免疫組化在肺癌診斷中的應(yīng)用

免疫組化在肺癌

診斷中的應(yīng)用免疫組織（或細(xì)胞）化學(xué)技術(shù)是免疫學(xué)與組織化學(xué)兩種技術(shù)的結(jié)合，它的基本原理是應(yīng)用抗原與抗體的特異性結(jié)合，再用顯色劑顯色達(dá)到標(biāo)記細(xì)胞的某種抗原物質(zhì)的定性與定位檢測(cè)技術(shù)，是一種方法簡(jiǎn)單，且有效的腫瘤標(biāo)記技術(shù)。免疫組化在腫瘤診斷中的應(yīng)用（一）上皮性腫瘤標(biāo)記1．角蛋白（Keratin）：一種中間絲蛋白，（1）表皮角蛋白（Epidermalkeratin，EK）——鱗狀上皮或高分化鱗癌標(biāo)記；（2）細(xì)胞角蛋白（cytokeratin，CK）——低分子角蛋白，對(duì)腺癌、移行細(xì)胞部及低分化鱗癌標(biāo)記。一般用廣譜型角蛋白抗體為好，常用。2．上皮膜抗原（Epithelialmembraneantigen，EMA）：這亦是常用的上皮細(xì)胞標(biāo)記抗體，細(xì)胞膜陽(yáng)性，用Zanker’s、Bouin或B5固定液中固定為好。其在低分化和未分化上皮中表達(dá)好，但亦可在間變性大細(xì)胞淋巴瘤、惡性橫紋肌樣瘤中表達(dá)。

3．橋粒蛋白（Desmoplakin）：主要標(biāo)記上皮橋粒，DesmoⅡ僅表達(dá)于復(fù)層上皮。4．癌胚抗原（Carcinoembrgonicantigen，CEA）：是從結(jié)腸癌中分離而得一種球蛋白，定位于細(xì)胞膜上，對(duì)腸、胃、肺、胰、肝、乳腺等腺癌標(biāo)記陽(yáng)性，但個(gè)別非上皮腫瘤也可陽(yáng)性。

5．甲胎蛋白（AlphaFetoprotein，AFP）：由胎肝細(xì)胞提取的一種酸性糖蛋白，細(xì)胞漿和膜上表達(dá)，它對(duì)肝細(xì)胞癌、卵黃囊癌的特異性標(biāo)記。（二）間葉源性腫瘤免疫組化標(biāo)記間葉組織包括纖維結(jié)締組織、脂肪、肌肉、血管、骨、軟骨及外周神經(jīng)等，間葉組織腫瘤往往由多向分化的原始間葉細(xì)胞產(chǎn)生，存在共性，標(biāo)記抗體特異性不足，有交叉反應(yīng)。

1．波紋蛋白（Vimentin，Vim）：是一種細(xì)胞中間絲蛋白抗體，在多數(shù)軟組織腫瘤均可表達(dá)，但纖維細(xì)胞較明顯，在一些上皮性腫瘤也有陽(yáng)性反應(yīng)。常用作間葉源與上皮源腫瘤的第一線鑒別抗體2．結(jié)蛋白（Desmin，Des）：平滑肌、橫紋肌均可陽(yáng)性。3．肌動(dòng)蛋白（Actin）：平滑肌、血管內(nèi)皮、肌上皮細(xì)胞標(biāo)記，HHF35特異。4．肌球蛋白（Myotlobin），肌紅蛋白（myosin）：對(duì)橫紋肌標(biāo)記較好。

5．第因子Ⅷ，CD34：對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞腫瘤標(biāo)記較特異。6．S-100蛋白：是一種周圍神經(jīng)雪旺氏細(xì)胞特異標(biāo)記抗體，后發(fā)現(xiàn)對(duì)脂細(xì)胞、朗格罕氏細(xì)胞、肌上皮細(xì)胞、黑色素細(xì)胞及其腫瘤均可陽(yáng)性。

