藥物分離試驗

東營職業(yè)學院實訓實習課程報告（學生用）課程名稱藥物分離技術二級學院生物與生態(tài)工程學班級生物班姓名李瞞麗學號201006080020

實訓實習報告要求實訓實習報告是實訓實習工作的全面總結，是教師考核學生實訓實習效果的一項重要依據(jù)，也是評定學生實訓實習的重要依據(jù)。實訓實習報告是學生總結實訓實習內容，使實訓實習獲得的感性認識上升為理性認識的過程。實訓實習報告要用規(guī)定的實訓實習報告紙書寫，要語言通順、分析合理、認真總結。每門實訓實習課程結束后，實訓實習報告交實訓實習指導教師，指導教師審核后交課程所開二級學院存檔。實訓實習報告包括如下內容：1.實訓實習內容、實訓實習場所、實訓實習日期；2.實訓實習目的和要求；3.實訓實習儀器、設備與材料；4.實訓實習的完成情況及效果；5.存在的問題及不足。實訓實習報告2012年11月26日第15、16周實訓實習內容藥物分離技術實訓實習場所生物化學實訓室7實102成績指導教師王玉剛實訓實習報告實訓實習內容、實訓實習場所、實訓實習日期實驗一、大黃中蒽醌類成分的提取分離和鑒定 用乙醚及酸溶液水浴加熱提取蒽醌類化合物用pH梯度萃取法分離蒽醌類化合物實驗二、漢防己生物堿的提取分離與鑒定2012年11月26號---2012年12月14號2.實訓實習目的和要求 1、掌握羥基蒽醌類化合物的鑒定方法2、熟悉蒽醌類成分的提取分離方法。3、掌握pH梯度萃取法的原理和操作技術1、掌握一般叔胺生物總堿的提取和純化方法。2．熟悉柱色譜法分離生物堿的操作技術。3．掌握生物堿的鑒定方法。實訓實習儀器、設備與材料儀器：天平、燒杯、玻棒、分液漏斗、布氏漏斗、量筒、圓底燒瓶、圓形冷凝管、pH試紙回流裝置、圓底燒瓶、分液漏斗、層析柱、漏斗、薄層板、乳缽、量筒、燒杯、試管等試劑：乙醚、20％硫酸、濃鹽酸、碳酸氫鈉、碳酸鈉、氫氧化鈉、石油醚、乙酸乙酯、甲酸漢防己、85%乙醇、1%鹽酸、氯仿、氨水、1%氫氧化鈉、無水硫酸鈉、氧化鋁、丙酮、環(huán)己烷、甲醇、改良碘化鉍鉀試劑、碘-碘化鉀試劑、碘化汞鉀試劑、硅鎢酸試劑等4.實訓實習的完成情況及效果；學習了羥基蒽醌類化合物的鑒定方法，掌握了蒽醌類成分的提取分離方法，掌握pH梯度萃取法的原理和操作技術，了解了大黃的藥用價值，1、瀉下作用，2、抗菌作用，3、降低血清尿素氫，改善腎功能，4、止血作用5、抗病毒、抗真菌等作用。

