達(dá)安血篩項目介紹

達(dá)安基因核酸檢測系統(tǒng)介紹拉薩2017年2月15日1血液核酸篩查>>>一、血液核酸篩查開展的意義二、血液核酸篩查的主要技術(shù)三、血液核酸篩查的開展路線和要求血液篩查血液可以挽救病人的生命同時輸血或血液制品又有傳播疾病的危險

全球每年輸血感染人數(shù)HBV:8,000,000-16,000,000HCV:2,300,000–4,7000,000HIV:80,000-160,000輸血醫(yī)學(xué)從誕生的那一天起，就在不斷尋求如何用血液治療疾病、拯救病人的生命，同時保證血液安全，消除疾病傳播的危險。血源篩查項目（常規(guī)檢測）血源篩查項目（核酸檢測）項目ELISA窗口期項目NAT窗口期HBsAg56HBV25抗-HCV72HCV59抗-HIV22HIV11EIA酶聯(lián)免疫檢測缺陷NAT核酸檢測優(yōu)點(diǎn)較長的血清轉(zhuǎn)換窗口期篩選出處于血清窗口期獻(xiàn)血員病毒株變異避免試劑假陰性（包括病毒株變異引起）免疫靜默期鑒別無抗體反應(yīng)的慢性病毒攜帶者核酸血液篩查(NAT)檢測方法基于病毒核酸的檢測，比血清血方法有著更高靈敏度、更高特異性，能夠更早期地檢測到病原體的感染。NAT核酸檢測不足可以大大縮短窗口期，但是不能完全消除窗口期高靈敏度的特點(diǎn)也造成了出現(xiàn)假陽性的風(fēng)險（產(chǎn)物和樣本間）免疫檢測及分子生物學(xué)檢測單獨(dú)使用均可造成漏檢。血篩與患者生命攸關(guān)，應(yīng)慎之又慎。兩種檢測同時使用，結(jié)果互補(bǔ)，可在目前科技水平下最大程度防止漏檢。血液核酸篩查的背景數(shù)據(jù)血液核酸篩查（NAT）

NucleicAcidTest基于核酸檢測技術(shù)平臺的獻(xiàn)血源性血液篩查。血液核酸檢測主要技術(shù)檢測模式：單人份檢測（IDT）和混合樣本檢測（PooledTesting）提取技術(shù)：主流技術(shù)-----磁珠法核酸提取檢測技術(shù)：主要包括聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）核酸擴(kuò)增檢測

轉(zhuǎn)錄介導(dǎo)的擴(kuò)增檢測（TMA）磁珠法提取磁珠法提取PCR條件靶序列引物探針PCR檢測原理PCR檢測原理PCR檢測原理基線期指數(shù)期對數(shù)期平臺期PCR檢測原理基線期指數(shù)期對數(shù)期平臺期PCR檢測原理基線就是擴(kuò)增曲線的水平部分，PCR最初幾個循環(huán)的熒光信號,基線（空白）信號的產(chǎn)生是由于背景引起的。在這段時間里，熒光信號變化不大，接近一條直線，因此稱為基線。缺省設(shè)置為3-12個循環(huán)的熒光信號。

PCR檢測原理PCR檢測原理CT（Cyclethreshhold）值：到達(dá)閾值熒光信號所需要的循環(huán)數(shù)。PCR檢測原理---內(nèi)標(biāo)設(shè)計原理全程進(jìn)行質(zhì)量監(jiān)控質(zhì)控，參與核酸提取和擴(kuò)增，避免假陰性檢測結(jié)果。內(nèi)標(biāo)自核酸提取步驟開始加入反應(yīng)液中，保證內(nèi)標(biāo)和樣本反應(yīng)條件一致，以反應(yīng)每管真實(shí)的擴(kuò)增情況內(nèi)標(biāo)探針與目標(biāo)基因探針采用不同的熒光報告基團(tuán)標(biāo)記，在不同的波長區(qū)分別檢測，通過檢測內(nèi)標(biāo)是否獲得正常擴(kuò)增來監(jiān)測待測樣本中是否具有PCR抑制物。如果內(nèi)標(biāo)和樣品都未擴(kuò)增出結(jié)果，則表示該管擴(kuò)增無效。

