2023體外診斷醫(yī)療器械 核酸多重分子檢測 第1部分：核酸質(zhì)量評價術(shù)語和通用要求

1II目 次前 言 II引 言 III范圍 1規(guī)范性引用文件 1術(shù)語和定義 1總則 7通則 8分析前的考慮因素 8標本質(zhì)量的考慮因素 8核酸質(zhì)量的考慮因素 8多重分子檢測核酸質(zhì)量與評價 9多重分子檢測的核酸質(zhì)量評價 9核酸量的評價 9核酸的制備程序 105.1通則 105.2樣品準備 105.2.1通則 10組織樣本制備的考慮因素 10核酸的提取和純化 11質(zhì)量評價方法 11附 錄 A（資料性）評價RNA完整性 13附 錄 B（資料性）評價DNA的完整性 14附 錄 C（資料性）利用PCR評價來源于FFPE樣品的可擴增DNA 15附 錄 D（資料性）MicroRNA樣品 17參 考 文 獻 18PAGEPAGE10體外診斷醫(yī)療器械-多重核酸分子檢測第1部分：核酸質(zhì)量評價術(shù)語和通用要求范圍同時識別兩個或更多核酸靶序列的檢測手段。本文件適用于所有的多重分子檢測方法，用于體外診斷（IVD）醫(yī)療器械和實驗室自建檢測（LDTs）的檢驗，并提供核酸靶序列定性和定量檢測的信息。本文件目的為指導多重分子試驗中檢測和/或定性人體臨床標本中人類核酸或者微生物病原體核酸注：實驗室內(nèi)部使用的檢驗方法稱為“實驗室自建方法”，“LDT”，或者稱為“in-housetest”。規(guī)范性引用文件（包括所有的修改單適用于本文件。GB/T22576.1-2018醫(yī)學實驗室——質(zhì)量和能力的要求第一部分：通用要求。術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。ISO和IEC維護用于標準化的術(shù)語數(shù)據(jù)庫，地址如下：——SOp/ww.s.or/bp——IEC電子百科：http://electropedia./org3.1準確度accuracy測量結(jié)果與真值之間的一致程度。注1：術(shù)語“準確度”，當用于一組測試或測量結(jié)果時，由隨機誤差分量和系統(tǒng)誤差分量即偏倚分量組成（ISO3534-2：2006，3.3.1）。[SOIC指導原則9207,,13“注釋1”“注釋2”“注釋”加了新的“注釋1”]3.2算法algorithm可用于生成合理解釋或可報告結(jié)果的檢測數(shù)據(jù)的一組規(guī)則或計算方法。3.3等位基因allele<遺傳學>控制遺傳變異的一個基因的不同形式。一個可以被替代的多態(tài)性DNADNA占據(jù)一個確定的一個基因位點，可以被替代的基因形式之一。3.4等位基因比例allelicratio特定等位基因（3.3）占總等位基因數(shù)量（3.3）的百分比，通常用分數(shù)表示。（3.3）數(shù)量的40%，那么等位基因比例為注2：等位基因比例等同于等位基因頻率。3.5分析物analyte以可測量含量名稱表示的組分。[來源：ISO17511:2020,3.1,有修改]3.6化學純度chemicalpurity表示影響多重分析的化學物質(zhì)的污染程度。注1：PCR的核酸純度是經(jīng)過提取步驟去除了有干擾作用的有機物質(zhì)和蛋白質(zhì)組分，以及核酸的污染。3.7DNA微陣列DNAmicroarrayDNA芯片DNAchip以高密度方式直接或間接集合的DNA探針陣列，可用于高通量篩選大規(guī)模生物物質(zhì)的固態(tài)基質(zhì)。[來源：ISO16578:2013,3.3]3.8文件化程序documentedprocedure執(zhí)行特定的活動或者是文件制定、操作和維護實驗室間比對的過程（3.13）3.9評價方法evaluationmethod用于核酸質(zhì)量評價的方法3.10有效期expirydate截止日期expirationdate在指定條件下，確保儲存物質(zhì)特征性能的時間范圍上限注1：IVD試劑（3.16）、校準品、質(zhì)控品和其他組分的有效期由制造商根據(jù)實驗確定的穩(wěn)定性（3.38）特性指定。