藥品生產(chǎn)企業(yè)微生物實驗室質(zhì)量管理探析

微生物實驗室質(zhì)量管理是保障微生物檢驗結(jié)果準(zhǔn)確性的關(guān)鍵。隨著我國生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)的發(fā)展和技術(shù)進(jìn)步，藥品生產(chǎn)企業(yè)微生物實驗室不斷強(qiáng)化全過程質(zhì)量控制保障的理念，逐步從簡單的終產(chǎn)品檢驗向全過程風(fēng)險調(diào)查、風(fēng)險評估、風(fēng)險管理方向轉(zhuǎn)變。微生物實驗室人員管理、培養(yǎng)基和菌種管理、儀器設(shè)備管理、環(huán)境控制以及檢驗方法驗證是微生物實驗室實現(xiàn)全過程質(zhì)量控制的關(guān)鍵要素。藥品生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)正確處理微生物實驗室質(zhì)量管理與微生物檢測的關(guān)系，遵循全面研判、規(guī)范運行、持續(xù)改進(jìn)和過程控制原則，保障微生物實驗室質(zhì)量管理體系持續(xù)穩(wěn)定運行。??

藥品質(zhì)量事關(guān)人民身體健康和生命安全，而藥品的質(zhì)量控制不僅與其生產(chǎn)過程密切相關(guān)，也和實驗室質(zhì)量管理緊密相連。近年來，隨著我國生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)的發(fā)展和技術(shù)進(jìn)步，藥品微生物實驗室不斷強(qiáng)化全過程質(zhì)量控制保障的理念，逐步從簡單的終產(chǎn)品檢驗向風(fēng)險調(diào)查、風(fēng)險評估、風(fēng)險管理方向轉(zhuǎn)變［1］。實驗室對人員管理、培養(yǎng)基和菌種管理、儀器設(shè)備管理、環(huán)境控制以及檢驗方法驗證的質(zhì)量控制逐步規(guī)范化。一正確處理微生物實驗室質(zhì)量管理與微生物檢測的關(guān)系微生物檢測結(jié)果的真實可靠有賴于專業(yè)的檢測人員、良好的培養(yǎng)基和菌種、經(jīng)過確認(rèn)的儀器設(shè)備、有效的檢測方法以及符合要求的檢測環(huán)境，這些都是微生物實驗室質(zhì)量管理的關(guān)鍵要素［2］498。例如實驗室培養(yǎng)基管理不到位造成培養(yǎng)基變質(zhì)，使用該培養(yǎng)基進(jìn)行的藥品微生物檢測結(jié)果就可能出現(xiàn)假陰性;

潔凈實驗室環(huán)境溫濕度和壓差控制不合理，環(huán)境因素就會影響微生物檢測結(jié)果;

檢測人員培訓(xùn)教育不到位，也可能導(dǎo)致微生物檢測結(jié)果出現(xiàn)偏差。藥品微生物檢測需要綜合考慮檢測方法適用性、培養(yǎng)基和菌種有效性、檢測人員專業(yè)性以及檢測環(huán)境確認(rèn)等。因此，優(yōu)化微生物實驗室質(zhì)量管理體系是提高藥品微生物檢測結(jié)果準(zhǔn)確率的前提和基礎(chǔ)，藥品生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)正確處理好微生物實驗室質(zhì)量管理與微生物檢測的關(guān)系，做好人員、培養(yǎng)基、菌種、儀器設(shè)備、環(huán)境和檢測方法等關(guān)鍵要素的質(zhì)量控制，為檢測提供有效保障。