5.存在的問題及不足。

由于時間短，只能對這一種藥物進行提取、分離、鑒定進行實習，而其他藥物的提取需要更長的時間。實習存在間斷的連續(xù)性。實訓實習課程期末總結本次實習我學會了大黃中蒽醌類成分的提取分離和鑒定，簡單總結如下：一、操作要點1.提取、分離流程（如圖）2.總蒽醌苷元的提取大黃粗粉100g，加20％硫酸溶液300ml潤濕，再加氯仿500ml，回流提取2hr，稍冷后過濾，殘渣棄去，氯仿提取液于分液漏斗中，分出酸水層，得氯仿提取液。3.蒽醌苷元的分離和精制（1）蒽醌類成分的緩沖紙色譜試驗為了驗證分離所采用的萃取液是否合理，作如下緩沖紙色譜試驗：取層析濾紙3cm×12cm，距下端2cm處劃一起始線，向上每隔1.5cm劃一平行線，在各條帶上依pH由低至高順次涂布實際所用的各緩沖液及堿液，涂布完后，將濕濾紙夾在兩片干濾紙中吸至半干。取樣品總蒽醌苷元氯仿提取液點在起始線上，用氯仿上行展開，將結果繪制在下面圖中，并確定選擇的萃取劑是否合理。（2）分離與精制a.大黃酸的分離和精制將含有總蒽醌的氯仿液450ml于1000ml分液漏斗中，加pH8緩沖液150ml充分振搖，靜置至徹底分層，分出堿水層置250ml燒杯中，在攪拌下滴加20％鹽酸至pH3，待沉淀析出完全后，過濾，并用少量水洗沉淀物至洗出液呈中性，沉淀干燥后，樣品加冰醋酸10ml加熱溶解，趁熱過濾，濾液放置析晶，過濾，用少量冰醋酸淋洗結晶，得黃色針晶為大黃酸。b.大黃素的分離和精制pH8緩沖液萃取過的氯仿層，用pH9.9緩沖液300ml振搖萃取，靜置至徹底分層后，分出堿水層，在攪拌下用20％鹽酸酸化至pH3，析出棕黃色沉淀，抽濾，水洗沉淀物至洗出液呈中性，沉淀經干燥后，用15ml丙酮熱溶，趁熱過濾，濾液靜置，析出橙色針晶，過濾后，用少量丙酮淋洗結晶，得大黃素。c.蘆薈大黃素的分離與精制pH9.9萃取過的氯仿層再加5％碳酸鈉-5％氫氧化鈉（9:1）堿水液540ml萃取，堿水層加鹽酸酸化，析出的沉淀水洗，干燥，用10ml乙酸乙酯精制，得黃色針晶的蘆薈大黃素。d.大黃酚和大黃素甲醚的分離萃取除去蘆薈大黃素后余下的氯仿層，再用3％氫氧化鈉溶液500m1分二次萃取，至堿水層無色為止，合并堿水層，加鹽酸酸化至pH3，析出黃色沉淀，過濾，水洗至中性，干燥，為大黃酚和大黃素甲醚混合物，留作柱色譜分離的樣品。余下氯仿液水洗至中性，蒸餾回收氯仿。e.硅膠柱色譜法分離大黃酚、大黃素-6-甲醚裝柱：用石油醚－乙酸乙酯（9.8:0.2）浸泡200～300目硅膠約20g，攪拌均勻，盡量趕出氣泡。一次性倒入1.8cmX28cm的層析柱中，輕輕敲打使硅膠均勻下沉，至硅膠界面不再下降為止。上樣：將離大黃酚和大黃素-6-甲醚的混合物用乙醇加熱溶解，伴入少量硅膠，水浴60℃左右烘干，加到已裝好的硅膠柱頂端，最后在樣品帶上蓋上一層硅膠或棉花，以保護樣品界面不受干擾。洗脫：先用100ml石油醚－乙酸乙酯（9.8:0.2）洗脫，至第一條黃色色帶洗下來，再換用100ml石油醚－乙酸乙酯（9.5:0.5）洗脫下第二條色帶。4.鑒定(1)蒽醌類成分化學鑒定a.堿液試驗分別取各蒽醌結晶數(shù)毫克置于小試管中，加2％氫氧化鈉溶液lml，觀察顏色變化。凡有互成鄰位或對位羥基的蒽醌呈藍紫至藍色，其它羥基蒽醌呈紅色。b.醋酸鎂試驗分別取蒽醌結晶數(shù)毫克，置于小試管中，各加乙醇lml使溶解，滴加0.5％醋酸鎂乙醇溶液，觀察顏色變化。(2)色譜鑒識a.薄層板：硅膠G-CMC-Na板。b.點樣：提取的大黃酸、大黃素、蘆薈大黃素、大黃酚、大黃素甲醚的氯仿溶液及各對照品氯仿溶液。c.展開劑：石油醚－乙酸乙酯－甲酸（15:5:1）上層溶液。d.展開方式：上行展開。e.顯色：在可見光下觀察，記錄黃色斑點出現(xiàn)的位置，然后用濃氨水熏或噴5%醋酸鎂甲醇溶液，斑點顯紅色。f.觀察記錄：記錄圖譜并計算Rf值。 實驗二：漢防己生物堿的提取分離與鑒定實驗內容與方法：一、總生物堿的提取取漢防己粉末100g，置于500ml圓底燒瓶中，加85%乙醇300ml，水浴加熱回流1小時，濾出乙醇提取液；藥渣重新加入85%乙醇200ml同法提取1次，合并兩次提取液，過濾，濃縮至無醇味，成糖漿狀，得到總生物堿。二、精制將上述糖漿狀提取液轉入燒杯中，加1%鹽酸調PH為2，邊加邊攪拌，靜置，過濾，得澄明濾液。濾液加等體積氯仿，再加氨水調PH為10以上，于分液漏斗中振搖萃取，靜置分層后放出氯仿層，堿液再用氯仿萃取兩次，合并氯仿液。氯仿液置于分液漏斗中，先以1%氫氧化鈉溶液洗2次，再用水洗2-3次后加入約5g無水硫酸鈉脫水，放置過夜，過濾，回收氯仿至少量，得漢防己總堿。三、漢防己甲素和漢防己乙素的分離1．裝柱取層析柱垂直固定在鐵架臺上，在管的下端墊入少量棉花，稱取中性氧化鋁100目20g，緩緩加入層析柱中，邊加邊輕輕振動色譜柱，使氧化鋁在柱中填實均勻。2．上樣取100mg漢防己總堿置于小蒸發(fā)皿中，用少量丙酮溶解，另加0.5g色譜用氧化鋁（作吸附劑），攪拌均勻，并于水浴上緩緩蒸去溶劑。然后將含有樣品的氧化鋁裝入色譜柱的上端，并蓋一圓形濾紙。3．洗脫將色譜柱活塞打開，以正己烷-丙酮（4∶1）洗脫，流速控制在5ml/min，收集各流分（10ml～15ml/份）。4．檢查將各流分回收溶劑，依次點于硅膠G-CMC-Na薄層板上，用氯仿—丙酮—甲醇（6∶1∶1）為展開劑，展開，噴以改良碘化鉍鉀試劑，比較各流分的Rf值，合并相同Rf值的流分。5．結晶將合并流分的溶液濃縮至適當體積，放置，析晶，滴加少量丙酮洗滌結晶，可得漢防己甲素、漢防己乙素結晶。四、檢識1．化學檢識取的氯仿液，用1%的鹽酸萃取，得鹽酸溶液10毫升，分為四個小試管儲存，分別在四個小試管中加入改良碘化鉍鉀、碘-碘化鉀、碘化汞鉀、硅鎢酸試劑，觀察各試管中的變化，記錄在如下表格中。改良碘化鉍鉀碘-碘化鉀碘化汞鉀硅鎢酸漢防己生物堿空白2．色譜檢識色譜材料：硅膠G-CMC-Na硬板點樣：漢防己總堿