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微生物模塊一、微生物的實(shí)驗(yàn)室:1.培養(yǎng)基(1)概念:人們按照微生物對(duì) 的不同需求,配制出供其的營養(yǎng)基質(zhì)。(2)營養(yǎng)組成:一般都含有 和。此外,還需要滿足微生物生長對(duì)、氧氣以及 的要求。(3)分類培養(yǎng)基(含凝固劑);培養(yǎng)基(不含凝固劑)(凝固劑是:中提取到物質(zhì),在下凝固,下熔化)2.無菌技術(shù)獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵:類型概念方法對(duì)象3.大腸桿菌的純化培養(yǎng)(1)制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基步驟:計(jì)算→稱量→→→→問題:①.培養(yǎng)基滅菌后,需要冷卻到左右時(shí),才能用來倒平板。你用什么辦法來估計(jì)培養(yǎng)基的溫度?②.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰?③.為什么將平板倒置?(2)純化大腸桿菌的方法①純化培養(yǎng)原理:想方設(shè)法在培養(yǎng)基上得到 的肉眼可見的 ,即可獲得較純的菌種。②純化大腸桿菌的關(guān)鍵步驟: ,接種時(shí)要在旁,原因是。③常用的微生物接種方法有兩種a.法:是通過 在瓊脂固體培養(yǎng)基表面 的操作,將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。b. 法:是將菌液進(jìn)行一系列的 ,然后將 的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面,進(jìn)行培養(yǎng)。問題:①在這兩種接種方法中,計(jì)數(shù)時(shí)只能選哪種接種方法?②兩種接種方法的目的是:問題①.劃線時(shí)為什么要從上一次劃線的末端開始?②.劃線時(shí)不能劃破培養(yǎng)基,如果劃破了會(huì)怎樣?③.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)?在劃線操作結(jié)束時(shí),仍然需要灼燒接種環(huán)嗎?為什么?④.在灼燒接種環(huán)之后,為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線?(3)菌種的保存方法①對(duì)于頻繁使用的菌種,可以采用 的方法,接種在試管的培養(yǎng)基上,將試管放入保藏②對(duì)于需要長期保存的菌種,可以采用 的方法。4.實(shí)驗(yàn)室中篩選微生物的原理是
。二、土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)1.實(shí)驗(yàn)原理:(1)能合成的細(xì)菌才能分解尿素(2)配制以為唯一的培養(yǎng)基,能夠生長的細(xì)菌就是能分解尿素的細(xì)菌,還要涂布一個(gè)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基,以此說明。⑶可以用加了的培養(yǎng)基進(jìn)行鑒別,培養(yǎng)基變2.實(shí)驗(yàn)流程:土壤取樣→配制土壤溶液和制備培養(yǎng)基→→涂布平板與培養(yǎng)→菌落計(jì)數(shù)3.統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法方法一:(活菌計(jì)數(shù)法);至少要涂布個(gè)平板,最后求取值,還要設(shè)置一個(gè)平板作為對(duì)照,以說明一般選擇菌落數(shù)在的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目,原因是方法二:;用了哪種載玻片問題:①觀察酵母菌的數(shù)量的動(dòng)態(tài)變化用法,其中也用到了板,因此也叫法②如分別取0.1mL已稀釋102倍的水樣分別涂布到六個(gè)瓊脂固體培養(yǎng)基的表面進(jìn)行培養(yǎng),培養(yǎng)基記錄到大腸桿菌的菌落數(shù)分別為26、161、155、158、170,302則每升原水樣中大腸桿菌數(shù)為_______,三、.分解纖維素的微生物的分離(1)①組成:纖維素酶是一種 ,一般認(rèn)為它至少包括三種組分,即 。②作用:纖維素纖維二糖葡萄糖(2)纖維素分解菌的篩選①原理:纖維素分解菌↓eq\b\lc\\rc\}(\a\vs4\al\co1(剛果紅,纖維素))→eq\o(→,\s\up7(纖維素酶))紅色消失,出現(xiàn)②篩選方法:染色法,即通過是否產(chǎn)生來篩選纖維素分解菌。③培養(yǎng)基:以為唯一的培養(yǎng)基。④實(shí)驗(yàn)流程:土壤取樣:富含的環(huán)境選擇培養(yǎng):用選擇培養(yǎng)基培養(yǎng),作用是梯度稀釋:用制備系列稀釋液涂布平板:將樣品涂布到纖維素分解菌的培養(yǎng)基上挑選產(chǎn)生的菌落問題:1.土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與分解纖維素的微生物的分離的實(shí)驗(yàn)流程有哪些異同?2.