對于PCR檢測體系，IC應(yīng)在一定的CT值范圍內(nèi)。血液核酸檢測開展路線圖血篩核酸項目立項實(shí)驗室建設(shè)、設(shè)備和試劑采購設(shè)備的安裝、調(diào)試、人員培訓(xùn)系統(tǒng)的調(diào)試、試運(yùn)行正式運(yùn)行，每日報告，質(zhì)量反饋血液核酸檢測環(huán)境要求按照衛(wèi)計委頒布的《血站核酸檢測實(shí)驗室質(zhì)量保證指南》實(shí)驗室分為三個區(qū)域

試劑準(zhǔn)備區(qū)（試劑和耗材的存放）

樣本處理區(qū)（DA3500全自動核酸提取儀）

擴(kuò)增分析區(qū)（AFD9600熒光PCR儀）血液核酸檢測環(huán)境要求（1）試劑準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)和擴(kuò)增分析區(qū)三個區(qū)域在物理空間上，必須是完全相互獨(dú)立的，各區(qū)域無論是在空間還是在使用中，應(yīng)始終處于完全的分隔狀態(tài)，不能有空氣的直接相通。（2）各區(qū)的可移動的儀器設(shè)備及各種物品包括實(shí)驗記錄本、記號筆、試管架及清潔用具等必須專用。（3）在標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增分析區(qū)等相對有可能出現(xiàn)“污染物”的區(qū)域安裝獨(dú)立排風(fēng)扇或其它排風(fēng)和有效的通風(fēng)裝置，建議擴(kuò)增后區(qū)域保持負(fù)壓狀態(tài)，以使空氣按試劑準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴(kuò)增分析區(qū)方向流動。血液核酸檢測環(huán)境要求（4）標(biāo)本接收區(qū)域應(yīng)與核酸實(shí)驗室標(biāo)本處理區(qū)域分開，以免過多人員進(jìn)入標(biāo)本處理區(qū)域造成污染。（5）實(shí)驗室應(yīng)具有清潔、消毒設(shè)施，遵從從清潔區(qū)域向污染區(qū)域?qū)嵤┫镜脑瓌t在試驗開始前和結(jié)束后對實(shí)驗室地面、實(shí)驗臺面和空氣實(shí)施清潔和消毒。廢棄物需放置在指定位置或容器?？刹捎孟驹O(shè)備（紫外燈、臭氧消毒裝置）實(shí)施空氣或相關(guān)位置的消毒。血液核酸檢測環(huán)境要求----試劑準(zhǔn)備區(qū)核酸擴(kuò)增實(shí)驗室中最為“潔凈”的區(qū)域，不應(yīng)有任何核酸的存在，包括試劑中所帶的標(biāo)準(zhǔn)品和陽性對照。試劑盒和實(shí)驗用潔凈物品如離心管、吸頭等耗材的存放和準(zhǔn)備處。儀器設(shè)備主要有加樣器、混勻器等。血液核酸檢測環(huán)境要求----標(biāo)本制備區(qū)儀器設(shè)備主要有（加樣設(shè)備、核酸提取儀）、生物安全柜、開蓋機(jī)、離心機(jī)、冰箱等。生物安全柜不應(yīng)放在實(shí)驗室門口等易受人員走動影響的地方，也不應(yīng)直對分體式空調(diào)。主要是用于血液樣本的加樣、核酸樣本的提取。加樣器吸頭必須帶濾芯。血液核酸檢測環(huán)境要求----PCR擴(kuò)增區(qū)儀器設(shè)備主要有實(shí)時熒光定量PCR儀，最好配備不間斷電源（UPS）或穩(wěn)壓電源。關(guān)鍵是要防止擴(kuò)增產(chǎn)物的污染。每次擴(kuò)增后，可使用紫外燈對擴(kuò)增熱循環(huán)儀進(jìn)行照射。擴(kuò)增儀應(yīng)定期進(jìn)行校準(zhǔn)。人員配置實(shí)驗室基本操作人員需要2名質(zhì)量監(jiān)督員1名（可兼職）儀器維護(hù)人員1名（企業(yè)定期提供儀器設(shè)備維護(hù)）核酸檢測實(shí)驗室技術(shù)人員應(yīng)經(jīng)過有資質(zhì)的機(jī)構(gòu)的核酸檢測技術(shù)培訓(xùn)并獲得合格證書，接受實(shí)驗室生物安全以及廠家的上崗前儀器設(shè)備操作、維護(hù)及校準(zhǔn)等的培訓(xùn)。核酸檢測實(shí)驗室應(yīng)有限制進(jìn)入的要求，核酸檢測人員必須經(jīng)授權(quán)許可才能進(jìn)入實(shí)驗室。37標(biāo)本的采集和管理38采血管要求核酸檢測應(yīng)使用帶分離膠的真空采血管，無菌、無DNA酶、無RNA酶，標(biāo)本為血清或者血漿（EDTA或者枸櫞酸鹽抗凝）最好采用含惰性分離膠的EDTAK2真空采血管留取。39標(biāo)本的采集量要求用于核酸檢測的標(biāo)本，標(biāo)本量對檢測非常重要。核酸檢測中，可能會進(jìn)行標(biāo)本確認(rèn)試驗，加之儀器故障等意外原因，增加了標(biāo)本的復(fù)測需求量。達(dá)安的單檢樣本量1.0ml，

