精子處理方法及前向運(yùn)動(dòng)精子計(jì)數(shù)對(duì)aid妊娠結(jié)局的影響

精子處理方法及前向運(yùn)動(dòng)精子計(jì)數(shù)對(duì)aid妊娠結(jié)局的影響

人類(lèi)輔助生殖技術(shù)的發(fā)展，尤其是卵泥內(nèi)單胞菌的開(kāi)發(fā)，導(dǎo)致了許多患有少液、弱液和畸形精子的孕婦。但無(wú)法通過(guò)活檢或穿刺獲得精子的無(wú)精子癥以及部分嚴(yán)重少、弱、畸形精子癥或有遺傳性疾病不宜生育等患者則只能靠精子庫(kù)的冷凍供精來(lái)解決。因此,供精人工授精的應(yīng)用比較普遍。通過(guò)長(zhǎng)時(shí)間的實(shí)踐,我們知道,與新鮮精子相比,冷凍精子在復(fù)蘇后,活率和活力要有不同程度的下降,那么如何提高前向運(yùn)動(dòng)精子的回收率以及復(fù)蘇后前向運(yùn)動(dòng)精子的總數(shù)與妊娠率之間的關(guān)系需要總結(jié),本文回顧了自2005年7月至11月在本中心開(kāi)展的76周期供精人工授精的資料,對(duì)精子處理方法及前向運(yùn)動(dòng)精子總數(shù)與妊娠率的相關(guān)關(guān)系作以總結(jié)。數(shù)據(jù)和方法1.研究主題(1)方不符合預(yù)測(cè)模型的患者2005年7月至2005年11月在我生殖中心就診的不孕患者57例,其中男方無(wú)精子癥50例,重度少弱精子癥5例,遺傳異常等不能或不宜生育者2例,女方需滿足:身體健康,輸卵管通液表明至少有一側(cè)同時(shí)輸卵管通暢,B超監(jiān)測(cè)排卵功能正常。所有患者均簽署了知情同意書(shū)。(2)根據(jù)上述情況，76名患者的精神外科和精髓治療隨機(jī)分為以下幾類(lèi)①上游組:采用上游法處理精液共30周期;②梯度密度離心組(離心組):采用梯度密度離心法共46個(gè)周期。2.實(shí)驗(yàn)室中的精細(xì)處理方法(1)實(shí)驗(yàn)室液體處理培養(yǎng)水體人工液每份液化精液加入等量的洗滌液,混勻后2000r/min,離心10min,棄上清液,貼壁輕輕加進(jìn)0.5ml洗滌液,置37℃5%CO2培養(yǎng)箱上游30~60min。取出后用吸管吸取上部渾濁懸液待用。upperla內(nèi)部沉淀液的制備采用歐文公司的Isolate梯度離心洗滌液,在圓錐離心管先加入90%的lowerlayer1ml,然后在上方小心加入upperlayer1ml,最上層加入1ml精液,經(jīng)2000r/min,離心20min,去掉上面幾層液體,用1mlHepes混勻沉淀物,離心10min,去上清液,加0.5mlhepes打勻沉淀物待用。(2)宮腔內(nèi)的人工產(chǎn)品常規(guī)外陰消毒后,采用澳大利亞COOK人工授精管吸取處理好的精液0.3~0.5ml進(jìn)行宮腔內(nèi)注射,術(shù)后囑患者平臥1h。3.統(tǒng)計(jì)分析：采用t檢驗(yàn)法進(jìn)行測(cè)量數(shù)據(jù)和離散度分析結(jié)果1.各組20-30106、30106的臨床妊娠率分別為11.8%、25.0%和28.6%，p.0.052.冷精處理方法后的精子參數(shù)比較復(fù)蘇后前向運(yùn)動(dòng)精子總數(shù)與妊娠率的關(guān)系1.供精人工授精適用于部分不可恢復(fù)性或無(wú)法治愈的男子不育癥,由于近年來(lái)對(duì)精子冷凍機(jī)理的認(rèn)識(shí)逐漸提高,精子冷凍液的愈來(lái)完善,冷凍精子的復(fù)蘇率得到了很大的提高,但冷凍精子的臨床效果仍存在一定問(wèn)題,這主要與冷凍精子的存活率下降,生存時(shí)間相對(duì)縮短,和凍精的授精能力的下降有關(guān),導(dǎo)致受孕率較低,因此,在精子冷凍和復(fù)蘇后處理等方面仍需總結(jié)以提高供精人工授精的妊娠率。2.衛(wèi)生部對(duì)冷凍精子復(fù)蘇后的要求為A+B活率>40%,宮腔內(nèi)注射前向運(yùn)動(dòng)精子總數(shù)超過(guò)一千萬(wàn)。在實(shí)際工作中,我們發(fā)現(xiàn)冷凍精子復(fù)蘇后的前向運(yùn)動(dòng)精子的總數(shù)差別還是較大的。復(fù)蘇后前向運(yùn)動(dòng)精子總數(shù)與臨床妊娠之間的關(guān)系尚未明確。本文將復(fù)蘇后前向運(yùn)動(dòng)精子總數(shù)分為三組(≤20×106,20×106~30×106,≥30×106),探討不同前向運(yùn)動(dòng)精子總數(shù)對(duì)臨床妊娠率的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)當(dāng)前向運(yùn)動(dòng)精子總數(shù)≤20×106時(shí),妊娠率明顯降低,與≥30×106有顯著差異,說(shuō)明復(fù)蘇后前向運(yùn)動(dòng)精子總數(shù)不足20×106時(shí)雖然仍有使卵子受精的能力,但妊娠率下降。提示復(fù)蘇后前向運(yùn)動(dòng)精子總數(shù)也應(yīng)作為供精人工授精妊娠率考慮的重要因素之一。3.由于冷凍精子需處理后方可用于宮腔授精,因此,尋找到一種在精子處理過(guò)程中影響小,且回收率較多的精子處理方法非常重要。目前,主要的處理方法包括上游法和梯度離心法。上游法操作簡(jiǎn)單,但對(duì)復(fù)蘇精子的游動(dòng)能力要求較高,而冷凍精源量?jī)H1ml,且冷凍過(guò)程及冷凍保護(hù)劑也或多或少地影響了精子的活率,因而,上游后的前向精子總數(shù)較少。而梯度離心法利用精漿和精子密度的差異,可以有效地去除精漿成分、冷凍液和死亡精子,使回收的正常形態(tài)精子和核成熟精子比例增高,精子體外存活時(shí)間延長(zhǎng),與上游相比,活動(dòng)精子的回收率提高。經(jīng)表1可以看出,經(jīng)過(guò)梯度離心法處理后,得到的精子數(shù)與存活率得到了顯著提高,與上游法相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,與文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)一致最近還有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn),采用梯