中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)體系構(gòu)建的科學(xué)方法

中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)體系構(gòu)建的科學(xué)方法

《國家藥物安全“十二五”計劃》明確指出了“中國標(biāo)準(zhǔn)主導(dǎo)基準(zhǔn)”的制定。這一目標(biāo)的提出表明我國已經(jīng)開始從國家層面重視中醫(yī)藥的發(fā)展,開始把握中藥國際標(biāo)準(zhǔn)制訂的主導(dǎo)權(quán),將推進(jìn)“中藥標(biāo)準(zhǔn)化和現(xiàn)代化”納入了新時期的重點戰(zhàn)略任務(wù),從而推動中藥國際化發(fā)展。我國一直重視中藥質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)化工作,《中國藥典》每5年修訂1次,每年制訂1個增補版,這在很大程度上提升了我國藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的水平和相對保障了中藥實用的安全和有效。2010年版《中國藥典》收載了4567個品種,基本形成了中藥材、中藥飲片、中成藥、化學(xué)藥品、藥品輔料、生物制品等門類齊全的藥品標(biāo)準(zhǔn)體系。然而到目前為止,我國尚未有處方藥真正獲得國外市場尤其是歐美市場的認(rèn)可,中藥往往是以保健品或者食品補充劑的角色出現(xiàn)在歐美市場。因此在推進(jìn)我國中藥國際化的進(jìn)程中,中藥標(biāo)準(zhǔn)引領(lǐng)國際需先行,通過構(gòu)建完善的中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)體系,讓中藥在歐美市場以藥品的形式獲得國際認(rèn)可。標(biāo)準(zhǔn)體系構(gòu)建的方法卻一直是仁者見仁,智者見智。如肖小河教授［1］提出了中藥質(zhì)量控制和評價模式應(yīng)多元化,提出在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中采用生物效價檢測方法;梁鑫淼教授［2］提出了中藥質(zhì)量控制技術(shù)應(yīng)重點發(fā)展以分離和表征技術(shù)為主的中藥質(zhì)量控制關(guān)鍵技術(shù),構(gòu)建具有中藥特色的過程控制和產(chǎn)品質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。毋庸置疑,這些創(chuàng)新的方法為中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)體系的構(gòu)建與完善提供了更多的思路。但是中藥標(biāo)準(zhǔn)構(gòu)建一方面需要先進(jìn)的科學(xué)技術(shù),前沿的研究成果,同時更需要在實際應(yīng)用中具有可操作性,所以很多新的方法應(yīng)用到標(biāo)準(zhǔn)中還需要大量的實踐與驗證。美國藥典(USP)、歐洲藥典(EP)、英國藥典(BP)等國家官方機(jī)構(gòu)都收錄了多個傳統(tǒng)草藥或植物藥的標(biāo)準(zhǔn),據(jù)筆者實驗室最新統(tǒng)計,2014年出版的美國藥典37中收錄有153個草藥及其制劑,歐洲藥典8.0中,收錄有272個草藥及其制劑。各國藥典委員會在參考《中國藥典》英文版的同時,并根據(jù)本國的實際情況對草藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行制訂和管理。以專論(monograph)體現(xiàn)的思路與理念,形式和內(nèi)容,不同的國家也不盡相同。奧地利國家中醫(yī)藥研究中心主任RudolfBauer教授與歐洲藥典會中藥專家委員會主席GerhardFranz博士在他們的文章中詳細(xì)對比了2005年版《中國藥典》與歐洲藥典6.0的異同［3］。