考慮各種可能因素，采血量盡量滿足不小于5ml，保證離心后2-3ml。

40標(biāo)本的采集要求嚴(yán)格采用無菌操作技術(shù)進(jìn)行靜脈穿刺。留樣時用針頭刺穿試管密封塞，按照采血管管標(biāo)注的留取量準(zhǔn)確留取，注意使用加抗凝劑的采血管應(yīng)在采血后顛倒混勻5-10次（或按照采血管技術(shù)要求進(jìn)行），使血液與抗凝劑充分混勻。應(yīng)依據(jù)選用的采血管規(guī)格及自動加樣儀的條碼掃描要求在采血管相應(yīng)的位置粘貼。粘貼整齊，無污漬、無劃痕、無缺損。條碼標(biāo)簽底部與試管底部相隔12-14mm的距離；條碼標(biāo)簽貼在樣本管上，使得傾斜角不大于5°。41標(biāo)本采集后的處理與保存要求標(biāo)本在采血現(xiàn)場保存溫度通常為2-10℃。采集后的標(biāo)本宜在4小時內(nèi)實(shí)施離心，分離紅細(xì)胞和血漿（1200-1600g，20min）。如不能按上述要求處理采集的標(biāo)本，應(yīng)對所采用（集）的標(biāo)本保存、處理（離心時間和條件）等條件進(jìn)行保證弱陽性樣本有效檢出的確認(rèn)。42標(biāo)本的運(yùn)送要求標(biāo)本應(yīng)隔離密封包裝，包裝材料應(yīng)滿足防水、防破損、防外泄、易于消毒處理。裝箱時應(yīng)保持標(biāo)本管口向上。同時運(yùn)輸溫度應(yīng)在2-10℃，標(biāo)本和冷源不要直接接觸，并有溫度監(jiān)測措施。43標(biāo)本接收要求標(biāo)本接收時應(yīng)仔細(xì)核對標(biāo)本數(shù)量與送檢單是否一致，建議采用計算機(jī)程序進(jìn)行核對。特別強(qiáng)調(diào)標(biāo)本采集時所留取標(biāo)本的采血管均需逐一掃描，以保證不同采血管的同源性。運(yùn)輸過程溫度應(yīng)保持在2-10℃范圍內(nèi)，容量符合采血管標(biāo)注的采集量，標(biāo)本應(yīng)無嚴(yán)重溶血、脂血、凝血、滲漏。標(biāo)簽條形碼清晰，無血漬、無劃痕，粘貼符合要求，離心后運(yùn)送的標(biāo)本血漿和紅細(xì)胞應(yīng)被分離膠隔離。