[來源：ISO18113-1:2009,3.17,有修改]3.11外部測量標準品externalmeasurementstandard參考標準品referencestandard為測試多重分析方法的互換性而準備的材料或物質(zhì)，其特征值是在某個科學或工程組織資助下的協(xié)作實驗工作中得到的一致值。注1：通常針對多重分子分析。注2：標準物質(zhì)也可以作為外部測量的標準。[來源：ISO16578:2013,3.9,修訂——增加“注釋1”和“注釋2”]3.12預期用途intendeduse預期目的intendedpurpose體外診斷制造商在規(guī)格、使用說明和體外診斷制造商提供的信息中給出的關(guān)于產(chǎn)品、過程或服務使用的目標意圖。[來源：ISO18113-1:2009,3.31,修訂——刪除了“注釋1”和“注釋2”]5

實驗室間比對interlaboratorycomparison按照預先規(guī)定的條件，由兩個或多個實驗室對相同或類似的項目進行測量或檢測的組織、實施和評[SOIC703:01,.]體外診斷設備invitrodiagnosticinstrumentIVD設備IVDinstrument制造商用于體外診斷醫(yī)療器械的設備或儀器（3.15）[來源：ISO18113-1:2009,3.26,修訂——刪除了“注釋1”]體外診斷產(chǎn)品invitrodiagnosticproduct體外診斷醫(yī)療器械invitrodiagnosticmedicaldeviceIVD醫(yī)療器械IVDmedicaldevice（劑、儀器和系統(tǒng)。[來源：美國聯(lián)邦食品藥品和化妝品法案21CFR809.3]3.16體外診斷試劑invitrodiagnosticreagentIVD試劑IVDreagent被制造商預期用作體外診斷醫(yī)療器械的化學、生物學或免疫學組分、溶液或制備物（3.15）[來源：ISO18113-1:2009,3.28修訂——刪除“注釋1”]3.17實驗室自建檢測laboratorydevelopedtestsLDTs一個獨立實驗室內(nèi)部設計、制造和使用，以臨床應用為目的的體外診斷器械的形式。注1：也被稱為“in-housetest”。[來源：CLSIQSRLDT]3.18檢出限limitofdetectionLOD由給定的測量程序得到的測得量值，對于此值，在給定聲稱物質(zhì)中存在某成分的誤判概率為α時，聲稱不存在該成分的誤判概率為β。注1：IUPAC建議α和β的默認值等于0.05.注2：這適用于當測試評價是否存在多種分析物(3.5)而不是多變量分子檢測(3.26)時的LOD。注3：檢出限(LOD)可以被定義為：1）在給定的置信度內(nèi)，可以被可靠測序到，并能區(qū)別于不存在的最低核酸量；2)給定樣品中可檢測到的最小等位基因組分。3.19微陣列平臺的檢出限limitofdetectionformicroarrayplatform多重分子檢測的檢出限limitofdetectionformultiplexmoleculartestplatformLODP在5%置信區(qū)間范圍內(nèi)，可以通過實驗持續(xù)檢測到的外部測量標準品（311（或標準物質(zhì)）的（11（測定/估計注1：通常針對多重分子檢測；注2：LODP可作為一個替代多重分析檢出限（3.18）的性能指標。[來源：ISO16578:2013,3.1,修訂——增加“注釋1”和“注釋2”]3.20大規(guī)模平行測序massiveparallelsequencing通過并行處理大量分子實現(xiàn)高通量DNA測序的方法。注1：例如，包括但不限于可對數(shù)千至數(shù)百萬短讀長（≈50至400個堿基）進行測序的微型化和并行化的測序平臺，或基于聚合酶的可實現(xiàn)長讀長（平均長度≈10,000-15,000個堿基）的實時DNA測序平臺。