選擇培養(yǎng)為什么能夠“濃縮”菌種?3.選擇培養(yǎng)中用培養(yǎng)基作對(duì)照,而菌落計(jì)數(shù)時(shí)用的空白培養(yǎng)基作對(duì)照,用途有什么不同?點(diǎn)撥(1)兩種對(duì)照組作用比較①判斷培養(yǎng)基中“是否有雜菌污染”,需將未接種的培養(yǎng)基同時(shí)進(jìn)行培養(yǎng)。②判斷選擇培養(yǎng)基“是否具有篩選作用”,需設(shè)立牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基進(jìn)行接種后培養(yǎng),觀察兩種培養(yǎng)基上菌落數(shù)目,進(jìn)行對(duì)比得出結(jié)論。(2)平板劃線法純化大腸桿菌時(shí)不同階段灼燒接種環(huán)的目的不同①第一次操作:殺死接種環(huán)上原有的微生物。②每次劃線之前:殺死上次劃線后接種環(huán)上殘留的菌種,使下次劃線的菌種直接來源于上次劃線的末端。③劃線結(jié)束后:殺死接種環(huán)上殘存的菌種,避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。答案一、微生物的實(shí)驗(yàn)室:1.培養(yǎng)基(1)概念:人們按照微生物對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求,配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)。(2)營養(yǎng)組成:一般都含有水、碳源、氮源和無機(jī)鹽。此外,還需要滿足微生物生長對(duì)pH、氧氣以及特殊營養(yǎng)物質(zhì)的要求。①自養(yǎng)微生物能夠利用空氣中的CO2合成有機(jī)物,培養(yǎng)基中不需加入有機(jī)碳源(可加入無機(jī)碳源)。②固氮微生物能夠固定空氣中的N2,合成氨態(tài)氮,培養(yǎng)基中不需添加氮源。③培養(yǎng)乳酸菌需要添加維生素;培養(yǎng)霉菌需要將PH調(diào)至酸性;培養(yǎng)細(xì)菌需要將PH調(diào)至中性或微堿性;厭氧微生物需要提供無氧環(huán)境。(3)分類固體培養(yǎng)基(含凝固劑);液體培養(yǎng)基(不含凝固劑)(凝固劑是瓊脂:紅藻中提取到多糖物質(zhì),在44℃下凝固,98℃下熔化)2.無菌技術(shù)獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵:防止外來雜菌的污染類型概念方法對(duì)象消毒指使用較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對(duì)人體有害的微生物(不包括芽孢和孢子)煮沸消毒法泡菜壇巴氏消毒法不耐高溫的液體,如牛奶化學(xué)藥劑酒精擦拭雙手,氯氣消毒水源;紫外線接種箱;工作臺(tái)滅菌指用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物(包括芽孢和孢子)灼燒滅菌接種環(huán)、接種針或其他金屬工具干熱滅菌玻璃器皿(吸管、培養(yǎng)皿)和金屬用具等高壓蒸汽滅菌(100kPa、121℃)培養(yǎng)基等3.大腸桿菌的純化培養(yǎng)(1)制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基步驟:計(jì)算→稱量→溶化→(調(diào)PH)→滅菌→倒平板問題:①.培養(yǎng)基滅菌后,需要冷卻到50℃左右時(shí),才能用來倒平板。你用什么辦法來估計(jì)培養(yǎng)基的溫度?用手觸摸,冷卻到剛不燙手為止②.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰?殺滅瓶口雜菌③.為什么將平板倒置?使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā);防止冷凝后形成的水珠滴落在培養(yǎng)基上污染培養(yǎng)基(2)純化大腸桿菌的方法①純化培養(yǎng)原理:想方設(shè)法在培養(yǎng)基上得到 由單個(gè)細(xì)胞繁殖而來的肉眼可見的 菌落,即可獲得較純的菌種。②純化大腸桿菌的關(guān)鍵步驟: 接種,接種時(shí)要在酒精燈火焰旁旁,原因:火焰附近存在著無菌區(qū)域。③常用的微生物接種方法有兩種a.平板劃線法:是通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作,將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。b. 稀釋涂布平板法:是將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋,然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面,進(jìn)行培養(yǎng)。問題:①在這兩種接種方法中,計(jì)數(shù)時(shí)只能選哪種接種方法?稀釋涂布平板法②兩種接種方法的目的是:得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來的菌落問題①.