王老吉奶茶對應(yīng)激小鼠糖代謝機(jī)能低下及體內(nèi)過氧化狀態(tài)的影響

王老吉奶茶對應(yīng)激小鼠糖代謝機(jī)能低下及體內(nèi)過氧化狀態(tài)的影響

1材料和方法1.1測定條件及試劑王老吉綠茶提取物（wlj）（國藥標(biāo)準(zhǔn)：ws3-b347982003）由王老吉藥業(yè)有限公司提供，生產(chǎn)批號：0605125；人參莖葉總劑量（rzg）由撫順新泰人參飲料有限公司提供。丙酮酸試劑盒(CatNo:A081),肝糖原試劑盒,及丙二醛試劑盒(malondialdehyde,MDA)均購自南京建成生物工程研究所;6-hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchroman-2-carboxylicacid(Trolox,為維生素E的水溶性衍生物),2,2″-azobis(2-amidinopropane)dihydrochloride(AAPH)及熒光素鈉(sodiumfluorescein)均購自WakoPureChemicalIndustries,Ltd.(Osaka,Japan);葡萄糖(H41023719)為天津藥業(yè)產(chǎn)品。1.2熒光酶標(biāo)儀測定羅康全活力型血糖儀(GN03384832)(Roche,Germany),MK3型酶標(biāo)儀(Labsystem,Finland),GENios熒光酶標(biāo)儀(Tecan,Switzerland)。1.3實(shí)驗(yàn)分組7周齡♀性BALB/c小鼠,購自南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心,許可證號SCXK(粵)2003-0002。飼養(yǎng)溫度(23±2)℃,照明時間12h/d(7:00-19:00),小鼠飼養(yǎng)一周后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)將小鼠隨機(jī)分成正常對照組、拘束對照組、125mg/kg人參皂苷陽性對照組、125及500mg/kg王老吉涼茶浸膏給藥組,每組7只。陽性對照組及王老吉涼茶組以0.1mL/10g灌胃給藥,正常對照組和拘束負(fù)荷模型組均灌胃等量空白水,每日1次連續(xù)給藥5d,在末次灌胃30min后進(jìn)行拘束應(yīng)激實(shí)驗(yàn),小鼠拘束裝置參照文獻(xiàn)制作,為通風(fēng)良好的50mL尖底聚丙烯塑料離心管,給予一次性拘束20h(12:00~次日8:00),拘束期間小鼠不能進(jìn)食飲水,正常對照組小鼠為非拘束禁食禁水小鼠。1.4不同血糖消除的線性范圍BALB/C小鼠5只,禁食20h口服葡萄糖2g/kg,分別于5、10、15、20、30、60和120min后尾靜脈取血檢測血糖濃度,求出血糖消除的線性范圍。1.5大鼠糖的抗劑上述各組實(shí)驗(yàn)動物在禁食和拘束結(jié)束30min后口服葡萄糖2g/kg,分別測定口服葡萄糖20、40、60、80min的血糖濃度。1.6肝素鈉小離心管液組在測定血糖濃度后,小鼠在乙醚麻醉下心臟取血0.5mL于肝素鈉小離心管中,5000r/min5min離心,取血漿。按丙酮酸試劑盒方法測定血漿丙酮酸含量。1.7肝糖原合成測定1.8根據(jù)tars法測定血漿mda含量1.9熒光酶標(biāo)板法檢測酶活的強(qiáng)度本實(shí)驗(yàn)參照Davalos等人方法并加以改進(jìn)。將96孔板每個微孔中加入待測樣品溶液20μL,再加入磷酸鉀緩沖液20μL和AAPH140μL(終濃度12.8mmol/L),最后添加熒光素鈉20μL至終濃度為63nmol/L,立即啟動反應(yīng)并迅速將酶標(biāo)板置于預(yù)溫37℃的熒光酶標(biāo)儀中開始測定。采用動力學(xué)方式,每2min測定一個點(diǎn),至熒光強(qiáng)度衰減為零為止。ORAC值是以1μmol/L的Trolox在熒光衰減曲線上對應(yīng)的保護(hù)積分面積作為標(biāo)準(zhǔn)對照計(jì)算。