3.21microRNA與轉(zhuǎn)錄后表達調(diào)控有關(guān)的17至25個核苷酸長度的單鏈RNA3.22多重序列分析物multiplesequencesofanalyte(s)同時測量一個樣品中的多個核酸序列的成分。注1：這包括提取的核酸和基于核酸擴增試驗的擴增前和/或擴增后的核酸。3.23多重分子檢測multiplexmoleculartest可以在單次分析中同時評價序列特征和/或多個（≥2個）核酸靶標數(shù)量的體外診斷檢測，例如基于多重PCR(3.24)、多重雜交檢測、微陣列和基于大規(guī)模平行測序(3.19)的方法。注1：“多重”被定義為“通過統(tǒng)一的樣品制備、目標或信號擴增、等位基因（3.3）區(qū)分和信息采集同時實現(xiàn)兩個或更多目標的檢測。注2：靶標是指除了內(nèi)參以外的檢測目標。3.24多重分子核酸檢測級別的核酸multiplexmoleculartestqualitynucleicacid(363403.25多重PCR multiplexPCR在一個反應體系中應用多對引物同時產(chǎn)生多個擴增子的PCR技術(shù)。[來源：ISO16577：2016，3.117]3.26多變量分子檢測multivariablemoleculartest使用解釋函數(shù)將多個變量的值組合在一起的分子檢測，它能夠產(chǎn)生一個獨立的、患者特異的結(jié)果，包括“分類”，“評分”和/或“指數(shù)”。注1：這類檢測通?；诙嘀胤肿訖z測平臺。注2：旨在用于疾病或其他狀況的診斷，或用于治愈、緩解、治療或預防疾病。注3：統(tǒng)計詞語“多變量”表示對多個結(jié)果進行評價，而不是使用多個變量評價一個結(jié)果。3.27病原體pathogen引起宿主疾病的致病性微生物。注1：病原體包括某些病毒、類病毒、朊病毒、細菌、真菌或寄生蟲。[來源：ISO15714:2019,3.1.2,修訂]3.28PCR級別的DNAPCRqualityDNA具有足夠長度、數(shù)量、化學純度(3.6)和結(jié)構(gòu)完整性(3.40)的，用于PCR反應的DNA模板。[來源：ISO24276::2006,3.2.3,修訂——增加了“數(shù)量”]3.29分析前階段preanalyticalphase檢驗前過程pre-examinationprocesses按時間順序自臨床醫(yī)生申請至分析檢驗啟動的過程，包括檢查申請、患者準備和識別、原始樣品采集、以及在實驗室內(nèi)外的運送、分析物分離。[來源：ISO15189:2012，3.15，修訂——增加了“分析物分離”]3.30原始樣品primarysample標本specimen一種體液或組織的分離部分，用于檢查，研究或分析一種或多種假定適用于整個人體的數(shù)量或特性。注1：全球協(xié)調(diào)工作組(GHTF)在其協(xié)調(diào)指導文件中用“specimen”表示醫(yī)學實驗室檢驗用生物源樣品。注2：在某些國際標準化組織(ISO)和歐洲標準化委員會(CEN)文件中,“標本”定義為“來自人體的生物樣品”。注3：在某些國家,用“標本”代替原始樣品(或其分樣品),指準備送至實驗室或?qū)嶒炇沂盏降墓z驗用的樣品。[來源：ISO15189:2012,3.16]3.31可靠的信號范圍rangeofreliablesignal提供的與外部測量標準品（.10（或標準物質(zhì)）的濃度和/或拷貝數(shù)成比例的結(jié)果的能力（在給定范圍內(nèi)）注1：主要用于定量檢測，但不用于定性測試。注2：也可用于線性范圍或分析可測量范圍。[來源：ISO16578:2013,3.2,修訂——增加了“注釋1”和“注釋2”]3.32可報告范圍reportablerange實驗室檢測覆蓋的基因組中可接受質(zhì)量序列的區(qū)域。示例1：可報告范圍也被定義為“儀器、試劑盒或系統(tǒng)的測量結(jié)果的有效測試值范圍”（USCFR493）。3.33參考區(qū)間referencerange檢測試劑盒可檢測到并可報告的正常人群中的序列變異注1：參考區(qū)間也被定義為基于健康狀況人體的一組涵蓋實驗室檢測上限和下限的值。