基因工程試題內(nèi)容

基因工程試題一、選擇題（每題1分，共15分）1、下列有關(guān)基因的敘述，錯(cuò)誤的是【A】A蛋白質(zhì)是基因表達(dá)的唯一產(chǎn)物B基因是DNA鏈上具有編碼功能的片段C基因也可以是RNAD基因突變不一定導(dǎo)致其表達(dá)產(chǎn)物改變結(jié)構(gòu)2、基因工程的單元操作順序是【B】A增，轉(zhuǎn)，檢，切，接 B切，接，轉(zhuǎn)，增，檢C接，轉(zhuǎn)，增，檢，切 D切，接，增，轉(zhuǎn)，檢3、生物工程的上游技術(shù)是【A】A基因工程及分離工程B基因工程及發(fā)酵工程C基因工程及酶工程D基因工程及細(xì)胞工程4、下列各組專業(yè)術(shù)語中，含義最為接近的是【C】A終止子與終止密碼子B基因表達(dá)與基因轉(zhuǎn)譯CDNA退火與DNA復(fù)性D重組子與轉(zhuǎn)化子5、根據(jù)酶切活性對(duì)鹽濃度的要求，限制性核酸內(nèi)切酶可分成【B】A2大類B3大類C4大類D5大類6、T4-DNA連接酶是通過形成磷酸二酯鍵將兩段DNA片段連接在一起，其底物的關(guān)鍵基團(tuán)是【D】A2'-OH和5'–PB2'-OH和3'-PC3'-OH和2'–PD5'-OH和3'-P7、下列有關(guān)連接反應(yīng)的敘述，錯(cuò)誤的是【A】A連接反應(yīng)的最佳溫度為37℃B連接反應(yīng)緩沖體系的甘油濃度應(yīng)低于10%C連接反應(yīng)緩沖體系的ATP濃度不能高于1mMD連接酶通常應(yīng)過量2-5倍8、原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化方法不大適用于【A】A大腸桿菌B枯草桿菌C酵母菌D鏈霉菌9、下列各常用載體的裝載量排列順序，正確的是【A】ACosmid>λ-DNA>PlasmidBλ-DNA>Cosmid>PlasmidCPlasmid>λ-DNA>CosmidDCosmid>Plasmid>λ-DNA10、若某質(zhì)粒帶有l(wèi)acZ標(biāo)記基因，那么與之相匹配的篩選方法是在篩選培養(yǎng)基中加入【D】A半乳糖B異丙基巰基-β-半乳糖苷（IPTG）C蔗糖D5-溴-4-氯-3-吲哚基-β-D-半乳糖苷（X-gal）11、下列各組用于外源基因表達(dá)的受體細(xì)胞及其特點(diǎn)的對(duì)應(yīng)關(guān)系中，錯(cuò)誤的是【C】A大腸桿菌－繁殖迅速B枯草桿菌－分泌機(jī)制健全C鏈霉菌－遺傳穩(wěn)定D酵母菌－表達(dá)產(chǎn)物具有真核性12、分子雜交的化學(xué)原理是形成【D】A共價(jià)鍵B離子鍵C疏水鍵D氫鍵13、某一重組DNA（6.2kb）的載體部分有兩個(gè)SmaI酶切位點(diǎn)。用SmaI酶切后凝膠電泳上出現(xiàn)四條長(zhǎng)度不同的帶子，其長(zhǎng)度總和與已知數(shù)據(jù)吻合，該重組分子插入片段上的SmaI酶切位點(diǎn)共有【D】A4個(gè)B3個(gè)C2個(gè)D至少2個(gè)14、下列設(shè)計(jì)的探針中，最佳的是【D】AACATTAAATTATTBGGGCACACCTTGATAAGGTDCGGACTTGACCATC15、cDNA法獲得目的基因的優(yōu)點(diǎn)是【A】A成功率高B不含內(nèi)含子C操作簡(jiǎn)便D表達(dá)產(chǎn)物可以分泌二、名詞解釋（每題2分，共20分）1、Southernblotting:Southern印跡：Southern發(fā)明的一種影印轉(zhuǎn)移物質(zhì)的方法。