但應(yīng)該看到標(biāo)準(zhǔn)制訂的思路與理念是相通的,在基本指導(dǎo)思想上是可以互相借鑒與學(xué)習(xí),以便達(dá)成共識。這些專論為我國中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)體系的國際化提供了可以學(xué)習(xí)和借鑒的方法。中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)體系構(gòu)建主要包括2部分工作:基礎(chǔ)研究與標(biāo)準(zhǔn)建立。實用的中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)需要方法科學(xué)、多點控制、實用可行,只有深入地進(jìn)行大量的基礎(chǔ)研究工作與積累總結(jié),才有簡便而又嚴(yán)謹(jǐn)?shù)臉?biāo)準(zhǔn),只有足夠地“深入研究”才有合適地“淺出標(biāo)準(zhǔn)”。1深入研究中藥標(biāo)準(zhǔn)體系的構(gòu)建首先要進(jìn)行深入地基礎(chǔ)研究。1.1關(guān)于藥材質(zhì)量判斷標(biāo)準(zhǔn)中藥品種的基原確定是中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)構(gòu)建的根本。從《中國藥典》收載的中藥的基原背景,已可看出中藥品種的復(fù)雜性?？紤]到歷史沿革和藥材資源的問題,中藥多基原的情況一直存在。完善的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)首先要對中藥優(yōu)質(zhì)品種進(jìn)行發(fā)現(xiàn)和確立,盡可能的單品種、單基原,以保證所使用藥材療效的一致性。中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的發(fā)展進(jìn)程也是對生物多樣性選擇性應(yīng)用的過程?！吨袊幍洹芬呀?jīng)在這方面做了很多研究工作,將所含成分差別較大的品種按照一物一名的原則分列。如將葛根項下的野葛與粉葛分列2個項下,對于葛根素的限度進(jìn)行了分別要求;將五味子因其性狀和有效成分的不同列為五味子與南五味子2個品種;將漏蘆分為祁州漏蘆和禹州漏蘆;將川黃柏與關(guān)黃柏分開,并分別進(jìn)行了定量控制等等。但是也有學(xué)者對有些品種的分列提出質(zhì)疑,如金銀花與山銀花的分列,以木犀草苷作為指標(biāo)成分分列的依據(jù)是否充分,原植物忍冬作為金銀花的唯一來源給金銀花市場資源可能帶來的困擾等類似問題其實也存在于一些其他品種中,這就需要大量深入的基礎(chǔ)研究后才能得出科學(xué)恰當(dāng)?shù)慕Y(jié)論［4］。中藥基原的復(fù)雜性為藥材的真?zhèn)舞b別與優(yōu)劣評價工作帶來較大難度。現(xiàn)已有許多新技術(shù)、新方法應(yīng)用到實際研究工作中,從細(xì)胞學(xué)、化學(xué)、分子生物學(xué)等多角度對中藥品種進(jìn)行鑒定。近紅外漫反射光譜技術(shù)與聚類分析方法相結(jié)合,快速準(zhǔn)確識別偽劣藥材已經(jīng)得到廣泛推廣。DNA分子鑒定技術(shù)已經(jīng)在2010年版《中國藥典》中應(yīng)用于烏梢蛇極其混淆品種鑒別中,這個方法可以廣泛應(yīng)用于其他動物藥如鱉甲、海馬的鑒別中。跨學(xué)科的合作,讓在繼承基礎(chǔ)上的創(chuàng)新能夠得以實現(xiàn)。天然麝香、市售麝香及人工麝香的譜圖相似性較高,尤其是人工麝香與天然麝香極其相似,難以區(qū)分;采用傅里葉變換紅外(FTIR)光譜法并結(jié)合二階導(dǎo)數(shù)技術(shù),提高了譜圖分辨率,可直觀有效地鑒別正品麝香。該方法具有快速、靈敏、直觀、無損等特點,可為名貴藥材的來源與真?zhèn)舞b別提供了新的手段［5］。1.2多成分認(rèn)識的不斷深化基于中醫(yī)理論指導(dǎo)下的全面藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究是中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)體系構(gòu)建的的基石。