3.34RT逆轉(zhuǎn)錄reversetranscription逆轉(zhuǎn)錄酶與RT引物、脫氧核糖核苷三磷酸結(jié)合，從RNA模板合成DNA的過程。[來源：ISO22174:2005,3.3.1]3.35逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應RT-PCR由兩個反應組成的方法：從RNA到DNA的逆轉(zhuǎn)錄（3.32）并進行PCR的過程。[來源：ISO22174:2005,3.4.2]3.36RT-PCRRNART-PCRqualityRNA具有足夠長度，數(shù)量，化學純度和結(jié)構(gòu)完整性的RNA模板，適用于逆轉(zhuǎn)錄（3.32）和PCR反應。[來源：ISO22174:2005,3.4.2，修訂]3.37樣品sample從原始樣品中取出一個或多個部分[來源：ISO15189:2012,3.24，修訂——該示例已被刪除]3.38穩(wěn)定性stability體外診斷醫(yī)療器械（3.15）在制造商規(guī)定限度內(nèi)保持其性能特性的能力注1：穩(wěn)定性適用于：當體外診斷試劑（16、校準物或質(zhì)控物在制造商規(guī)定的條件下儲存、運送和使用時——按照制造商使用說明制備、使用和貯存的復溶后凍干材料，工作溶液和從密封容器中取出的材料。注2：體外診斷試劑（3.16）或測量系統(tǒng)的穩(wěn)定性通常用時間量化：——計量性質(zhì)按規(guī)定量變化的時間間隔；——一定的時間間隔內(nèi)特征的變化。[來源：ISO18113-1:2009,3.68，修訂——在校準后的測量儀器或測量系統(tǒng)，注釋1和注釋3已被刪除]3.39標本穩(wěn)定性specimenstability長期儲存過程中，樣品的抗質(zhì)變能力。[來源：ISO23833:2013,5.5.10，修訂]3.40結(jié)構(gòu)完整性structuralintegrity反映核酸原始狀態(tài)的保留程度。3.41確認validation通過提供客觀證據(jù)對特定預期用途（3.12）或應用要求已得到滿足的認定注1：“已確認”一詞用于表明相應的狀態(tài)[來源：ISO9000:2015,3.8.13，修訂——注釋1和注釋3已被刪除]3.42驗證verification通過提供客觀證據(jù)，對規(guī)定要求已得到滿足的認定示例1：單詞“已驗證”用于指定相應的狀態(tài)。示例2：確認可以包括以下活動：——執(zhí)行替代計算——將新的設計規(guī)范與類似的經(jīng)過驗證的設計規(guī)范進行比較——進行測試和演示，以及——簽發(fā)前審查文件[來源：ISO9000:2015，3.8.12，修訂——注釋1和注釋2已被改寫]總則通則分析前的考慮因素ISO15189：2012中5.4.7和ISO/TS20658[3]ISO15189：2012，5.3。另外，ISO15189：2012、和也可能適用。分析前階段通常由以下工作流程組成：——樣品的采集、貯存和運送；——樣品的預處理；——核酸的提取和純化。（DNA、RNA），由此造成的分析前變異可嚴重影響分析檢測結(jié)果。例如，福爾馬林固定前的熱缺血和冷缺血多重分子檢測是可同時測量兩個或多個目標核酸序列的IVD檢測試劑或醫(yī)療器械。多重分子檢測宜使用高質(zhì)量的樣品進行，以確保符合檢測目的。標本質(zhì)量的考慮因素（如果需要以確保核酸質(zhì)量適合要檢測的所有分析物或靶標。多重核酸分子檢測用的靶標盤包括高水平和低水平的靶標。核酸質(zhì)量的考慮因素注：CLSIMM17-A指南提供了多重檢測的驗證和確認的各個方面的建議[24]多重分子檢測核酸質(zhì)量與評價多重分子檢測的核酸質(zhì)量評價"PCR級別的DNA"在ISO22174、ISO16577和ISO20395中有描述。在ISO16577中，它被描述為具有足夠長度、質(zhì)量和結(jié)構(gòu)完整性的DNA模板，可以通過PCR擴增。"