2、Cosmidvector:黏粒載體：含有cos位點(diǎn)的質(zhì)粒載體。3、cDNAlibrary:cDNA文庫：是指某生物某一發(fā)育時(shí)期所轉(zhuǎn)錄形成的cDNA片段與某種載體連接而成的克隆的集合。4、RACE:是一種通過PCR進(jìn)行cDNA末端快速克隆的技術(shù)，是以mRNA為模板反轉(zhuǎn)錄成cDNA第一鏈后用PCR技術(shù)擴(kuò)增出某個(gè)特異位點(diǎn)到3，或5，端之間未知序列的方法。5、Probe:探針：指被標(biāo)記物質(zhì)標(biāo)記了的核酸。6、RT-PCR：逆轉(zhuǎn)錄PCR：先用逆轉(zhuǎn)錄酶作用于mRNA，以寡聚dT為引物合成cDNA第一鏈，然后用已知一對(duì)引物，擴(kuò)增嵌合分子，這種方法稱為逆轉(zhuǎn)錄PCR。7、Insertinactivation:插入失活，基因工程載體上的某些選擇標(biāo)記基因常常含某種或某幾種限制性內(nèi)切酶的單一酶切位點(diǎn)，在該位點(diǎn)用相應(yīng)的限制性內(nèi)切酶處理，并將外源DNA片段插入該位點(diǎn)，則插入的外源DNA片段將破壞原有基因的讀碼框，往往導(dǎo)致原有的選擇標(biāo)記基因無法翻譯表達(dá)，或即使翻譯表達(dá)，形成的也是喪失了原有生物活性的蛋白質(zhì)，這一現(xiàn)象稱為插入失活。。8、S-DSequence:S-D序列：在大腸桿菌mRNA的核糖體結(jié)合位點(diǎn)上，含有一個(gè)轉(zhuǎn)譯起始密碼子及同16S核糖體RNA3，末端堿基互補(bǔ)的序列，該序列最初由Shine、Dalgarno發(fā)現(xiàn)，故后來命名為Shine—Dalgarno序列，簡(jiǎn)稱S-D序列。9、Shuttleplasmidvector:穿梭質(zhì)粒載體：指一類由人工構(gòu)建的具有兩種不同復(fù)制起點(diǎn)的選擇標(biāo)記，因而可在兩種不同宿主細(xì)胞中存活和復(fù)制的質(zhì)粒載體。10、MCS:指載體上人工合成的含有緊密排列的多種限制核酸內(nèi)切酶的酶切位點(diǎn)的DNA片段。三、簡(jiǎn)答題（每題5分，共25分）1、理想質(zhì)粒載體的必備條件？答：⑴具有較小的分子質(zhì)量和較高的拷貝數(shù)。⑵具有若干限制性核酸內(nèi)切酶的單一酶切位點(diǎn)。⑶具有兩種以上的選擇標(biāo)記基因。⑷缺失mob基因。⑸插入外源基因的重組質(zhì)粒較易導(dǎo)入宿主細(xì)胞并自制和表達(dá)。2、核酸操作的基本技術(shù)有哪些？S-D序列：在大腸桿菌mRNA的核糖體結(jié)合位點(diǎn)上，含有一個(gè)轉(zhuǎn)譯起始密碼子及同16S核糖體RNA3，末端堿基互補(bǔ)的序列，該序列最初由Shine、Dalgarno發(fā)現(xiàn)，故后來命名為Shine—Dalgarno序列，簡(jiǎn)稱S-D序列。1、什么是包涵體？重組蛋白在胞內(nèi)表達(dá)時(shí)，常常以不溶性蛋白聚集成的晶狀物形式存在，這種晶狀體即包涵體。