1.10數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)與分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以示,采用SPSS軟件,利用ANOVA檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2結(jié)果2.1糖負(fù)荷大鼠的糖時量曲線結(jié)果顯示血糖濃度在20min達(dá)峰值,80min后已降到空腹血糖水平,血糖線性范圍在20~80min,見圖1。2.2限制負(fù)荷對大鼠糖的抵抗力的影響如圖2所示,與正常對照組相比,拘束負(fù)荷小鼠的血糖消除速率明顯減慢,在40和60min時具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。2.3糖代謝消除速率如表1所示,口服2g/kg葡萄糖后拘束負(fù)荷小鼠血糖消除半衰期(T1/2)明顯延長(P<0.01),糖代謝消除速率下降。與應(yīng)激對照組相比(P<0.01),人參皂苷給藥組及王老吉給藥組均能使應(yīng)激小鼠糖耐受能力提高,結(jié)果表明王老吉涼茶能加速血糖利用。2.5orac水平如表3所示拘束負(fù)荷明顯增加小鼠血漿的脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA(P<0.01),且顯著降低小鼠血漿中的ORAC水平(P<0.01);與應(yīng)激對照組相比,人參皂苷和王老吉明顯減少拘束負(fù)荷小鼠血漿中的脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA含量(P<0.01),且明顯升高拘束負(fù)荷小鼠血漿中的ORAC水平(P<0.01),表明王老吉涼茶能降低體內(nèi)的過氧化水平同時能提高體內(nèi)的抗氧化能力,人參皂苷也顯示相同的作用。3王老吉茯苓茯苓茶多糖對小鼠血漿酮體及肝臟的代謝葡萄糖作為能源的利用在改善應(yīng)激負(fù)荷引致的疲勞和各種生理機(jī)能低下中起到了重要的作用。小鼠拘束負(fù)荷20h后血糖濃度半衰期由51.8min延遲到57.3min,表明拘束負(fù)荷降低小鼠對葡萄糖作為能源的利用能力。125及500mg/kg王老吉涼茶給藥促進(jìn)拘束負(fù)荷小鼠的血糖消除速率,改善因應(yīng)激負(fù)荷引起的血糖利用率低下,改善機(jī)體的能量代謝水平。當(dāng)葡萄糖攝取不足時,機(jī)體會動員儲存的脂肪作為能源利用,酮體是血漿脂肪酸代謝的不完全產(chǎn)物。我們的結(jié)果發(fā)現(xiàn)拘束負(fù)荷小鼠血漿酮體水平明顯上升,表明拘束負(fù)荷增加小鼠血漿脂肪酸代謝的不完全產(chǎn)物。125及500mg/kg王老吉涼茶給藥組降低拘束負(fù)荷小鼠的酮體水平同時促進(jìn)肝糖原合成,改善因拘束負(fù)荷起因的能源代謝低下,證明王老吉涼茶能提高葡萄糖能源的利用的同時加強(qiáng)能量的儲存。王老吉涼茶不僅降血漿中MDA含量,同時顯著提高體內(nèi)的抗氧化能力指數(shù)(ORAC)水平,能明顯地緩解機(jī)體內(nèi)的氧化應(yīng)激狀態(tài)可能有利于改善糖代低下狀況。目前國內(nèi)外對氧化應(yīng)激與疾病間的關(guān)系以及氧化應(yīng)激的發(fā)生機(jī)制從多方面進(jìn)行了探討和總結(jié),取得了一定的進(jìn)展和成果。但是關(guān)于糖代謝狀態(tài)與體內(nèi)抗氧化能力間的研究尚不多見。王老吉涼茶由崗梅根、木蝴蝶、火炭母、金錢草、布渣葉、淡竹葉金沙藤、五指柑、山芝麻、金櫻根10味草藥組成,具有清熱解暑、祛濕生津等功能。本實(shí)驗(yàn)中我們以葡萄糖耐受實(shí)驗(yàn)來觀察應(yīng)激和血糖代謝的關(guān)系,同時測定小鼠體內(nèi)氧化水平和抗氧化能力的變化。測定血糖濃度后,小鼠在乙醚麻醉下取出肝臟,按肝糖原試劑盒方法測定肝糖原含量。按MDA試劑盒說明書方法測定MD