中藥是多成分的復(fù)雜體系,進(jìn)行全面質(zhì)量控制不宜做到,目前能做到的就是基于中醫(yī)理論指導(dǎo)下去認(rèn)識中藥的主要藥效成分,基于中醫(yī)理論指導(dǎo)對藥效物質(zhì)基礎(chǔ)進(jìn)行全面的研究?！吨袊幍洹分械闹兴帢?biāo)準(zhǔn)與國外植物藥專論最顯著的特點也是最重要的區(qū)別就是中藥標(biāo)準(zhǔn)定性與定量的成分確立依據(jù)離不開中醫(yī)臨床的功能主治。而植物藥則是孤立地就已有的化學(xué)研究基礎(chǔ)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)的構(gòu)建。眾所周知,中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)體系建立的初期主要是參考化學(xué)藥物的質(zhì)控模式,孤立的去構(gòu)建某一個指標(biāo)性成分的定性定量標(biāo)準(zhǔn),從而對整個中藥進(jìn)行質(zhì)量控制。但是中藥復(fù)雜體系與化學(xué)藥的單一成分完全不同,構(gòu)建這樣的標(biāo)準(zhǔn)體系只能是中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)構(gòu)建進(jìn)程中的過往與歷史。擁有多成分與多靶點起效的中藥需要更加完善的整體質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)體系。這就是整體觀,也是基于藥效作用的多成分的分離與定性定量分析。在通過對更多成分認(rèn)知的過程中,逐步完善整體質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)體系的構(gòu)建。如筆者所在實驗室通過對白芍的化學(xué)成分進(jìn)行分離,從白芍中提取分離到了新化合物芍藥苷亞硫酸酯,并明確了該化合物是白芍硫磺熏制的過程中由芍藥苷和二氧化硫反應(yīng)而生成,并提出控制芍藥苷亞硫酸酯的限量。由此可見深入的基礎(chǔ)研究可以幫助中藥從炮制、加工開始就得到嚴(yán)格有效的質(zhì)控。筆者實驗室通過化學(xué)手段對同屬不同種植物進(jìn)行分離研究,發(fā)現(xiàn)了其間的顯著性差異,如《中國藥典》中靈芝項下收載的赤芝Ganodermalucidum和紫芝G.sinense,如果僅就多糖類成分進(jìn)行研究,它們幾乎是相同的,但進(jìn)一步對三萜類成分研究發(fā)現(xiàn)赤芝和紫芝有很大的區(qū)別。赤芝的代表性成分靈芝三萜酸、靈芝三萜烯酸、靈芝醇等成分在紫芝中幾乎檢測不到［6］。而很多研究顯示靈芝三萜類化合物具有很好的藥理活性［7-8］。但是在藥典中,還一直將2種靈芝都作為中藥靈芝的合法來源。因此建議,靈芝項下收載的赤芝和紫芝2個品種由于差異性較大,臨床應(yīng)用時還需要仔細(xì)甄別,區(qū)別使用。1.3關(guān)于中藥單體、中藥提取物的研究中藥作為復(fù)雜體系,作用機(jī)制的研究在以中醫(yī)理論為指導(dǎo)的同時,還需要多學(xué)科共同研究,彼此滲透交叉,并通過多種技術(shù)進(jìn)行輔助、得到盡可能多的信息數(shù)據(jù),進(jìn)行多角度分析。許多全新的想法與技術(shù)在不斷醞釀,其中比較突出的是系統(tǒng)生物學(xué)技術(shù)應(yīng)用到中藥的研究中。系統(tǒng)生物學(xué)主要包括基因組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、代謝組學(xué)、轉(zhuǎn)錄組學(xué)、生物信息學(xué)等各種組學(xué),它對人體從生物系統(tǒng)中所有組成成分(基因、mRNA、蛋白質(zhì)等)的構(gòu)成及其在特定條件下這些組分之間的相互關(guān)系的研究,系統(tǒng)生物學(xué)的整體觀與中醫(yī)藥復(fù)雜體系的整體觀在某種程度上達(dá)成契合,讓很多科研工作者更有興趣進(jìn)行深入研究。