包涵體的形成是外源蛋白的高效表達(dá)時(shí)的普遍現(xiàn)象，這是由于肽鏈折疊過程中部分折疊的中間態(tài)發(fā)生了錯(cuò)誤聚合，而不是形成成熟的天然態(tài)或完全解鏈的蛋白。2、什么是α-互補(bǔ)篩選？質(zhì)粒載體具有β-半乳糖苷酶基因（lacZ），當(dāng)外源DNA插入到它的lacZ，可造成表達(dá)后的β-半乳糖苷酶失活，利用這一點(diǎn)就可以通過大腸桿菌轉(zhuǎn)化子菌落在添加有X-gal-IPTG培養(yǎng)基中的顏色變化鑒別出重組子和非重組子。有些大腸桿菌上帶有l(wèi)acZ基因的部分編碼序列，質(zhì)粒載體中含有別一部分編碼序列，當(dāng)質(zhì)粒轉(zhuǎn)入載體后，可形成具有酶活性的蛋白質(zhì)。這種lacZ基因上缺失了一部分編碼序列的突變體與帶有這一部分編碼序列的突變體之間實(shí)現(xiàn)互補(bǔ)的現(xiàn)象叫α互補(bǔ)。3、限制性核酸內(nèi)切酶的活性受哪些因素影響？⑴酶的純度。⑵DNA樣品的純度。⑶DNA的甲基化程度。⑷酶切反應(yīng)的溫度與時(shí)間。⑸DNA分子的構(gòu)型。⑹限制性核酸內(nèi)切酶的反應(yīng)緩沖液。5、基因工程誕生的理論基礎(chǔ)是什么？是現(xiàn)代分子生物學(xué)領(lǐng)域理論上的三大發(fā)現(xiàn)和技術(shù)上的三大發(fā)明。理論上的三大發(fā)現(xiàn)：①證實(shí)了DNA是遺傳物質(zhì)②揭示了DNA分子的雙螺旋結(jié)構(gòu)模型和半保留復(fù)制機(jī)理③遺傳密碼的破譯和遺傳信息傳遞方式的確定技術(shù)上的三大發(fā)明：①限制核酸內(nèi)切酶的發(fā)現(xiàn)與DNA切割②DNA連接酶的發(fā)現(xiàn)與DNA片段的連接③基因工程載體的研究與應(yīng)用四、問答題（每題10分，共40分）1如何有效地提高外源基因的表達(dá)效率？⑴提高啟動(dòng)子強(qiáng)度⑵縮短啟動(dòng)子同克隆基因間距離⑶高效的翻譯起始序列⑷高效的轉(zhuǎn)錄終止區(qū)⑸提高質(zhì)?？截悢?shù)及穩(wěn)定性⑹用以下方法提高翻譯水平：①調(diào)整SD序列與AUG間的距離②用點(diǎn)突變的方法改變某些堿基③增加mRNA的穩(wěn)定性的⑺減輕細(xì)胞的代謝負(fù)荷：①誘導(dǎo)表達(dá)②表達(dá)載體的誘導(dǎo)復(fù)制⑻提高表達(dá)蛋白的穩(wěn)定性，防止其降解：①克隆一段原核序列，表達(dá)融合蛋白②采用某種突變菌株③表達(dá)分泌蛋白質(zhì)2試述載體構(gòu)建一般方法A目的基因分析（1）ORF分析（2）酶切位點(diǎn)分析B載體選擇與分析（1）多克隆位點(diǎn)分析（2）抗性標(biāo)記分析（3）啟動(dòng)子與其他篩選標(biāo)記分析C連接體系與連接時(shí)間確定4大腸桿菌作為基因工程受體菌的優(yōu)缺點(diǎn)是什么？?jī)?yōu)點(diǎn)：大腸桿菌培養(yǎng)方便、操作簡(jiǎn)單、成本低廉，基礎(chǔ)生物學(xué)、分子遺傳學(xué)等方面的背景知識(shí)清楚，對(duì)其基因表達(dá)調(diào)控的分子機(jī)理也比較了解，而且歷經(jīng)二十年的基因工程實(shí)踐，大腸桿菌已發(fā)展成為一種安全的基因工程實(shí)驗(yàn)體系，有多種適用的寄主菌株和載體系列，大腸桿菌易于進(jìn)行工業(yè)化批量生產(chǎn)。