7．酸性或堿性磷酸酶：對(duì)骨與軟骨腫瘤標(biāo)記好。（三）雙向分化腫瘤標(biāo)記即有上皮與間葉兩種細(xì)胞分化的腫瘤的標(biāo)記，如滑膜肉瘤、間皮肉瘤、腦膜瘤、癌肉瘤、上皮樣肉瘤等，一般采用CK、EMA標(biāo)記上皮，Vim等標(biāo)記間葉細(xì)胞。另外有一種惡性纖維組織細(xì)胞瘤，由纖維細(xì)胞、肌纖維母細(xì)胞和組織細(xì)胞混合組成的惡性腫瘤，故應(yīng)用Vim和組織細(xì)胞標(biāo)記來(lái)診斷。（四）神經(jīng)細(xì)胞、膠質(zhì)細(xì)胞及神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤標(biāo)記1．神經(jīng)原特異性烯醇化酶（NeuronSpecificEnolase，NSE）：神經(jīng)原腫瘤標(biāo)記。2．膠質(zhì)纖維酸性蛋白（GlialFibrillalyAcidicprotein，GFAP）：腦膠質(zhì)細(xì)胞特異性標(biāo)記抗體。CD34+F8血管3．神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤標(biāo)記：包括類癌、胰島、垂體瘤、甲狀腺髓樣癌、皮膚Merkel細(xì)胞癌、原始神經(jīng)外胚層瘤（PNET）等，目前應(yīng)用NSE、嗜鉻蛋白顆粒A（CgA）及觸突素（Syn）三種抗體同時(shí)或兩種一起用，因NSE不夠特異。（五）淋巴網(wǎng)狀組織腫瘤（淋巴瘤）標(biāo)記1．B細(xì)胞標(biāo)記抗體：CD20（L26），Ig重鏈（IgG、M、A、E）、輕鏈（λ、κ）、CD79a。2．T細(xì)胞標(biāo)記抗體：CD45RO（UCHL-1），CD3較好。CD563．組織細(xì)胞標(biāo)記抗體：Mac387、CD14、抗溶菌酶（lysozyme）、抗糜蛋白酶（α-1Antichymotrypsin）等。4．霍奇金淋巴瘤（Hodgkin’slymphoma，HL）R-S細(xì)胞（Reed-Sternbergcell）標(biāo)記抗體：CD15、CD305．白細(xì)胞共同抗原（leucocytecommonAntigen，LCA）：它對(duì)淋巴網(wǎng)狀細(xì)胞均為膜陽(yáng)性，作第一線抗體為好。注：（1）國(guó)際上將百余種標(biāo)記抗體統(tǒng)稱為CD（ClusterDesignation）系列。（2）淋巴細(xì)胞標(biāo)記與R-S細(xì)胞多數(shù)為膜陽(yáng)性，而Ig與組織細(xì)胞標(biāo)記為胞漿陽(yáng)性。（六）腫瘤細(xì)胞增殖活性與細(xì)胞凋亡標(biāo)記抗體瘤細(xì)胞增殖指數(shù)反應(yīng)細(xì)胞增殖活性，是瘤細(xì)胞新生（惡性）狀況的客觀指標(biāo)，與凋亡指數(shù)呈反比關(guān)系。常用抗體有：1．增殖細(xì)胞核抗原（proliferativeneuclearAntigen，PCNA），核陽(yáng)性。

2．Ki-67，Brdu抗體：原要求新鮮組織，新近有Ki-67石蠟切片標(biāo)記抗體問(wèn)世。曾做過(guò)Ki-67評(píng)估細(xì)胞增殖比例的研究作為在不同的惡性腫瘤的預(yù)后指標(biāo)，并且研究其與腫瘤級(jí)別和臨床過(guò)程相關(guān)性。3．細(xì)胞凋亡（Apoptosis）標(biāo)記抗體：開(kāi)始發(fā)現(xiàn)細(xì)胞凋亡發(fā)生于正常細(xì)胞受基因調(diào)控性自然性死亡。后發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞亦可發(fā)生，而且某些藥物放、化療亦可誘發(fā)細(xì)胞凋亡，故成了研究腫瘤發(fā)生、發(fā)展、治療的熱點(diǎn)。其標(biāo)記抗體有：（1）凋亡抑制基因蛋白抗體：Bcl-2、Bcl-XL、mtp53。（2）促凋亡基因蛋白抗體：Fas/FasL系統(tǒng)，wtp53、Bax、Bcl-xs、Fas等。Tunel標(biāo)記。肺癌免疫組化肺鱗癌大多數(shù)鱗狀細(xì)胞癌表達(dá)高分子量角蛋白34βE12，CK5/6和CEA，一些表達(dá)低分子量角蛋白34βE11，極少數(shù)表達(dá)TTF-1或CK7P63主要在基底細(xì)胞癌、鱗狀細(xì)胞和移行細(xì)胞癌表達(dá)，包括在乳腺和前列腺發(fā)生的。不同部位的低分化癌識(shí)別鱗狀細(xì)胞分化，尤其時(shí)同時(shí)表達(dá)CK5/6。p63和CK5/6共同表達(dá)對(duì)于鱗狀細(xì)胞癌敏感性0.77特異性為0.96。尤其是鑒別肺小細(xì)胞癌與低分化鱗狀細(xì)胞癌。肺腺癌TTF-1:甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子-1，TTF-1表達(dá)于甲狀腺腺上皮和肺的上皮細(xì)胞中。75%的肺非小細(xì)胞癌（NSCLCs)陽(yáng)性表達(dá)，腺癌(ACs)明顯高于鱗癌(SCC)，90%以上的原發(fā)性小細(xì)胞肺癌(SCLC)表達(dá)陽(yáng)性，而肺鱗癌及絕大多數(shù)典型類癌TTF-1陰性。TTF-1可用來(lái)鑒別肺腺癌與鱗癌，并有助于與肺轉(zhuǎn)移性腺癌的鑒別。NapsinA表達(dá)于80%肺腺癌，，與TTF-1聯(lián)合應(yīng)用于肺腺癌鑒別肺腺癌與胃腸道腫瘤鑒別肺腺癌CK7（+），CK20（-）胃腸道腫瘤CK20（+），CK7（-）CK20，用于胃腸道腺癌、卵巢黏液性腫瘤、皮膚Merkel細(xì)胞癌診斷。鱗癌、乳腺癌、肺癌、子宮內(nèi)膜和卵巢非黏液性腫瘤常陰性。

CK7卵巢、肺和乳腺上皮常陽(yáng)性，結(jié)腸、前列腺、胃腸道上皮陰性。CDX-2是胃腸道轉(zhuǎn)移癌的一個(gè)標(biāo)記肺腺癌與胸膜間皮瘤的鑒別CEA、B72.3、Ber-EP4、MOC31、CD15及TTF-1在胸膜間皮瘤（-），而腺癌染色（+），WT-1、鈣結(jié)合素、D2-40、HMBE-1、CK5/6在間皮瘤（+）而肺癌（-）一般需要4個(gè)markers，包括2個(gè)在腺癌陽(yáng)性2個(gè)在間皮瘤陽(yáng)性的一組免疫組化結(jié)果。轉(zhuǎn)移