近年來,筆者實驗室也一直在進(jìn)行該方面的研究,將蛋白組學(xué)、生物信息學(xué)應(yīng)用到中藥單體、中藥提取物研究中,已經(jīng)對丹參、三七、靈芝的提取物進(jìn)行了相關(guān)研究工作［9］。通過蛋白質(zhì)雙向電泳結(jié)合質(zhì)譜鑒定的方法找到了12個可能與靈芝孢子總多糖(polysaccharides)刺激小鼠脾臟單核細(xì)胞增殖作用相關(guān)的蛋白質(zhì)［10］;通過蛋白質(zhì)雙向電泳結(jié)合蛋白質(zhì)功能驗證等技術(shù)闡明了靈芝總?cè)?ganodermatrit-erpenes)與抗腫瘤化學(xué)藥物阿霉素合用對人宮頸癌細(xì)胞株HeLa的細(xì)胞毒性的分子機(jī)制,其協(xié)同作用機(jī)制可能是通過增加氧自由基損傷和DNA損傷以及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡殺死腫瘤細(xì)胞［11］。中藥丹參中的主要活性成分丹酚酸B的作用機(jī)制,受到廣泛關(guān)注,實驗室研究發(fā)現(xiàn)［12-14］丹酚酸B可對心肌病、心肌缺血再灌注損傷、心肌纖維化、慢性心衰等皆有顯著保護(hù)作用。在細(xì)胞水平,丹酚酸B明顯降低血小板聚集、改善心肌細(xì)胞和心肌成纖維細(xì)胞的抗缺氧能力、降低血管平滑肌細(xì)胞的通透性、降低心肌成纖維細(xì)胞的遷移和膠原分泌能力;在分子水平,課題組研究證實丹酚酸B是一個新型的MMP-9抑制劑,可與intergrin直接結(jié)合等,上述研究拓展了丹參研究的深度也為制訂科學(xué)合理的丹參質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了科學(xué)依據(jù)。此外,課題組采用生物信息學(xué)反向?qū)拥姆椒▽ふ业し铀酈的直接結(jié)合蛋白靶點,用蛋白質(zhì)組學(xué)的方法尋找丹酚酸B作用的信號傳導(dǎo)靶點,隨后用生物信息學(xué)網(wǎng)絡(luò)分析的方法將靶點形成網(wǎng)絡(luò)并進(jìn)行驗證［15-16］。上述研究拓展了丹參研究的深度,也為制訂科學(xué)合理的丹參質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了科學(xué)依據(jù)。迄今為止,不少科研工作者都在系統(tǒng)生物學(xué)思路指導(dǎo)下開展了對中藥復(fù)雜體系的研究,但是全新的技術(shù)如何能全面、系統(tǒng)、正確地闡明中藥的作用靶點、作用環(huán)節(jié)和作用過程還有很長的一段路要走。2制訂標(biāo)準(zhǔn)要科學(xué)、與簡單地聯(lián)系起來中藥標(biāo)準(zhǔn)體系的構(gòu)建在深入的基礎(chǔ)研究之后,立足點還要落在制訂的標(biāo)準(zhǔn)要科學(xué)、相對簡單并可行。根據(jù)在實驗中遇到的問題與積累的經(jīng)驗,在現(xiàn)有質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)指導(dǎo)原則的基礎(chǔ)上,對中藥整體質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)研究的思路與方法提出以下幾點建議,以供商榷。2.1通過標(biāo)準(zhǔn)對照提取物進(jìn)行篩選對照物質(zhì)在標(biāo)準(zhǔn)的構(gòu)建與執(zhí)行過程中扮演著重要角色。在實驗研究中,經(jīng)常會遇到用于定性的對照藥材缺貨或者買到的對照藥材不同批號在薄層鑒別中表現(xiàn)不同,用于定量的對照品含量經(jīng)常低于90%,這一問題為標(biāo)準(zhǔn)的構(gòu)建工作帶來很大困擾。在實驗室大量的實踐工作中發(fā)現(xiàn),對照提取物的應(yīng)用以及一測多評方法可以更好地幫助解決這一問題。