劃線時(shí)為什么要從上一次劃線的末端開始?能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐漸減少,最終得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來的菌落。②.劃線時(shí)不能劃破培養(yǎng)基,如果劃破了會(huì)怎樣?劃破了,細(xì)菌會(huì)沿劃破處粘連生長,無法達(dá)到分離單個(gè)菌落的目的③.為什么在操作的第一步要灼燒接種環(huán)?殺死接種環(huán)上原有的微生物每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)?殺死上次劃線后接種環(huán)上殘留的菌種,使下次劃線的菌種直接來源于上次劃線的末端,使每次劃線菌種數(shù)目減少在劃線操作結(jié)束時(shí),仍然需要灼燒接種環(huán)嗎?為什么?殺死接種環(huán)上殘存的菌種,避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者④.在灼燒接種環(huán)之后,為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線?以免溫度太高殺死菌種(3)菌種的保存方法①對(duì)于頻繁使用的菌種,可以采用臨時(shí)保的方法,接種在試管的固體斜面培養(yǎng)基上,將試管放入4℃冰箱保藏②對(duì)于需要長期保存的菌種,可以采用甘油管藏的方法。4.實(shí)驗(yàn)室中篩選微生物的原理是
人為提供有利于目的菌株生長的條件(包括營養(yǎng)、溫度、pH等養(yǎng)、溫度、pH等),同時(shí)抑制或阻止其他微生物生長。二、土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)1.實(shí)驗(yàn)原理:(1)能合成脲酶的細(xì)菌才能分解尿素;脲酶能催化尿素分解成氨。(2)配制以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基,能夠生長的細(xì)菌就是能分解尿素的細(xì)菌,還要涂布一個(gè)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基,以此說明選擇培養(yǎng)基具有篩選作用。⑶可以用加了酚紅指示劑的培養(yǎng)基進(jìn)行鑒別,氨使PH升高后,培養(yǎng)基變紅2.實(shí)驗(yàn)流程:土壤取樣→配制土壤溶液和制備培養(yǎng)基→梯度稀釋→涂布平板與培養(yǎng)→菌落計(jì)數(shù)3.統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法方法一:稀釋涂布平板法(活菌計(jì)數(shù)法);至少要涂布3個(gè)平板,最后求取平均值值,還要設(shè)置一個(gè)未接種的培養(yǎng)基作為對(duì)照,以說明這些培養(yǎng)基未被雜菌污染一般選擇菌落數(shù)在30~300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低,原因是當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)菌體連在一起時(shí),平板上觀察到的只是一個(gè)菌落。方法二:顯微鏡直接計(jì)數(shù)法;用了哪種載玻片血細(xì)胞計(jì)數(shù)板問題:①觀察酵母菌的數(shù)量的動(dòng)態(tài)變化用抽樣檢測法,其中也用到了血細(xì)胞計(jì)數(shù)板,因此也叫血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)法②如分別取0.1mL已稀釋102倍的水樣分別涂布到六個(gè)瓊脂固體培養(yǎng)基的表面進(jìn)行培養(yǎng),培養(yǎng)基記錄到大腸桿菌的菌落數(shù)分別為26、161、155、158、170,302則每升原水樣中大腸桿菌數(shù)為_______1.61*108三、.分解纖維素的微生物的分離(1)①組成:纖維素酶是一種復(fù)合酶,一般認(rèn)為它至少包括三種組分,即C1酶、Cx酶、葡萄糖苷酶。②作用:纖維素eq\f(C1酶,Cx酶)纖維二糖eq\o(――→,\s\up7(葡萄糖苷酶))葡萄糖(2)纖維素分解菌的篩選①原理:纖維素分解菌↓eq\b\lc\\rc\}(\a\vs4\al\co1(剛果紅,纖維素))→紅色復(fù)合物eq\o(→,\s\up7(纖維素酶))紅色消失,出現(xiàn)透明圈②篩選方法:剛果紅(CR)染色法,即通過透明圈大小來篩選纖維素分解菌。③培養(yǎng)基:以纖維素為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基。加入剛果紅后是鑒別培養(yǎng)基④實(shí)驗(yàn)流程:土壤取樣:富含纖維素的環(huán)境選擇培養(yǎng):用選擇培養(yǎng)基培養(yǎng),作用是有利于纖維素分解菌的繁殖,抑制其他細(xì)菌的繁殖,可以提高纖維素分解菌的濃度
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