RT-PCR級別的RNA"也在ISO22174中有描述，為適用于逆轉(zhuǎn)錄和PCR的具有足夠長度和數(shù)量的RNA模板。但是，這些不適用于基于PCR、RT-PCR、微陣列和大規(guī)模平行測序中多重分子檢測的測量方法?？紤]到多重分子檢測是一種能夠同時檢測多個核酸序列甚至是長度較短的核酸的分子生物學技術(shù)，應開發(fā)適用于每個測量系統(tǒng)的多重分子檢測的優(yōu)質(zhì)核酸的評價方法應被開發(fā)?；騌NA）。用戶應根據(jù)后續(xù)使用的多重分子檢測選擇最合適的方法。/或熒光法和/或凝（（即加入已知精確定量的目標分析物的樣品）示例1：RNA的質(zhì)量可以通過電泳圖評價，方法是含有總RNA的樣品的28S:18S核糖體RNA的比率，RNA完整性數(shù)值（RIN值），或RNA完整性得分（RIS）[31][32]盡管基于核糖體RNA的質(zhì)量指標常用于RNA質(zhì)量分析，但并不常用于評價信使RNA的質(zhì)量[33]。示例2：A260/A280和A260/A230的比值可以用來評價RNA的純度。PCR對于某些多重分子檢測，確保核酸樣品質(zhì)量的關(guān)鍵方面是確定目標核酸是否存在目標核酸。例如，對特定來源組織或生物體的低豐度核酸靶標的多重分析宜確保樣品包含來自該組織/生物體的核酸。該注：為了提高對存活病原體的檢測，可以同時測量核糖體RNA或信使RNA。另一種方法，可以考慮用DNA嵌入劑處理細菌，該嵌入劑可穿透滅活細胞并抑制PCR擴增，而不能穿透活細胞。示例：對于多重連接依賴探針擴增（MLPA），兩個變性片段（D-片段）被用來用于指示由于DNA樣品中的鹽類污染物導致的不良DNA變性。核酸量的評價根據(jù)多重分子檢測的目的應該選擇合適的方法來評價核酸量。（核酸的制備程序通則所采用的核酸提取方法應適合于獲得后續(xù)分析所需的核酸的質(zhì)量和數(shù)量。樣品準備1：足夠數(shù)量人體細胞的黏液標本。標本量不足會導致假陰性結(jié)果。為了驗證潛在非最優(yōu)樣品導致的陰性結(jié)果，可同時檢測人基因組序列作為內(nèi)部對照。2：目標分子的相對減少，從而導致靶序列的低估或假陰性結(jié)果。3：L-半胱氨酸和半堿性蛋白中使此現(xiàn)象降至最小化。cut-off值的定量檢測方法，對影響進行評價。1在血液感染細菌病原體多重檢測中，血液采集過程中可能發(fā)生正常人體皮膚菌群（如凝固酶陰性葡萄球菌2性，如戈登分支桿菌、龜分支桿菌或猿分支桿菌。這種情況可以通過使用無菌收集設備如支氣管鏡減少。組織樣本制備的考慮因素對于FFPE標本，福爾馬林固定處理會造成核酸的片段化和化學修飾。因此，福爾馬林固定處理最好使用合適的固定劑，如標準福爾馬林緩沖溶液，在低溫下盡可能短時間內(nèi)完成[2][6][30]。注1：各種樣品類型（例如FFPE，冷凍組織和血液）的檢測前工作流程在ISO20166，ISO20184和ISO20186系列中有描述[6][7][8]；注2：中性緩沖福爾馬林（NBF）通常用于固定過程；注3：從較舊的福爾馬林固定石蠟包埋塊（例如大于3年）中獲得的DNA通常顯示胞嘧啶脫氨基變成尿嘧啶，這可能導致DNA序列C：G到T：A的轉(zhuǎn)變。用尿嘧啶-N-糖基化酶處理能消除這類樣品中含有尿嘧啶的DNA分子。另外，可通過評價大規(guī)模平行測序分析中測序數(shù)據(jù)的轉(zhuǎn)換和顛換的比例來檢測是否存在顯著的脫氨基現(xiàn)象。注：大規(guī)模平行測序分析的目標區(qū)域內(nèi)包含多態(tài)性基因組區(qū)域（如用于法醫(yī)分析的區(qū)域）可用于評價正在測序的樣品中是否存在一個以上的患者基因組。核酸的提取和純化在選擇核酸提取或純化方法時，應考慮標本類型和基質(zhì)對將提取或純化的核酸在每個多重檢測中的影響。在使用某些高靈敏度的多重方法進行檢測時，來自試劑、純化柱和塑料器皿的核酸潛在污染可能導致/樣品的操作規(guī)程，并進行記錄和遵循，從而最大程度地減少交叉污染的影響。