標(biāo)準(zhǔn)對照提取物的制備比對照品(referencestandard)更易獲得,經(jīng)濟(jì)實用;同時又比用對照藥材制訂的標(biāo)準(zhǔn)更嚴(yán)謹(jǐn),批與批之間易保證良好的一致性,在相同的色譜條件下,色譜行為重現(xiàn)性好。在《中國藥典》,對照提取物僅應(yīng)用于以該提取物為原料藥制備的制劑中。實際上對照提取物在藥材的鑒別上同樣適用。對于多基原的品種及一個中藥中含有不同類別的成分,通過制備相應(yīng)的對照提取物同樣可以制訂科學(xué)可行的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。提取物制備的工藝過程可以是開放式的,不用條條框框去限定,不要成為標(biāo)準(zhǔn)制訂的瓶頸,可以殊途同歸,但最后還是都要歸結(jié)到符合相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)上。所以要求提取物的標(biāo)準(zhǔn)要盡可能地周詳與嚴(yán)謹(jǐn),通過結(jié)果控制過程。在美國藥典植物藥的專論中,標(biāo)準(zhǔn)對照提取物的使用貫穿于整個標(biāo)準(zhǔn)的定性、定量研究。在定性研究中,采用標(biāo)準(zhǔn)對照提取物進(jìn)行薄層鑒別中條帶(或斑點)以及特征圖譜中特征峰的指認(rèn)。在定量研究中,采用標(biāo)準(zhǔn)對照提取物在一測多評方法的應(yīng)用中幫助進(jìn)行非對照色譜峰的其他峰指認(rèn)。美國藥典與歐洲藥典都采用終產(chǎn)品質(zhì)量控制的方式,提取物的制備過程及方法在標(biāo)準(zhǔn)中表述的比較簡單。美國藥典的提取物與制備相關(guān)的內(nèi)容主要包括3大元素:提取所用生藥,合適的溶劑以及標(biāo)示量(或含量)。例如,Echinaceapallida提取物,在表述上為:采用醇水混合溶劑或其他合適的溶劑對E.pallida的根進(jìn)行提取;生藥與所得提取物的比例為2∶1~8∶1;本品按干燥品計算,含總酚以咖啡酰酒石酸(caftaricacid),菊苣酸(chicoricacid),綠原酸(chlorogenicacid)以及松果菊苷(echinacoside)之和計,應(yīng)為4.0%~5.0%。在歐洲藥典中,也是類似的情況,如歐洲藥典6.1中銀杏提取物的標(biāo)準(zhǔn)中,該部分內(nèi)容是從3個方面進(jìn)行描述:定義(包括含量)、生產(chǎn)過程以及性狀。在生產(chǎn)過程(produc-tion)項下的描述中,提取物是由銀杏葉精制而成,采用合適的過程,提取溶劑為有機(jī)溶劑或與水混合成一定比例,采用合適的物理分離過程。在制備方法中少了我國藥典中的提取時間、次數(shù)、提取溶劑及所用倍量等等,而對于這些細(xì)節(jié)上的要求,其實是通過嚴(yán)格的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)來進(jìn)行控制。總之,新的對照物質(zhì)、對照提取物的廣泛應(yīng)用可以幫助更經(jīng)濟(jì)更科學(xué)的構(gòu)建中藥質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。2.2標(biāo)準(zhǔn)對成分的定性鑒定中藥標(biāo)準(zhǔn)體系的構(gòu)建離不開薄層圖譜、特征圖譜或指紋圖譜,他們將中藥標(biāo)準(zhǔn)采用圖譜的形式生動直觀的展現(xiàn)出來,讓標(biāo)準(zhǔn)簡單清晰的表達(dá)出來,更容易被接受和理解,這是“深入研究,淺出標(biāo)準(zhǔn)”這一理念的最好表現(xiàn)形式。2.2.1薄層圖譜目前《中國藥典》中藥標(biāo)準(zhǔn)中,在鑒別項下大多以顯微鑒別和薄層鑒別為主,在薄層鑒別中,大多品種僅僅要求與對照藥材一致,沒有標(biāo)明所含成分,沒有明確檢測幾個斑點。