溫脾湯顆粒劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

溫脾湯顆粒劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

溫脾湯是在《急千金要領(lǐng)》中保存的。它由大黃、當(dāng)歸、干姜、人參、附子、芒硝和甘草制成。溫脾湯功能溫補脾陽,攻下冷積,該方溫通、瀉下和補益兼?zhèn)?具有溫陽祛寒,攻下不傷正的特點,為瀉下劑類攻補兼施的代表方。溫脾湯顆粒是在湯劑的基礎(chǔ)上按照本方傳統(tǒng)制法制成,目前,溫脾湯更改劑型后質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)方面的文獻尚未報道。顆粒劑具有易于保存,方便服用等優(yōu)勢,市場前景良好。為了有效的控制藥品質(zhì)量,本實驗采用薄層色譜法對處方中大黃、當(dāng)歸、人參進行定性鑒別;大黃為本方的君藥,大黃素、大黃酚為其主要有效成分,故采用HPLC法,以大黃素、大黃酚作為控制本品質(zhì)量的定量指標(biāo),建立處方中二者的測定方法。此方法準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好,可用于溫脾湯顆粒劑的質(zhì)量控制。1藥品、試劑與儀器高效液相色譜儀Waterse2695/2489系列Empower工作站;XP-6百萬分之一電子分析天平(梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司);LA204十萬分之一分析天平(梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司);DZG-6050型真空干燥箱(上海森信實驗儀器有限公司);B-290型噴霧干燥儀(瑞士步琦公司);RE-5205型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠);HA221-40-11型超臨界萃取裝置(江蘇南通華安超臨界萃取有限公司);KQ-300VDB型雙頻數(shù)控超聲清洗儀(昆山市超聲儀器有限公司),10cm×10cm薄層硅膠G板(青島海洋化工廠)。大黃對照藥材:批號為110715-200212;當(dāng)歸對照藥材:批號為120927-201014;人參對照藥材:批號為120917-201110;甘草對照藥材:批號為120904-200511;大黃素:批號為110756-200110;大黃酚:批號為110796-201017,以上對照藥材與對照品均購于中國藥品生物制品檢定所。溫脾湯配方顆粒6批(批號:130101、130102、130103、130104、130105、130106)及缺大黃、人參、當(dāng)歸、甘草的陰性對照樣品均由康美藥業(yè)股份有限公司自制。HPLC用甲醇為色譜純,水為超純水,其他試劑均為分析純。2方法和結(jié)果2.1膜層析成像2.1.1鑒別環(huán)己烷—大黃鑒別取本品0.25g,研細,加甲醇5mL,超聲處理5min,濾過,濾液作為供試品溶液;同法制成缺大黃的陰性對照樣品溶液。另取大黃對照藥材0.2g,加甲醇5mL,超聲處理5min,取上清液作為對照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2010年版一部附錄VIB)試驗,吸取上述兩種溶液各5μL,分別點于同一硅膠G薄層板上,以環(huán)己烷—乙酸乙酯—甲酸(12∶3∶0.1)為展開劑,展開,取出,晾干,置紫外光燈(365nm)下檢視,供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同的橙黃色熒光斑點,用氨蒸氣熏后,斑點變?yōu)榧t色。缺大黃陰性對照樣品均無相應(yīng)的斑點。結(jié)果見圖1。2.1.2對照藥材試驗取本品1.2g,加三氯甲烷40mL,加熱回流1h,棄去三氯甲烷溶液,藥渣揮干溶劑,加水0.5mL攪拌濕潤,加水飽和的正丁醇10mL,超聲處理30min,吸取上清液加3倍量氨試液,搖勻,放置分層,取上層液蒸干,殘渣加甲醇1mL使溶解,作為人參的供試品溶液。同法制成缺人參的陰性對照樣品溶液。另取人參對照藥材各1g,按照供試品溶液的制備方法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2010年版一部附錄VIB)試驗,吸取上述四種溶液各5μL,分別點于同一硅膠G薄層板上,以三氯甲烷—乙酸乙酯—甲醇—水(15∶40∶22∶10)10℃以下放置的下層溶液為展開劑,展開,取出,晾干,噴以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加熱至斑點顯色清晰,置日光燈下檢視。供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應(yīng)位置上,顯相同顏色的紫色斑點。