二微生物實驗室質(zhì)量管理原則微生物實驗室質(zhì)量管理體系持續(xù)穩(wěn)定運行，要遵循全面研判、規(guī)范運行、持續(xù)改進(jìn)和過程控制原則。全面研判是要對微生物檢測全過程的關(guān)鍵要素和風(fēng)險點進(jìn)行深入分析，找出關(guān)鍵步驟并合理規(guī)劃，建立全方位立體化的質(zhì)量管理體系;規(guī)范運行是實驗室應(yīng)構(gòu)建完整的質(zhì)量管理體系，建立質(zhì)量管理制度、儀器設(shè)備操作規(guī)程和人員崗位職責(zé)規(guī)范文件等，并貫穿到實際工作中，切實提高實驗室質(zhì)量管理水平;持續(xù)改進(jìn)是質(zhì)量管理體系運行過程中要通過實驗室自查、糾正和預(yù)防措施的實施，不合格與潛在不合格產(chǎn)生原因的分析、偏差處理、確認(rèn)與驗證等活動的開展，促進(jìn)質(zhì)量管理體系不斷改進(jìn);過程控制強(qiáng)調(diào)從實驗設(shè)計到結(jié)果報告要關(guān)注每一個步驟、每一臺設(shè)備和每一個人員的控制，而制度化的管理和標(biāo)準(zhǔn)化的檢測是過程控制的關(guān)鍵。三藥品生產(chǎn)企業(yè)微生物實驗室質(zhì)量管理要點(一)人員管理1．人員資質(zhì)評價微生物實驗室應(yīng)該有足夠的能勝任工作、具有相應(yīng)教育背景、經(jīng)過培訓(xùn)且掌握一定技術(shù)知識和工作經(jīng)驗的人員。實驗室應(yīng)根據(jù)企業(yè)實際需要設(shè)置管理崗位和技術(shù)崗位人員，并通過職責(zé)文件對崗位職責(zé)進(jìn)行清晰描述。實驗室管理人員應(yīng)確保所有從事檢驗、校準(zhǔn)、驗證及確認(rèn)的技術(shù)人員具備微生物學(xué)或相應(yīng)專業(yè)知識的教育背景、工作經(jīng)歷以及操作儀器設(shè)備或其他設(shè)施的能力。對于專業(yè)性和安全性要求較高的設(shè)備，如壓力滅菌器、隔離器、生物安全柜等設(shè)備，技術(shù)人員應(yīng)經(jīng)過專門的培訓(xùn)并獲得上崗證后方可使用和操作。2．人員培訓(xùn)考核微生物實驗室應(yīng)按照崗位職責(zé)制定崗前培訓(xùn)計劃和崗位培訓(xùn)計劃，培訓(xùn)內(nèi)容應(yīng)包括微生物基礎(chǔ)、消毒滅菌、生物安全等基本內(nèi)容，與微生物檢驗相關(guān)的技術(shù)知識、儀器設(shè)備操作知識以及校準(zhǔn)、驗證和確認(rèn)等。崗位培訓(xùn)還應(yīng)根據(jù)法規(guī)的調(diào)整和科技的發(fā)展進(jìn)行持續(xù)更新和拓展?？己嗽u價是評估技術(shù)人員能否勝任其崗位的重要手段。對于知識類的培訓(xùn)，可采用培訓(xùn)后測試法，考查參訓(xùn)人員的知識掌握度;對于技能類和操作類培訓(xùn)，可采用現(xiàn)場實際操作測試法［3］。所有培訓(xùn)考核資料應(yīng)歸檔保存。3．人員生物安全防護(hù)微生物實驗室應(yīng)采取一系列風(fēng)險防范措施以減少因意外接觸而造成的生物安全風(fēng)險。