但在實際工作中,需要對更多的成分進(jìn)行檢識,以便更好的監(jiān)控中藥的真?zhèn)魏蛢?yōu)劣,所以建議對于薄層鑒別圖譜進(jìn)行細(xì)化和完善。如丹參在《中國藥典》中,只分別對丹參酮ⅡA、丹酚酸B以及對照藥材進(jìn)行鑒別,筆者實驗室對該標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了修訂,該部分的工作體現(xiàn)在美國藥典37版第4卷收載的丹參藥材標(biāo)準(zhǔn)中［17］,表述如下:日光下,供試品色譜圖中,在薄層板上1/3部分,在Rf約為0.75的位置,與丹參酮ⅡA對照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同的粉紅色斑點。供試品色譜中,在Rf約為0.65和0.50的位置上還分別有1個黃白色斑點和1個橙色斑點,與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點,分別由丹參酮I和隱丹參酮產(chǎn)生。紫外光燈下(365nm),供試品色譜圖中,在薄層板下1/3部分,在Rf約為0.20的位置,與丹酚酸B對照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同的藍(lán)色熒光斑點。供試品色譜中,在Rf約為0.30和0.35的位置上還有2個斑點,與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的熒光斑點,分別由紫草酸和迷迭香酸產(chǎn)生。修訂后的標(biāo)準(zhǔn)不僅明確了丹參酮ⅡA、丹酚酸B2個成分,同時還通過Rf及斑點或條帶的顏色來指認(rèn)對照藥材色譜上相應(yīng)的位置上的成分,將丹參中目前含量較高的6個活性成分均予以指認(rèn)。在美國藥典與歐洲藥典中,即便不知道條帶(或斑點)歸屬的化學(xué)成分,也會對條帶進(jìn)行詳細(xì)的描述,要求在鑒別中進(jìn)行檢識。如美國藥典中刺五加(eleuthero)的薄層鑒別中,除了對對照品刺五加苷B(eleutherosideB)進(jìn)行描述為棕色至紅色條帶外,又分別對其上下的藍(lán)色條帶和黃色條帶進(jìn)行描述,同時還描述在薄層板的上部有若干棕色至黃色條帶。歐洲藥典在標(biāo)準(zhǔn)中是采用了更直觀的與薄層板對應(yīng)比例的圖表,在相應(yīng)的位置寫上條帶的顏色,如銀杏提取物中,條帶的表述有8條,大約十余個成分在表述中。盡可能多的成分在薄層檢識中需要被鑒別。完善的薄層圖譜應(yīng)該能最大程度的把中藥中的主要成分直觀表現(xiàn)出來,更好的發(fā)揮其定性鑒別作用。2.2.2特征圖譜特征圖譜是指對于一個中藥品種或其提取物,共用的具有特征性的一類或幾類成分的色譜或光譜圖,在標(biāo)準(zhǔn)的構(gòu)建中可以用于定性鑒別。2010年版《中國藥典》中新增加了特征圖譜項,如人參莖葉總皂苷、人參總皂苷、山楂葉提取物、連翹提取物、腫節(jié)風(fēng)浸膏、茵陳提取物、滿山紅油等提取物都有其特異性的鑒別圖譜,這是《中國藥典》在標(biāo)準(zhǔn)工作中的又一進(jìn)步。特征圖譜不要求與指紋圖譜一樣對圖譜的相似性進(jìn)行全面評價,它的主要特點是要突出該品種與其他品種不同的特異性成分,并將這些成分作為特征峰通過與S峰(參照物峰)的相對保留時間的計算,進(jìn)行色譜峰在特征圖譜上的定位,這些峰可以是已知的,也可以是未知的。如滿山紅油的特征圖譜中峰1是已知的乙酸龍腦酯,峰8是S峰-牻牛兒酮,其他特征峰根據(jù)相對保留時間定位判斷,并不需要進(jìn)行成分的指認(rèn)。在美國藥典與歐洲藥典中,也有類似特征圖譜樣的譜圖鑒別出現(xiàn)在鑒別(identification)項下。主要采用對照提取物為標(biāo)準(zhǔn)溶液,對樣品進(jìn)行鑒別,用于鑒別特征色譜峰并可配合定量分析方法進(jìn)行各個色譜峰的定位?？偨Y(jié)國內(nèi)外的研究方法,基本思路是一樣的,都是首先采用對照藥材或?qū)φ仗崛∥锝φ仗卣鲌D譜,并對特征成分進(jìn)行說明,應(yīng)檢出的特征峰數(shù),包含成分不明確的色譜峰,盡量使評判標(biāo)準(zhǔn)簡單明確。