缺人參陰性對照樣品均無相應(yīng)的斑點。結(jié)果見圖2。2.1.3陰性對照樣品的檢測取本品5g,用15mL水捏容,加乙醚振搖萃取3次,每次20mL,水液備用,合并乙醚液,揮干,殘渣加乙酸乙酯1mL使溶解,作為供試品溶液。同法制成缺當(dāng)歸的陰性對照樣品溶液。另取當(dāng)歸對照藥材0.5g,加乙醚15mL,超聲處理5min,濾過,濾液揮干,殘渣加乙酸乙酯1mL使溶解,作為對照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2010年版一部附錄VIB)試驗,吸取上述兩種溶液各5μL,分別點于同一硅膠G薄層板上,以正己烷—乙酸乙酯(9∶1)為展開劑,展開,取出,晾干,置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的熒光主斑點。缺當(dāng)歸陰性對照樣品均無相應(yīng)的斑點。結(jié)果見圖3。2.2黃素和大黃酚的含量測定2.2.1流動相、檢測波長色譜柱為SunfireTMC18(4.6mm×250mm,5μm);流動相:甲醇—0.1%磷酸溶液(85∶15);檢測波長:254nm;柱溫:30℃;流量:1.0mL·min-1;理論板數(shù)按大黃素峰計算應(yīng)不低于2000。2.2.2大黃素溶液的制備取大黃素對照品、大黃酚對照品適量,精密稱定,分別加甲醇制成每1mL含大黃素10.48μg的溶液和每1mL含大黃酚20.13μg的溶液,即得。2.2.3超聲處理法取本品1g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入甲醇25mL,稱定重量,超聲處理10min,放冷,再稱定重量,用甲醇補足減失的重量,搖勻,濾過,取續(xù)濾液,即得。2.2.4陰性對照溶液的制備按處方配比,取除大黃外的其他藥味,按供試品溶液的制備項下方法制備,即得。2.2.5液進樣分析取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液進樣分析,結(jié)果見圖4。陰性對照溶液在與大黃素、大黃酚相應(yīng)保留時間處未見色譜峰,結(jié)果表明陰性樣品對檢測無干擾。2.2.6大黃素回歸方程結(jié)果精密吸取上述大黃素對照液和大黃酚對照液各1、2、4、6、10μL,按上述色譜條件測定峰面積,以各自峰面積積分值分別對大黃素和大黃酚對進樣量進行回歸處理得出大黃素的回歸方程為Y=3443.6×103X-6.4748×103,r=1.0000,結(jié)果表明大黃素進樣量在0.0105~0.1048μg與峰面積線性關(guān)系良好;大黃酚的回歸方程為Y=5301.4×103X-15.897×103,r=1.0000,結(jié)果表明大黃素進樣量在0.0201~0.2013μg與峰面積線性關(guān)系良好。2.2.7大黃素明目酚與天麻酚3.2.3%的量測精密吸取供試品(批號:130101)溶液,重復(fù)進樣6次,測定大黃素、大黃酚的面積,計算大黃素與大黃酚的RSD分別為2.73%、2.63%。2.2.816、18、24日精密吸取供試品(批號:130101)溶液,按上述色譜條件分別于第0、4、8、16、18、24小時吸取10μL測定。結(jié)果表明,供試品溶液中大黃素、大黃酚在24h內(nèi)峰面積值基本一致,計算得其RSD分別為0.47%、1.88%,表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。2.2.9大黃素、突出突出充填品溶液的測定取同一批次(批號:130101)樣品6份,分別制備供試品溶液,進樣測定,結(jié)果大黃素、大黃酚的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.0099、0.0059μg·g-1,RSD分別為1.42%、0.73%。2.2.1回收率的測定精密稱取(批號:130101)溫脾湯顆粒劑0.51g,共6份,精密加入含大黃素10.48mg·L-1,大黃酚20.13mg·L-1的對照品溶液5mL,再精密加入甲醇20mL,超聲處理10min,放冷,用甲醇補足減失的重量,濾過,取續(xù)濾液,進樣測量,計算回收率,見表1。2.2.11.樣品測定取3個批號的樣品,分別制備供試品溶液,按擬定含量測定方法操作,測定結(jié)果見表2。3樣品前處理條件考察本方為中藥復(fù)方制劑,采用薄層色譜鑒別法對主要藥味進行了鑒別,并進行了陰性對照試驗,結(jié)果此方法簡便且專屬性強,能夠有效控制本品的質(zhì)量。在當(dāng)歸鑒別中,樣品處理方法是先用一定量的水捏容,將樣品分散在水溶液中,再用揮發(fā)性極強的乙醚萃取,實現(xiàn)液—液萃取,使得鑒別成分能良好的分散在乙醚萃取液中。在溫脾湯顆粒的含量測定中,對供試品溶液制備條件考察,分別采取超