主要措施包括建立健全生物安全操作規(guī)程及管理制度，如生物安全柜使用操作規(guī)程、個人安全防護(hù)管理制度、廢棄物處理規(guī)程等;加強(qiáng)技術(shù)人員生物安全防范意識，自覺遵守生物安全操作流程;掌握生物安全設(shè)備使用方法、消毒滅菌方法以及陽性廢棄物處置方法等;實驗室還應(yīng)制定應(yīng)急預(yù)案，對于已經(jīng)造成的生物安全危害采取緊急措施，使傷害降到最低。如有必要，還可成立專門的生物安全管理小組，負(fù)責(zé)進(jìn)行生物安全風(fēng)險評估、生物安全知識培訓(xùn)、制度的制定和監(jiān)督執(zhí)行以及生物安全設(shè)備維護(hù)管理等工作［4］。(二)培養(yǎng)基管理培養(yǎng)基的制備和使用是微生物實驗室檢測工作的重要環(huán)節(jié)，培養(yǎng)基的質(zhì)量直接關(guān)系到微生物檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。近年來，商品化的脫水培養(yǎng)基、預(yù)制培養(yǎng)基發(fā)展迅速，加之生產(chǎn)企業(yè)微生物實驗室使用的培養(yǎng)基種類較常見，目前大多數(shù)實驗室不再使用自制培養(yǎng)基。因此，本文所指培養(yǎng)基均為商品化的脫水培養(yǎng)基、預(yù)制培養(yǎng)基。1．培養(yǎng)基采購驗收我國商品化培養(yǎng)基的生產(chǎn)起步較晚，生產(chǎn)規(guī)模不大，不同生產(chǎn)廠家的質(zhì)量差異較大。因此，培養(yǎng)基采購應(yīng)選擇產(chǎn)品市場信譽(yù)度高、有質(zhì)量保證能力和服務(wù)保證能力的企業(yè)，企業(yè)是否通過了ISO9001－2015國際質(zhì)量管理體系認(rèn)證是較為客觀的評價指標(biāo)。采購的培養(yǎng)基應(yīng)建立培養(yǎng)基檔案，包括采購計劃、到貨日期、到貨數(shù)量、廠家提供的質(zhì)檢報告及到貨驗收單等。驗收應(yīng)包含品名、批號、數(shù)量、生產(chǎn)廠家等基本信息確認(rèn)，密封性、標(biāo)簽說明書等外包裝檢查以及培養(yǎng)基顏色、狀態(tài)、有無結(jié)塊霉變等物理性狀檢查。培養(yǎng)基要經(jīng)驗收合格后，方可加貼信息標(biāo)簽，并交由專人保管和使用。對于已開瓶的干粉培養(yǎng)基，若短期內(nèi)未用完，應(yīng)做好儲存管理，避免因環(huán)境溫濕度影響造成結(jié)塊、變質(zhì)的情況，可在標(biāo)簽上注明開瓶有效期、儲存條件等。2．培養(yǎng)基配制滅菌培養(yǎng)基的配制應(yīng)按照標(biāo)簽說明書要求的方法操作，一般使用純化水或蒸餾水作為溶劑。大量配制的培養(yǎng)基應(yīng)進(jìn)行充分混勻溶解后再分裝，可通過水浴加熱或電熱輔助加熱的方式促進(jìn)溶解，但應(yīng)注意控制溫度和時間，不可過度加熱，以免對培養(yǎng)基質(zhì)量造成影響。為保證實驗所使用的培養(yǎng)基可追溯，應(yīng)建立培養(yǎng)基配制記錄，詳細(xì)記錄名稱、配制批號、干粉培養(yǎng)基批號、數(shù)量、配制方法、日期及操作人等信息，領(lǐng)用時也應(yīng)記錄領(lǐng)用日期、領(lǐng)用數(shù)量、領(lǐng)用人等信息。