肉眼觀察（或在顯微鏡下觀察）成果。3放散實(shí)驗(yàn)ABO血型不合的新生兒溶血病時(shí)用熱放散法好，RH系統(tǒng)及其系統(tǒng)的用乙醇放散法為好，放散夜用抗人球蛋白法或其它檢測(cè)IgG抗體的辦法檢測(cè)?；純杭t細(xì)胞抗體釋放實(shí)驗(yàn)（熱放散法）?；純杭t細(xì)胞用鹽水洗滌3次，取壓積紅細(xì)胞1ml左右，加等量或半量鹽水，置試管中；將試管放在56°C水浴箱中不停振搖10分鐘，取出后置于預(yù)先準(zhǔn)備盛有56°