注：部分試管材料會結(jié)合核酸。聚乙烯醇-聚丙烯材料制成的試管相較于標準的聚丙烯微量離心管，對DNA的吸附100ngDNA0.02%的聚乙烯醇山梨醇單月桂酸酯，可減少管壁對DNA的吸附[30]。注：當使用珠磨法破碎真菌細胞壁或組織進行提取時，過于激烈的提取可能導致核酸的斷裂。質(zhì)量評價方法60260）與280nm（A280）[31]A260/A280比值不能評價測序用的片段質(zhì)量。注：DNADNADNAA260/A280（例如2.00）不適合作為樣品純度指標來進行測序DNA的濃度和片段質(zhì)量料來特異性測量雙鏈DNA。A260/A280A260/A2801.60，表明該樣品中可能存在潛在的干擾化合物，如蛋白質(zhì)、酚、胍或其他試劑。在清除過量的引物/單鏈DNA等雜質(zhì)后，A260/A280比值也可用于確定PCR產(chǎn)物的純度。注：A260值也用于測量總核酸的產(chǎn)量。當A260值異常高時，提示可能會存在基因組的污染。例如，在從血漿中測量HIV病毒時，高的A260值可能是來自白細胞的基因組DNA污染的指標。直接評價DNA片段的斷裂狀態(tài)的方法包括電泳直接確認、評價已知長度DNA片段的PCR擴增（例如內(nèi)部對照基因β-球蛋白或維生素DPCR中的定量循環(huán)，也稱為循環(huán)閾值，Ct或交叉點，Cp）值評價擴增反應。測序的片段長度可以通過毛細管電泳尺寸分離進行預測或通過克隆及Sanger測序來預測。評價RNA斷裂的方法包括使用變性瓊脂糖凝膠電泳直接測量RNA的構(gòu)象。此外，可以通過核糖體NRNANA3-（APH）或β-actinRNA質(zhì)量評價，可以使用RIN值或RIS和/或由電泳得出的核糖體RNA的18S單位和28S單的比率。注1：RIN和基于核糖體RNA的質(zhì)量指標分析并不總是對信使RNA的自然降解提供有用的指標，尤其是對于FFPE樣品。對于來自FFPE的RNA，建議使用基于公式的石蠟包埋RNA（PERM）算法，該算法近似計算了從提取的RNA的電泳圖下的加權(quán)曲線區(qū)域分析。相比之下，PERM算法比RIN更好[34]。注2：RNA測序的目標是以量化精確度來確定樣品中的RNA含量。RNA測序是通過分離靶標的RNA分子（或選擇性去除不重要的分子），將其轉(zhuǎn)化為雙鏈cDNA，并在測序反應中使用而實現(xiàn)的。在核酸提取、擴增和檢測階段使用內(nèi)部質(zhì)控可以是核酸質(zhì)量評價的有用工具，估計抑制劑的影響，注：在PCR中，可以使用多重內(nèi)部擴增質(zhì)控，其中包含多個感興趣靶標的正向和反向引物結(jié)合區(qū)域。附錄 A（資料性）RNA通過毛細管電泳評價RNA完整性的方法包括RNA完整值RIN值和RNA完整性評分RIS值[2][31][32]RIN值是通過電泳獲得RNA片段分布大小圖譜來詳細評價RNA的完整性[2][35]。由此開發(fā)的一種軟件算法，可以比核糖體比率方法更好地評價RNArRNARNA附錄 B（資料性）評價DNA的完整性DNA完整值（DIN）算法的開發(fā)，目的在于提供一個評價DNA完整性的客觀標準的工具。DIN通過信號分布范圍來確定基因組DNA附錄 C（資料性）利用PCR評價來源于FFPE樣品的可擴增DNA從福爾馬林固定的組織中提取的DNA是片段化的，并且包含DNA突變，這是序列錯誤的來源。特別是，大量的片段化使PCR擴增的模板量顯著減少。第二個主要問題是FFPEDNA中出現(xiàn)錯誤的序列，而在原始樣品中這些突變是不存在的。福爾馬林固定的組織DNA常見的損傷形式是DNApH值降低，組織中DNA的斷裂程度逐漸加劇。因此，即使來自不同樣品的相同量的FFPEDNA，可用于擴增的模板量可能顯著不同，這取決于DNA的碎片損傷的程度。甲醛誘導的DNA交聯(lián)會降低雙鏈DNADNADNA的斷裂程度逐漸加劇[37]pHpH在FFPEDNA檢測到的序列突變中，C:G>T:A轉(zhuǎn)換是最常見的SNV變化類型。基于擴增的方法檢測拷貝數(shù)較低的F