缺點(diǎn)：在通常情況下，細(xì)菌的RNA聚合酶不能識(shí)別真核的啟動(dòng)子；許多真核基因的蛋白質(zhì)產(chǎn)物需要經(jīng)過翻譯后的加工修飾，如正確的折疊和組裝，而細(xì)菌中通常并沒有這樣的修飾機(jī)制，從而可能導(dǎo)致真核基因在大腸桿菌中的翻譯產(chǎn)物無法產(chǎn)生有活性的蛋白；外源真核基因所表達(dá)的蛋白質(zhì)分子往往能夠被細(xì)菌的蛋白酶識(shí)別，并被當(dāng)做“異已分子”降解掉。二、選擇題（每題1分，共15分）1(d)限制性核酸內(nèi)切酶是由細(xì)菌產(chǎn)生的，其生理意義是A修復(fù)自身的遺傳缺陷 B促進(jìn)自身的基因重組C強(qiáng)化自身的核酸代謝 D提高自身的防御能力2(a)生物工程的下游技術(shù)是A基因工程及分離工程 B蛋白質(zhì)工程及發(fā)酵工程C基因工程及蛋白質(zhì)工程 D分離工程 及蛋白質(zhì)工程3(a)基因工程操作常用的酶是:(I內(nèi)切酶II連接酶III末端轉(zhuǎn)移酶IV聚合酶A.I+IIB.I+III+IVC.II+III+IVD.I+II+IV+III4(d)限制性內(nèi)切核酸酶的星活性是指：A在非常規(guī)條件下，識(shí)別和切割序列也不發(fā)生變化的活性。B活性大大提高C切割速度大大加快D識(shí)別序列與原來的完全不同5(d)下列五個(gè)DNA片段中含有回文結(jié)構(gòu)的是A.GAAACTGCTTTGAC B.GAAACTGGAAACTGC.GAAACTGGTCAAAG D.GAAACTGCAGTTTC6(c)關(guān)于cDNA的不正確的提法是：A同mRNA互補(bǔ)的單鏈RNAB同mRNA互補(bǔ)的含有內(nèi)含子的DNAC以mRNA為模板合成的雙鏈RNAD以上都不正確7(a)下列有關(guān)連接反應(yīng)的敘述，錯(cuò)誤的是A.連接反應(yīng)的最佳溫度為37℃B.連接反應(yīng)緩沖體系的甘油濃度應(yīng)低于10%C.連接反應(yīng)緩沖體系的ATP濃度不能高于1mMD.連接酶通常應(yīng)過量2-5倍8(c)T4-DNA連接酶是通過形成磷酸二酯鍵將兩段DNA片段連接在一起，其底物的關(guān)鍵基團(tuán)是A.2'-OH和5'–P B.2'-OH和3'-PC.3'-OH和5'–P D.5'-OH和3'-P9(d)載體的功能是A.外源基因進(jìn)入受體的搭載工具 B.不能為外源基因提供整合能力C.不能提供復(fù)制能力 D.不能為外源基因提供表達(dá)能力10(c)黏性末端連接法，不僅操作方便，而且A產(chǎn)生新切點(diǎn)B易于回收外源片段C載體不易環(huán)化D影響外源基因的表達(dá)11(c)下列哪種克隆載體對(duì)外源DNA的容載量最大?A質(zhì)粒B黏粒C酵母人工染色體(YAC)Dλ噬菌體12(b)考斯質(zhì)粒（cosmid）是一種A.容量最大一種載體B.由λ-DNA的cos區(qū)與一質(zhì)粒重組而成的載體C.是一種單鏈DNA環(huán)狀載體D.不能在受體細(xì)胞內(nèi)復(fù)制，但可以表達(dá)13(d)某一重組DNA的載體部分有兩個(gè)BamHI