培養(yǎng)基的滅菌一般采用濕熱滅菌技術(shù)，滅菌程序應(yīng)經(jīng)過驗證。應(yīng)關(guān)注滅菌后培養(yǎng)基的pH值，若超出允許范圍，應(yīng)使用滅菌或除菌后的試液進(jìn)行調(diào)整。滅菌后的培養(yǎng)基若非現(xiàn)配現(xiàn)用，其儲存方式和儲存期限也應(yīng)經(jīng)過驗證［5］。3．培養(yǎng)基適用性檢查培養(yǎng)基應(yīng)進(jìn)行適用性檢查以保證其質(zhì)量符合微生物檢查要求。培養(yǎng)基適用性檢查依據(jù)培養(yǎng)基特性采取適宜的方法，通常無菌檢查用培養(yǎng)基進(jìn)行無菌性檢查和靈敏度檢查［2］157，微生物計數(shù)用培養(yǎng)基參比對照培養(yǎng)基進(jìn)行促生長試驗［2］162，控制菌檢查用培養(yǎng)基進(jìn)行促生長能力、抑制能力及指示特性的檢查［2］166。如果培養(yǎng)基配制、滅菌、儲存過程均受控且經(jīng)過驗證，同一批商品化培養(yǎng)基可只做一次適用性檢查。(三)菌種管理1．標(biāo)準(zhǔn)菌株來源標(biāo)準(zhǔn)菌株是微生物檢測必不可少的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，對微生物檢測過程控制和結(jié)果評價都有十分重要的作用。因此，標(biāo)準(zhǔn)菌株必須從有明確來源的權(quán)威機(jī)構(gòu)購買。目前，國內(nèi)微生物實驗室標(biāo)準(zhǔn)菌株主要來自中國醫(yī)學(xué)細(xì)菌保藏管理中心(CMCC)、中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心(CICC)、美國典型菌種保藏中心(ATCC)以及其他具有資質(zhì)的商業(yè)機(jī)構(gòu)［6］。2．菌種傳代及儲存從菌種保藏機(jī)構(gòu)購買的標(biāo)準(zhǔn)菌株一般為第0代，使用時應(yīng)先將標(biāo)準(zhǔn)菌株按要求進(jìn)行復(fù)活和復(fù)壯。經(jīng)復(fù)活和復(fù)壯后的菌株生長最活躍，特征最典型，可作為標(biāo)準(zhǔn)儲備菌株分裝后采用適宜的方法保存以備日常檢驗使用，低溫冷凍干燥有利于菌種的保存。由于標(biāo)準(zhǔn)菌株在運輸和儲存過程中的不確定因素影響，標(biāo)準(zhǔn)儲備菌株在使用前應(yīng)進(jìn)行純度和特性確認(rèn)。可通過平板劃線接種觀察菌落形態(tài)特征、革蘭氏染色鏡檢、特征生化反應(yīng)、檢測試劑盒等方法進(jìn)行確認(rèn)，有條件的企業(yè)也可通過微生物全自動鑒定儀進(jìn)行確認(rèn)［7］。另外，為避免過度傳代導(dǎo)致菌種退化和變異，菌種的傳代一般不超過5代。3．菌種日常管理菌種應(yīng)指定專人管理，保存場所應(yīng)采取一定的措施保證菌種安全。菌種從采購到銷毀全環(huán)節(jié)均要建立記錄，如菌種購買記錄、傳代記錄、領(lǐng)用記錄、鑒定確認(rèn)記錄、銷毀記錄等，保證微生物檢測所使用的菌種全程可追溯。標(biāo)準(zhǔn)儲備菌株和工作菌株應(yīng)進(jìn)行編號管理，編號應(yīng)能直觀反映菌種的名稱、傳代時間、代數(shù)以及傳代支數(shù)等信息。為避免菌種儲存過程中造成混淆，應(yīng)采用適宜的方法在菌種管上標(biāo)注詳細(xì)信息。