44標(biāo)本拒收如有以下情形應(yīng)拒收標(biāo)本：檢測申請關(guān)鍵信息缺失或不符；標(biāo)本管無標(biāo)識或標(biāo)識不清、錯誤；標(biāo)本管選用錯誤；嚴(yán)重溶血、脂血等影響檢測結(jié)果的情形；采血量不能滿足檢驗需要量；采樣到送檢時間超過規(guī)定期限；離心后送檢標(biāo)本未達(dá)到離心效果（如分離膠膠面不平整等）。45標(biāo)本接收后的處理及保存要求標(biāo)本在檢測前應(yīng)保存在2-8℃條件下，并于采樣后72小時內(nèi)完成核酸檢測。因特殊情況72小時以內(nèi)不能完成檢測的標(biāo)本應(yīng)在-20℃以下凍存。標(biāo)本應(yīng)在檢測前從冰箱取出平衡至室溫，觀察其管壁外部有無冷凝水，以免影響條碼的掃描。真空采血管的開蓋應(yīng)在生物安全柜或正壓環(huán)境中進(jìn)行，自動開蓋和手工開蓋均應(yīng)有防止樣本交叉污染的措施。標(biāo)本在進(jìn)行檢測后應(yīng)密閉保存在2-8℃，等待結(jié)果全部確認(rèn)無誤后進(jìn)行處置或長期保存。2達(dá)安血篩系統(tǒng)>>>一、NAT系統(tǒng)組成二、系統(tǒng)的技術(shù)特點(diǎn)三、系統(tǒng)的操作流程和維護(hù)血篩和臨床的區(qū)別定性與定量臨床使用核酸檢測主要目的是定量監(jiān)測，進(jìn)行療效分析。血篩用于病原體的定性篩查靈敏度和特異性臨床在漏檢與誤差之間更重視誤差血液篩查用核酸目的是保證用血安全，更重視漏檢質(zhì)控要求不同臨床用與血液篩查用質(zhì)控要求也不同。臨床試劑以定量準(zhǔn)確和防止誤報為質(zhì)控目標(biāo)血篩用以防止漏檢為主要目的陽性率也不同臨床更多的陽性；血篩更多是陰性對自動化要求不同臨床更多用于病人,單人份檢測,標(biāo)本量少血篩更多用于正常人，因此檢測量不同，對自動化的要求也不同49達(dá)安血篩系統(tǒng)技術(shù)路線單檢篩查檢測---血站系統(tǒng)單個標(biāo)本（1.0ml/個樣本）核酸提取---磁珠法（旋轉(zhuǎn)式混勻+轉(zhuǎn)移磁珠式提取）核酸檢測---實(shí)時熒光PCR技術(shù)質(zhì)量控制---內(nèi)標(biāo)質(zhì)控/UNG酶防污染采用轉(zhuǎn)移磁珠的核酸提取模式--（上吸磁法）轉(zhuǎn)移磁珠（上吸磁法）：通過一次性套管進(jìn)行混勻，并用磁棒進(jìn)行磁珠轉(zhuǎn)移動作：操作步驟簡單：避免移液操作引起的交叉污染，縮短核酸處理時間，避免由于時間過長導(dǎo)致核酸的降解。液體混勻和洗滌充分：磁珠核酸結(jié)合和洗滌效率高，保證了核酸的得率和純度。節(jié)省一次性吸頭的使用量：減少耗材的使用成本。轉(zhuǎn)移液體（下吸磁法）：通過移液通道和震蕩模塊進(jìn)行混勻，并進(jìn)行多次的液體轉(zhuǎn)移動作：容易產(chǎn)生氣泡，造成移液過程交叉污染；容易產(chǎn)生液體殘留：導(dǎo)致核酸純化不足，從而抑制擴(kuò)增，影響靈敏度或造成假陰性；增加了一次性吸頭的用量和移液通道的損耗。轉(zhuǎn)移磁珠的核酸提取模式（上吸磁法）系統(tǒng)組成生物樣本安全操作自動化系統(tǒng)全自動核酸處理平臺實(shí)時熒光定量PCR儀信息自動化處理平臺血源篩查HBV、HCV、HIV-1病毒核酸檢測試劑盒（PCR熒光探針法）假病毒內(nèi)標(biāo)質(zhì)控系統(tǒng)&UNG-dUTP國際化防污染系統(tǒng)專一化單項目檢測：保證檢測結(jié)果的特異性和靈敏度，降低混合感染（混合樣本）不同檢測項目間干擾和抑制。多種PCR引物探針體系：基因覆蓋廣，有效防止病毒突變引起的假陰性，降低漏檢。高性能的混樣檢測靈敏度：1ml樣本體積+高效的擴(kuò)增體系，降低混樣檢測漏檢。直接提供單項病毒檢測結(jié)果：選用相同的高效擴(kuò)增程序，2h同時給出單項病毒的檢測結(jié)果，無需鑒別。試劑盒儲存溫度核酸提取試劑室溫保存核酸擴(kuò)增試劑