在標(biāo)準(zhǔn)中要求檢測出與對照藥材或?qū)φ仗崛∥镆粯拥纳V峰,用來說明中藥中所含成分。并提示最好采用對照藥材或?qū)φ仗崛∥镞M(jìn)行系統(tǒng)適用性實驗,調(diào)整分析參數(shù),從而保證定性研究與定量研究的一致性。2.2.3指紋圖譜中藥指紋圖譜系指中藥經(jīng)適當(dāng)處理后,采用一定的分析方法得到的能夠體現(xiàn)中藥整體或部分化學(xué)特性的色譜或光譜譜圖。中藥指紋圖譜應(yīng)最大限度地表征藥效相關(guān)成分或特征成分,滿足整體性、專屬性和重現(xiàn)性的要求。經(jīng)過多年的探索與應(yīng)用,指紋圖譜終于走進(jìn)了2010年版《中國藥典》,在中藥的質(zhì)量控制與評價中發(fā)揮著巨大的作用。三七總皂苷、三七三醇皂苷、丹參總酚酸提取物及丹參酮提取物等研究比較深入全面的提取物都建立了成熟的指紋圖譜方法。目前,指紋圖譜已經(jīng)廣泛應(yīng)用到藥材的真?zhèn)蝺?yōu)劣鑒別以及新藥生產(chǎn)過程的質(zhì)控中。如市場上許多偽藥都是通過單一成分加入來達(dá)到現(xiàn)有的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。當(dāng)采用指紋圖譜后,對于多成分的全面的控制使偽劣產(chǎn)品的鑒別找到了切實可行的辦法。指紋圖譜方法目前在美國藥典與歐洲藥典中還沒有采用,但在中藥標(biāo)準(zhǔn)國際化的過程中,指紋圖譜的方法也一定會被收載草藥和植物藥的各國藥典所接受和學(xué)習(xí)。2.3測多評方法的核心要義在于檢測峰的確定,同時把相對轉(zhuǎn)換因子作為由于已經(jīng)認(rèn)識到中藥化學(xué)成分的多樣性,作用基礎(chǔ)的多靶點,并且是多成分協(xié)同起效,國家藥典委員會從2005年版《中國藥典》的修訂時就提出加強中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的整體研究,需要對盡可能多的活性成分進(jìn)行定性定量研究。據(jù)筆者實驗室統(tǒng)計,在2010年版《中國藥典》中,中藥材的多指標(biāo)成分(≥2)含量測定共有90個品種,占總藥材的15.18%;植物油和提取物多指標(biāo)成分含量測定為17個,占提取物總數(shù)的36.17%。但是大多數(shù)還局限在對2種指標(biāo)成分的含量測定,其中對3個以上指標(biāo)成分測定的品種共有26個,其中最多測定5個指標(biāo)成分,僅有2個中藥。多指標(biāo)成分的質(zhì)控是大勢所趨,但是對照品的提供是該方法應(yīng)用的瓶頸。由此,能夠進(jìn)行多指標(biāo)含量測定的一測多評方法受到越來越多的重視。一測多評方法是指在含量測定時,采用一個對照品,同時對多個成分進(jìn)行含量測定。其他成分通過相對保留時間及對照藥材(或?qū)φ仗崛∥?的特征圖譜確認(rèn)色譜峰,進(jìn)而根據(jù)相對轉(zhuǎn)換因子計算其他色譜峰的含量。與傳統(tǒng)的多指標(biāo)成分定量評價方法相比較,主要是在標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行階段,后者需要更多的對照品,而一測多評法在方法構(gòu)建階段時,要比后者多進(jìn)行相對轉(zhuǎn)換因子和相對保留時間的計算,對方法的耐用性要求更高。一測多評方法構(gòu)建的內(nèi)容包括:指標(biāo)成分的確立、分析方法的建立、相對校正因子及相對保留時間的計算、方法學(xué)驗證及多個實驗室復(fù)核等,其中相對校正因子是一測多評方法的核心,如何保證方法建立過程中所獲得的校正因子具有可重復(fù)性是該分析方法的關(guān)鍵所在。筆者實驗室在研究工作中重點對校正因子的多方面影響因素進(jìn)行了考察［18-19］,由于校正因子的存在,所以在標(biāo)準(zhǔn)中對于實驗條件與參數(shù)要盡可能詳細(xì)地描述。據(jù)統(tǒng)計,美國藥典37版中,共有包括植物、