使用過的菌種應(yīng)采用適宜的方式及時銷毀，避免對人員和環(huán)境造成危害。(四)儀器設(shè)備管理設(shè)備是實驗室的物質(zhì)基礎(chǔ)，是不可缺少的硬件，微生物實驗室應(yīng)該有必要的儀器設(shè)備和其他裝置，以便正確地開展微生物檢測實驗。儀器設(shè)備的購買應(yīng)選擇能夠提供完全技術(shù)支持和維護(hù)的供應(yīng)商，新購置的儀器設(shè)備應(yīng)按照操作要求的環(huán)境進(jìn)行組裝、調(diào)試、校準(zhǔn)、驗證、確認(rèn)并定期維護(hù)。為保證所有儀器設(shè)備受控管理，實驗室可建立設(shè)備管理臺賬，對設(shè)備名稱、型號、唯一性編號、安裝位置、技術(shù)狀況、校準(zhǔn)驗證時間等進(jìn)行記錄，并指定專人負(fù)責(zé)儀器設(shè)備管理。1．培養(yǎng)箱、冰箱使用管理培養(yǎng)箱主要用于菌種和微生物的培養(yǎng)，為菌種和微生物生長提供精確恒定的環(huán)境。冰箱用于菌種和培養(yǎng)基等的儲存，包含冷藏、冷凍、超低溫冰箱等。培養(yǎng)箱應(yīng)進(jìn)行安裝、運行和性能驗證，確認(rèn)箱內(nèi)溫度波動和溫度分布符合培養(yǎng)要求。如果某些特殊菌種和培養(yǎng)基的儲存對溫度有精確要求，冰箱性能也應(yīng)進(jìn)行驗證。冰箱、培養(yǎng)箱最主要的控制參數(shù)是溫度，因此在日常使用過程中，應(yīng)采用校準(zhǔn)合格的溫度監(jiān)測裝置記錄使用溫度。微生物實驗室應(yīng)配備備用的培養(yǎng)箱和冰箱，以保證微生物培養(yǎng)和菌種保存的連續(xù)性，同時應(yīng)定期進(jìn)行清潔消毒，避免造成污染和交叉污染。2．生物安全柜使用管理生物安全柜是微生物檢測實驗的主要設(shè)備，能有效保護(hù)操作者本人和實驗室環(huán)境，為實驗提供無菌無塵安全的環(huán)境。實驗室應(yīng)制定生物安全柜使用操作規(guī)程和維護(hù)保養(yǎng)規(guī)程，并指定專人負(fù)責(zé)管理。生物安全柜主要通過垂直風(fēng)幕、高效過濾器和柜體起保護(hù)作用，因此，生物安全柜除出廠檢測外，在安裝、移動及使用一定時間后須做風(fēng)速、高效過濾器完整性、柜體防漏等項目檢測［8］。微生物檢測實驗前后應(yīng)采用適宜的消毒劑對柜體進(jìn)行徹底消毒。另外，在生物安全柜內(nèi)應(yīng)盡量避免使用明火，因為開放的火焰會引起氣流紊亂，干擾柜內(nèi)潔凈氣流吹過操作臺面的供風(fēng)模式?？墒褂眯⌒碗娮訝t來進(jìn)行微生物接種環(huán)和接種針滅菌，也可使用一次性無菌接種環(huán)。3．壓力滅菌器使用管理壓力滅菌器因設(shè)計不同有多種類型，微生物實驗室常用重力下排型和預(yù)熱真空脈動型，滅菌原理都是利用高溫飽和水蒸汽在一定時間內(nèi)使微生物的蛋白質(zhì)變性導(dǎo)致微生物死亡的功效，達(dá)到對耐濕耐熱物品進(jìn)行滅菌的目的。高壓蒸汽滅菌具有滅菌速度快、穿透力強(qiáng)、滅菌效果可靠等優(yōu)點。由于壓力滅菌器的滅菌效果受蒸汽壓力、滅菌時間、加熱速度、滅菌物品包裝及擺放方式等因素影響較大，微生物實驗室應(yīng)定期對壓力滅菌器的安全附件、安全保護(hù)裝置、測量調(diào)控裝置及有關(guān)附屬儀器儀表進(jìn)行定期校驗、檢修，對滅菌器性能進(jìn)行驗證。