和質(zhì)控品-20℃保存血源篩查標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和質(zhì)控品溯源性：各系列標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)可溯源至國家一級標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)或WHO標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。準(zhǔn)確度：產(chǎn)品溯源性強(qiáng)，量值的準(zhǔn)確度高。穩(wěn)定性：采用先進(jìn)生產(chǎn)工藝，嚴(yán)格的生產(chǎn)質(zhì)量體系，保證產(chǎn)品的質(zhì)量穩(wěn)定性與均一性。?；ネㄐ裕壕鶠橐簯B(tài)標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)，無需重新復(fù)融，操作簡單且無基質(zhì)效應(yīng)。產(chǎn)品和臨床樣本互通性好。多種組合：已獲批準(zhǔn)17項國家二級標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)定級證書，包含血源性篩查核酸類和酶免類系列質(zhì)控物質(zhì)為客戶提供多種組合和選擇。全自動試管開蓋機(jī)高效率：一次操作時間<40秒，每小時3600-4000份標(biāo)本；

減輕醫(yī)務(wù)人員勞動強(qiáng)度。安全：

★每個標(biāo)本在相對獨(dú)立的空間進(jìn)行開蓋作業(yè)，避免樣本間交叉污染；★自帶高效空氣過濾器，過濾開蓋空間空氣。過濾效率達(dá)99.99%；

★試管架具有防滑脫功能，避免試管架翻倒造成試管跌落；靈活：★

一次操作，最多可同時開啟40孔管蓋；

★同管徑，不同高度試管在同一試管架上操作，無需分類上架作業(yè)。簡單：一鍵式操作，只需放上試管架，按下“啟動”鍵，30-40秒完成整個過程。57生物樣本前處理在分子生物學(xué)檢測中的重要性樣品結(jié)果取樣、保存、編碼等核酸提取檢測反應(yīng)前處理（>70%管理投入）樣品保存不當(dāng)運(yùn)輸成本過高保存成本過高樣品混淆交叉風(fēng)險提取失敗人力管理分析前分析中/后文獻(xiàn)報告臨床檢測中60%錯誤是來自于

樣品前處理直接影響結(jié)果：靈敏度+重復(fù)性間接影響：人力投入、管理投入、風(fēng)險投入生物樣本前處理質(zhì)量控制核酸提取的得率核酸提取的純度核酸提取的完整性核酸提取的特異性DA3500全自動核酸處理平臺-DA3500全自動加樣、核酸提取、純化、PCR加樣一體化，減少人工操作可進(jìn)行大體積樣本核酸提取，保證核酸得率采用TECAN空氣置換式移液模塊ADP?穩(wěn)定可靠的移液操作平臺高磁通量的磁珠分離轉(zhuǎn)移，磁珠回收率高采用磁棒旋轉(zhuǎn)式混勻技術(shù)，保證磁珠懸浮充分，避免震蕩混勻方式對核酸結(jié)構(gòu)的破壞，提取核酸的純度更高，效果更好，保證核酸的純度和完整性，降低氣溶膠的風(fēng)險全中文系統(tǒng)，可根據(jù)試劑的要求，利用程序編輯功能，靈活、高效地編輯