精子處理方法及前向運動精子計數(shù)對aid妊娠結局的影響

精子處理方法及前向運動精子計數(shù)對aid妊娠結局的影響

人類輔助生殖技術的發(fā)展，尤其是卵泥內單胞菌的開發(fā)，導致了許多患有少液、弱液和畸形精子的孕婦。但無法通過活檢或穿刺獲得精子的無精子癥以及部分嚴重少、弱、畸形精子癥或有遺傳性疾病不宜生育等患者則只能靠精子庫的冷凍供精來解決。因此,供精人工授精的應用比較普遍。通過長時間的實踐,我們知道,與新鮮精子相比,冷凍精子在復蘇后,活率和活力要有不同程度的下降,那么如何提高前向運動精子的回收率以及復蘇后前向運動精子的總數(shù)與妊娠率之間的關系需要總結,本文回顧了自2005年7月至11月在本中心開展的76周期供精人工授精的資料,對精子處理方法及前向運動精子總數(shù)與妊娠率的相關關系作以總結。數(shù)據(jù)和方法1.研究主題(1)方不符合預測模型的患者2005年7月至2005年11月在我生殖中心就診的不孕患者57例,其中男方無精子癥50例,重度少弱精子癥5例,遺傳異常等不能或不宜生育者2例,女方需滿足:身體健康,輸卵管通液表明至少有一側同時輸卵管通暢,B超監(jiān)測排卵功能正常。所有患者均簽署了知情同意書。(2)根據(jù)上述情況，76名患者的精神外科和精髓治療隨機分為以下幾類①上游組:采用上游法處理精液共30周期;②梯度密度離心組(離心組):采用梯度密度離心法共46個周期。2.實驗室中的精細處理方法(1)實驗室液體處理培養(yǎng)水體人工液每份液化精液加入等量的洗滌液,混勻后2000r/min,離心10min,棄上清液,貼壁輕輕加進0.5ml洗滌液,置37℃5%CO2培養(yǎng)箱上游30~60min。取出后用吸管吸取上部渾濁懸液待用。upperla內部沉淀液的制備采用歐文公司的Isolate梯度離心洗滌液,在圓錐離心管先加入90%的lowerlayer1ml,然后在上方小心加入upperlayer1ml,最上層加入1ml精液,經2000r/min,離心20min,去掉上面幾層液體,用1mlHepes混勻沉淀物,離心10min,去上清液,加0.5mlhepes打勻沉淀物待用。(2)宮腔內的人工產品常規(guī)外陰消毒后,采用澳大利亞COOK人工授精管吸取處理好的精液0.3~0.5ml進行宮腔內注射,術后囑患者平臥1h。3.統(tǒng)計分析：采用t檢驗法進行測量數(shù)據(jù)和離散度分析結果1.各組20-30106、30106的臨床妊娠率分別為11.8%、25.0%和28.6%，p.0.052.冷精處理方法后的精子參數(shù)比較復蘇后前向運動精子總數(shù)與妊娠率的關系1.供精人工授精適用于部分不可恢復性或無法治愈的男子不育癥,由于近年來對精子冷凍機理的認識逐漸提高,精子冷凍液的愈來完善,冷凍精子的復蘇率得到了很大的提高,但冷凍精子的臨床效果仍存在一定問題,這主要與冷凍精子的存活率下降,生存時間相對縮短,和凍精的授精能力的下降有關,導致受孕率較低,因此,在精子冷凍和復蘇后處理等方面仍需總結以提高供精人工授精的妊娠率。2.衛(wèi)生部對冷凍精子復蘇后的要求為A+B活率>40%,宮腔內注射前向運動精子總數(shù)超過一千萬。在實際工作中,我們發(fā)現(xiàn)冷凍精子復蘇后的前向運動精子的總數(shù)差別還是較大的。復蘇后前向運動精子總數(shù)與臨床妊娠之間的關系尚未明確。本文將復蘇后前向運動精子總數(shù)分為三組(≤20×106,20×106~30×106,≥30×106),探討不同前向運動精子總數(shù)對臨床妊娠率的影響。結果發(fā)現(xiàn)當前向運動精子總數(shù)≤20×106時,妊娠率明顯降低,與≥30×106有顯著差異,說明復蘇后前向運動精子總數(shù)不足20×106時雖然仍有使卵子受精的能力,但妊娠率下降。提示復蘇后前向運動精子總數(shù)也應作為供精人工授精妊娠率考慮的重要因素之一。3.由于冷凍精子需處理后方可用于宮腔授精,因此,尋找到一種在精子處理過程中影響小,且回收率較多的精子處理方法非常重要。目前,主要的處理方法包括上游法和梯度離心法。上游法操作簡單,但對復蘇精子的游動能力要求較高,而冷凍精源量僅1ml,且冷凍過程及冷凍保護劑也或多或少地影響了精子的活率,因而,上游后的前向精子總數(shù)較少。而梯度離心法利用精漿和精子密度的差異,可以有效地去除精漿成分、冷凍液和死亡精子,使回收的正常形態(tài)精子和核成熟精子比例增高,精子體外存活時間延長,與上游相比,活動精子的回收率提高。經表1可以看出,經過梯度離心法處理后,得到的精子數(shù)與存活率得到了顯著提高,與上游法相比有統(tǒng)計學差異,與文獻報導一致最近還有學者研究發(fā)現(xiàn),采用梯