另外，生物指示法可直接準(zhǔn)確地反映滅菌器的滅菌效果，實驗室可定期采用嗜熱脂肪芽孢桿菌生物指示劑檢查滅菌器的滅菌效果［9］。(五)微生物實驗室環(huán)境控制1．微生物實驗室設(shè)計與布局微生物實驗室的設(shè)計和布局應(yīng)綜合考慮微生物檢測、設(shè)施設(shè)備安裝、實驗室安全等因素，是一個復(fù)雜的協(xié)調(diào)與組合的過程。微生物實驗室整體設(shè)計與布局應(yīng)圍繞潔凈技術(shù)與實驗室檢測要求展開，對空間進(jìn)行合理限定、分割和定性，遵循平面布置合理、嚴(yán)格劃分區(qū)域、防止污染與交叉污染、方便試驗操作等原則。2．微生物實驗室清潔消毒微生物實驗室環(huán)境污染包括非生物污染和生物污染，其中非生物污染是指灰塵、污漬等污染，生物污染主要是沉降菌、浮游菌以及表面微生物等污染。實驗室應(yīng)采取一系列清潔消毒措施保證實驗室的潔凈度。人作為最大的污染源，進(jìn)出潔凈實驗室應(yīng)穿戴滅菌合格的潔凈服，佩戴一次性滅菌手套和口罩，并嚴(yán)格按照規(guī)定流程進(jìn)入。實驗物品應(yīng)通過消毒劑擦拭后在傳遞窗經(jīng)紫外線消毒燈消毒后進(jìn)入潔凈區(qū)，紫外線消毒燈的消毒效果應(yīng)經(jīng)過驗證并定期更換燈管。由于紫外線消毒燈在使用一段時間后，其消毒能力會逐漸下降，日常使用時，應(yīng)記錄紫外線消毒燈的累計使用時間，定期更換燈管以保證消毒效果。另外，潔凈實驗室在使用前后都要進(jìn)行清潔消毒，消毒劑的消毒效果應(yīng)經(jīng)過確認(rèn)并定期更換。3．微生物實驗室環(huán)境監(jiān)測應(yīng)定期對微生物實驗室的潔凈環(huán)境進(jìn)行監(jiān)測，以確保環(huán)境處于受控狀態(tài)，監(jiān)測項目包括空氣懸浮粒子、浮游菌、沉降菌、表面微生物等。實驗室可通過采集潔凈區(qū)中的環(huán)境微生物進(jìn)行鑒定分析，形成有利于質(zhì)量管理的環(huán)境微生物信息庫，從根本上降低污染風(fēng)險，避免環(huán)境菌株影響檢品的檢驗結(jié)果，以保障藥品檢驗的準(zhǔn)確性［10］。實驗室應(yīng)依據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)制定相應(yīng)的操作程序和監(jiān)測頻率。微生物實驗過程中也應(yīng)對檢測環(huán)境同步進(jìn)行動態(tài)的沉降菌監(jiān)測。值得關(guān)注的是，在進(jìn)行懸浮粒子、浮游菌、沉降菌、表面微生物監(jiān)測前，應(yīng)首先確定環(huán)境溫度、相對濕度、壓差、換氣次數(shù)等是否符合要求，因為只有確定上述指標(biāo)在規(guī)定范圍內(nèi)，才能保證懸浮粒子、浮游菌、沉降菌、表面微生物監(jiān)測結(jié)果準(zhǔn)確有效。(六)檢驗方法驗證與確認(rèn)方法學(xué)驗證是確認(rèn)所采用的方法是否適用于該藥品的微生物檢查，以保證實驗的可靠性、準(zhǔn)確性及檢驗結(jié)果的完整性。2005年版《中國藥典》首次明確提出所有用于藥品質(zhì)量控制的微生物檢驗方法，必須首先進(jìn)行方法驗證，以避免方法不合理而造成的漏檢、誤判。2005年10月《國藥典